Polymerázová řetězová reakce (PCR) v molekulární biologii se nazývá experimentální metoda detekce virů. Umožňuje významně zvýšit koncentraci určitých fragmentů nukleové kyseliny (DNA) ve vzorcích biologického materiálu, což umožňuje určit (rozpoznat) a počítat je.

Analýza se provádí následovně. Genetický materiál (vzorek krve), který potenciálně může obsahovat požadovaný gen, se zavede do zkumavky. Tam jsou také umístěny primery - chemicky syntetizované malé délky požadovaného genu.

Do nádoby je také přidána DNA nebo RNA polymeráza, která je schopna vytvořit řetězec nukleové kyseliny, který je zcela identický s původním řetězcem. Sada čtyř volných nukleotidů, speciální stavební materiál pro RNA nebo DNA, z nichž jedna obsahuje radioaktivní částice fosforu, se také zavádí do výsledné kompozice.

Výsledná směs se zahřeje na teplotu 95 až 96 ° C, kvůli níž se obě spirály DNA, které se v obvyklém stavu překrývají, rozplývají. Poté se preparát ochladí, v tomto okamžiku se primery připojují k požadované oblasti virového genomu, aniž by RNA (nebo DNA) znovu vytvořila dvojitou šroubovice.

Během chlazení polymeráza vyhledává volný řetězec nukleotidů. Pro fungování tohoto enzymu je nutný jediný řetězec nukleotidů. Vzhledem k tomu, že polymeráza klouže podél řetězce DNA (jako prsten pomocí lana), nemůže pracovat na dvojité šroubovice.

Poté se provádí opakovaný cyklus zahřívání, díky kterému jsou nukleotidové řetězce odděleny. Pro každý z těchto cyklů PCR se množství požadovaného genu hepatitidy ve vzorku zvyšuje v geometrické progresi a zbytek genetického materiálu se produkuje lineárně.

Po čištění roztoku nukleotidových zbytků a oddělení DNA řetězců parametrem molekulové hmotnosti od elektroforézy je snadné určit, zda požadovaný gen existuje ve zkušebním vzorku nebo ne.

Výhody PCR

Laboratorní studie používající metodu PCR umožňuje získat ještě více informací než jednoduše přítomnost RNA viru. Při stanovení parametru úrovně radioaktivního záření je možné určit, jaké množství genetického materiálu bylo původně obsaženo ve studovaném vzorku. V případě hepatitidy určit míru virové zátěže.

Další výhodou této metody je velmi vysoká citlivost CR reakce. Je mnohem vyšší než klasické metody detekce virů. V ideálním případě pro identifikaci požadovaného genu je pro PCR dostatečný pouze jeden virus ve vzorku.

Navíc PCR je zcela specifická. Jeho primery jsou vytvořeny tak, aby plně odpovídaly jedinečným částem požadovaných genů, které nemá žádná jiná sekvence. Obě otisky prstů jsou jedinečné a v každém genu existují jedinečné sekvence nukleotidů.

Kvalitativní analýza PCR

Kvalitativní analýza pouze odhaluje přítomnost viru v krvi. Tento test by měl být proveden u všech pacientů, u kterých bylo zjištěno, že mají v krvi protilátky proti hepatitidě C. Výsledkem může být pouze jedna ze dvou hodnot: "zjištěna" nebo "nebyla zjištěna". U zdravého člověka by norma (referenční hodnota) neměla být "zjištěna".

Existuje také speciální interpretace takových výsledků provedeného kvalitativního výzkumu:

• Výsledek je "objeven". To znamená, že ve vzorku biologického materiálu, se kterým bylo nalezeno RNA fragmentu, který je specifický pro viru hepatitidy C V důsledku toho je skutečnost, že u pacienta s infekci virem hepatitidy B s C-li výsledek kvalitativní PCR je „objevil“, znamená to, že virus opakování a v tomto okamžiku infikuje nové jaterní buňky v těle.
• Výsledek je "nezjištěn". Takové rozhodnutí ukazuje, že ve vzorku biologického materiálu získaný fragment RNA není v laboratoři, která je specifická pro HCV RNA buď stejné koncentraci patogenu infekce ve vzorku byla pod hranicí citlivosti testu detekován.

V akutní fázi RNA viru hepatitidy C mohou kvalitativní studie s použitím PCR techniky odhalit po 1-2 týdnech bezprostředně po infekci těla, tj. Dlouho před vznikem protilátek proti samotné hepatitidě.

Nespolehlivé výsledky analýz takového šetření lze získat u:

• kontaminovaný biomateriál;
• přítomnost heparinu v krvi pacienta;
• přítomnost ve vzorku chemických nebo bílkovinných látek (inhibitorů), které ovlivňují různé složky PCR.

Pro kvalitativní analýzu PCR není nutná zvláštní příprava pacienta pro studium. Venózní krev se používá jako materiál.

Hodnocení výsledků

Kvalitativní testy PCR mají určitý stupeň citlivosti a v závislosti na přesnosti výzkumu a úroveň vybavení v laboratoři se může pohybovat mezi 10 a 500 IU / ml.

To znamená, že pokud je virus ve vzorku krve přítomen ve velmi nízké koncentraci (nižší než prahová citlivost daného laboratoře), pacienta pacienta lze určit jako "nezjištěný". Z tohoto důvodu je při provádění kvalitativní analýzy PCR s nízkou úrovní viremie (nízká koncentrace viru) například u pacientů podstupujících antivirovou terapii velmi důležité znát práh citlivosti tohoto diagnostického systému.

Varianty diagnostických systémů

Pro kontrolu virologické odpovědi se doporučuje antivirová léčba používat diagnostické systémy s prahem citlivosti minimálně 50 IU / ml. Tato kritéria jsou splněny, například: analyzátory COBAS Ampicolor HCV test (c přesnost 50 IU / ml) a RealBest HCV RNA (s citlivostí 15 IU / ml).

Podle doporučení WHO pro vytvoření konečné diagnóze hepatitidy C, musí být založeno pouze na základě trojitého detekce RNA viru ve vzorcích séra od pacienta s žádnými jinými druhy hepatitidy markeru.

Kromě metod PCR se pro detekci HCV RNA u pacientů používá také studie TMA (metoda transkripční amplifikace). Má nejlepší citlivost (5 až 10 IU / ml), ale u nás tato metoda testování ještě není příliš častá.

Rozsah zjištěných změn virů

Toto kvalitativní stanovení přítomnosti RNA viru hepatitidy C v séru umožňuje určit několik genotypů tohoto viru. V současné době vede věda více než šest genotypů tohoto viru, stejně jako asi 10 podtypů onemocnění.

Vírusy 1, 2, 3 genotypů jsou běžné v naší zemi. Laboratoře mohou identifikovat následující genotypy: 1a a 1b, 2a, 2b a 2c, a 3, 4, 5a a 6 bez ohledu na podtypy. Pro všechny modifikace viru je specificita detekce 100%.

Kvantitativní analýza PCR

Pomocí kvantitativního testu PCR se určí koncentrace viru hepatitidy ve vzorcích krve (virové zátěž). Tento test viremie (koncentrace viru) umožňuje určit počet jednotek specifického genetického materiálu (nejvíce virové RNA), který je detekován v určité míře. V tomto případě určete jeho koncentraci v 1 ml, což odpovídá 1 cu. viz

Kvantitativní parametry analýzy jsou vyjádřeny na obrázcích pro toto použití jako jednotky měřicích mezinárodních jednotek (IU) na mililitr (ml), označené jako ME / ml. Nyní v některých laboratořích může být množství viru stanoveno v jiných jednotkách: počet kopií na ml je označen jako kopie / ml.

• Na hepatitidě C se taková kvantitativní analýza PCR provádí těsně před zahájením léčby. Pak na 1., 4., 12. a 24. týdnu. Hodnocení v 12. týdnu je orientační, umožňuje určit účinnost terapie.
• Příprava na analýzu. Pro kvantitativní analýzu PCR není nutná zvláštní příprava pacienta pro studii. Půl hodiny před odběrem byste neměli kouřit. Venózní krev se používá jako laboratorní materiál.

Hodnocení výsledků

U různých laboratorních testovacích systémů existují pro tento ukazatel různé přepočítací koeficienty v IU / ml. V průměru se používá konverzní parametr, ve kterém jsou 4 kopie / ml = 1 IU / ml. To znamená, že pokud laboratoř dává výsledek analýzy PCR 2,4 * 10 6 kopií / ml, pak by měl být tento parametr rozdělen na 4 a dostaneme 6 x 105 5 IU / ml.

Vysoká zátěžová hladina 800 000 IU / ml je považována za vysokou, což je přibližně ekvivalentní indexu 3 000 000 kopií / ml. Nízkou viremii podle některých autorů odpovídají parametry kvantitativní PCR nižší než 400 000 IU / ml.

V důsledku kvantitativního testu nelze konečné výsledky doručit ve formě digitální hodnoty, ale: "pod měřicím rozsahem" nebo "nezjištěným".

• Hodnocení: "pod měřicí rozsah". To naznačuje, že kvantitativní test nedokázal detekovat virovou RNA viru hepatitidy C, ale samotný virus je přítomen v těle ve velmi malých koncentracích. To je indikováno dodatečným kvalitativním testem, který potvrzuje přítomnost viru.
• Hodnocení: "nezjištěno". Tento výsledek naznačuje, že kvantitativní test nezjistil virus ve vzorku RNA.

Parametr virové zátěže určuje nejprve stupeň infekčnosti onemocnění, úroveň "infekčnosti" pacienta. Čím vyšší je koncentrace viru pacienta, tím větší je pravděpodobnost jeho přenosu jiným lidem. Například při sexu se špatnou osobou nebo vertikální cestou. Takový kvantitativní indikátor také pomáhá určit účinnost léčby pacienta.

Provádění kvantitativní analýzy PCC je důležité pro antivirovou terapii, vyhodnocení jejího úspěchu a plánování trvání kurzu. Takže s rychlou reakcí těla na léčbu a nízkým stupněm viremie může být trvání terapie sníženo.

Při pomalém snížení kvantitativního parametru PCR by měla být antivirová léčba prodloužena nebo upravena. Pokud je úroveň virové zátěže nízká, pak je to příznivý faktor terapie, je-li vysoká, pak je použitá metoda léčby neúčinná a drogy nebo metody jejich užívání by měly být změněny.

№ 321 СВ, Virus hepatitidy С, definice RNA kach. (HCV-RNA, kvalitativní) v séru

Stanovení HCV RNA v séru polymerázovou řetězovou reakcí (PCR) s detekcí v reálném čase.

Vybrané fragment - specifické RNA porce detekovatelné HCV genotypy: 1a, 1b, 2a, 2b, 2c, 2i, 3, 4, 5a, 6, bez ohledu na podtyp. Specifičnost stanovení je 100%. Citlivost stanovení je 60 IU / ml.

• Klinické příznaky hepatitidy.
• Profylaktické screeningové studie (RNA viru hepatitidy C - nejstarší marker pro akutní infekci).
• Průzkumy kontaktních osob.
• Diagnostika hepatitidy smíšené etiologie - identifikace předního viru.
• Identifikace stupně aktivní replikace viru v chronickém stavu.
• Kontrola účinnosti léčby.
• Cirhóza jater.

Interpretace výsledků výzkumu obsahuje informace pro ošetřujícího lékaře a není diagnózou. Informace z této části nelze použít pro vlastní diagnostiku a samoléčbu. Správnou diagnózu provádí lékař, a to jak s použitím výsledků tohoto průzkumu, tak s potřebnými informacemi z jiných zdrojů: anamnéza, výsledky dalších průzkumů atd.

Diagnostika pomocí PCR pro hepatitidu C

Ne každý ví, jak se používá diagnostická metoda PCR pro hepatitidu C. Jednou z nejrozšířenějších skupin onemocnění jsou infekční onemocnění trávicího traktu. Nejčastěji trpí žaludkem (vředy), střevem (kolitida, enteritida) a játry (hepatitida).

Na játrech mezi všemi výše uvedenými orgány je přidělen největší zátěž. V těle je důležitá roli jater:

1. Téměř všechny metabolické reakce se vyskytují v játrech (tady jsou všechny důležité součásti, které tělu umožňují plně fungovat).
2. Játra jsou hlavním orgánem, který provádí funkci detoxikace. S jeho pomocí (zejména přes žluč) je odstraněno mnoho substrátů, které mohou způsobit intoxikaci a mít vážné následky.

Bohužel mnoho lidí nedodržuje své zdraví kvůli tomu, co játra začnou trpět. Obvykle se rozvíjí hepatitida různých typů etiologie (virové, toxické).

Definice hepatitidy

Vírová hepatitida zaujímá významné místo mezi onemocněními jater. Závažnost průběhu onemocnění, složitost léčby, z nich činí první mezi patologie jiné povahy tohoto orgánu.

Všechny hepatitidy jsou rozděleny na akutní a chronické. Akutní přenos hepatitidy A a B. Mezi chronické na prvním místě je hepatitida C.

Toto onemocnění je způsobeno virem hepatitidy C. Charakteristickým znakem je, že onemocnění může trvat dlouho bez jakýchkoli klinických projevů.

Přenáší se hlavně krví. S průtokem krve vnikne virus do jater, kde se začne množit v buňkách. V důsledku akumulace virionů dochází k destrukci infikovaného hepatocytů. V odezvě začínají produkovat protilátky, které začínají napadat pozůstatky hepatocytů. Kvůli tomu se v průběhu času vytváří bazén proti jaterním buňkám, což zhoršuje průběh onemocnění.

Vzhledem k tomu, že onemocnění je asymptomatické nebo asymptomatické a klinické příznaky se objevují pouze s významným poškozením buněk, vyžaduje toto onemocnění vytvoření diagnostických metod pro identifikaci jejich přítomnosti a přijetí vhodných opatření.

Diagnostika hepatitidy C: kvalitativní a kvantitativní analýzy

V současnosti se pro diagnostiku hepatitidy C používají takové metody, jako je jaterní biopsie, imunogram.

Umožňují přímo stanovit přítomnost postižených hepatocytů (studie biopsie jater) nebo specifické protilátky proti infikovaným buňkám (imunogram). Existuje však metoda, která může spolehlivě určit přítomnost samotného viru. Tato PCR je polymerázová řetězová reakce.

Podstata této metody spočívá ve skutečnosti, že za určitých podmínek dochází k vývoji řetězců RNA. To je způsobeno tím, že fragmenty virové částice jsou v krvi nebo vzorku biopsie. Když jsou v médiu kombinovány s některými molekulami, dochází k syntéze řetězců komplementárních k virové RNA. Při jejich následné analýze a srovnání se známou nukleotidovou sekvencí viru hepatitidy C je možné určit, zda existuje nějaký virus v těle a zda je přítomno poškození jater.

PCR se provádí po detekci specifických protilátek proti viru hepatitidy v krvi. Po provedení testu je výsledek vykreslen - RNA je "detekována" nebo "není detekována". Občas může říkat "nedostatek materiálu" - v tomto případě opakovaná analýza hepatitidy C.

Pokud je počet virových částic je menší, než je požadovaná minimální množství, pak můžeme hovořit o tom, že proti hepatitidě B není přítomen, a minimální množství genetického materiálu by mohla být „zaměnit“, protože mimikry genetického materiálu, nebo některé sekvence nukleotidů, které šance mohl shodovat s tím viru.

1. PCR negativní výsledky mohou být, ale ve skutečnosti jsou virové částice v krvi, ale jsou tak malé (infekce v poslední době došlo nebo analýza předcházelo dlouhé a intenzivní antivirové terapie), že testovací systém jednoduše nebyl schopen správně stanovit jejich koncentraci. RNA - "nezjištěno".
2. Pokud má PCR pozitivní výsledek, je v krvi tolik virových částic, že ​​jejich počet překračuje nižší prahovou hodnotu citlivosti testovacího systému. V tomto případě je riziko vzniku infekčního procesu vysoká (nebo je již přítomna v poměrně opomíjené fázi). Obvykle je vysoké množství viru již indikací pro léčbu a následnou transplantaci jater.

Někdy se test může stát falešně pozitivní nebo falešně negativní.

Falešně negativní výsledek hepatitidy PCR se pozoruje, když v reakčním médiu existují některé složky, které inhibují tvorbu kopií virové částice. Z tohoto důvodu není možné získat skutečný obraz o stavu krve, který přispívá k průchodu viru a k progresi onemocnění. Reakce může být ovlivněna přítomností heparinu v krvi (kvůli poklesu relativní viskozity krve). Nesprávná interpretace analýzy je možná také tehdy, pokud nebyly splněny podmínky pro přepravu a skladování zkušebního materiálu.

Falešně pozitivní výsledky, pokud je diagnostikována hepatitida C, se nejčastěji vyskytuje v případě, že je zkumavka nebo pracovní médium kontaminovány. Kromě toho mohou být pozorovány pozitivní výsledky za přítomnosti a virů hepatitidy jiných skupin (kvůli zkřížené reakci).

Kvalitativní analýza PCR pro detekci hepatitidy C

Přítomnost velkého množství kryoglobulinů v krvi přímo ovlivňuje i provádění PCR. Z tohoto důvodu před analýzou hepatitidy C je nezbytné stanovit koncentraci v krvi, aby bylo možné předem odhalit zkreslení výsledku a předejít tomu.

Po provedení specifikovaných testů je zřejmé, zda jsou přítomny částice viru v krvi. Pokud jsou definovány, doporučuje se ihned zahájit antivirovou terapii, aby se zpomalil postup procesu. Na rozdíl od hepatitidy B neexistuje úplná léčba hepatitidy C; tato choroba přechází do latentního stavu a začne proudit pomaleji. Porážka jater je nevyhnutelná. V poslední fázi procesu, kdy játra již nesplňují svou funkci, může být nutné transplantovat.

Léčba se provádí především dvěma léky - interferonem a ribavirinem.

Jejich účinnost při zpomalování procesu léze hepatocytů je prokázána. Mezitím je nutné podávat infúzní terapii, aby se usnadnila práce na játrech.

Všichni pacienti, kteří zaznamenali nárůst počtu virových částic v krvi, jsou nezbytně na účtu hepatologa. Několikrát ročně se doporučuje, aby podstoupili preventivní vyšetření k určení postupu a včasné detekci indikací pro transplantaci. Kromě toho můžete použít i hepatoprotektory, i když názory lékařů se poněkud liší. Někteří věří, že tyto léky mohou zastavit proces a chránit nezhojené hepatocyty; Jiní jsou přesvědčeni, že nemá smysl užívat je a že by měla být prováděna intenzivní antivirová terapie.

Hepatitida C tedy patří do kategorie onemocnění, jejichž odhalení představuje určité potíže. Zlepšení diagnostických metod, stejně jako včasná preventivní vyšetření sníží výskyt této choroby. Je také důležité zabránit této nemoci. Měli byste se pečlivě vyhýbat kontaktu s krví, odmítat užívat drogy, teprve poté bude tato nemoc odstraněna. Hlavním důvodem prevence a léčby je vědomý postoj pacienta k jeho zdraví.

Analýza PCR pro hepatitidu

PCR na hepatitidě C

1. RNA hepatitidy C ( „PCR-kvalita“) - detekce v analýze krve je důkazem akutní nebo chronické hepatitidy C se určí z ve 2. týdnu infekce, se před anti-HCV, což umožňuje diagnostikovat onemocnění v časných stádiích. Stanovení RNA se provádí u pacientů s klinickou akutní hepatitidou B a u pacientů s pozitivním testem na hepatitidu.
2. RNA hepatitidy C ("Kvantitativní PCR") - virové zátěž - jeden z indikátorů účinnosti antivirové terapie a jejího hodnocení (změnou úrovně z počáteční hodnoty). Kvantitativní charakterizace obsahu hepatitidy C RNA je důležitá pro hodnocení účinnosti antivirové terapie a má prognostický význam pro stanovení chronicity. Pacienti s vysokou virovou zátěží (vysoké množství RNA) před léčbou reagují horší na léčbu.
3. RNA hepatitidy C (genotypy 1, 2, 3) - Druh léčby závisí na typu a účinnosti. Onemocnění způsobené virem genotypu 1 je nejpříznivější z hlediska prognózy účinnosti terapie. Podle současných doporučení by měl být před zahájením antivirové léčby proveden krevní test pro genotypizaci hepatitidy C.
4. RNA hepatitidy C (rozšířené genotypizace la, 1b, 2, 3a, 4, 5, 6) - na území Ruska cirkulují subtypy 1a, 1b, 2a, 2c, 2k, 3a. Hepatitida C, způsobená virem genotypů 1 a 4, je nejvíce nepříznivá z hlediska prognózy.
5. Ultrasenzivní PCR pro hepatitidu C (kvalitativní metoda) - Analýza se používá k diagnostice onemocnění v časných stádiích infekce, je optimální pro testování krve a vyhodnocení reakce na antivirové léčby. Tato studie i v případě, nezjištěných protilátky proti hepatitidě typu C, se doporučuje provádět pacientů s onemocněním jater nespecifikovaných důvodů, c získané imunitní nedostatečnosti, nebo přijímání imunosupresivní terapií.
6. Ultrasenzivní PCR pro hepatitidu C (kvantitativní metoda) - jedinečná analýza s vysokou citlivostí (10 IU / ml) pro stanovení RNA viru hepatitidy C v kvantitativním vyjádření. Studie se používá k monitorování účinnosti léčby.

PCR na hepatitidě B

1. DNA z hepatitidy B (kvalitativní analýza) - index reprodukce viru hepatitidy B. Nejprve se objeví v krvi, v průměru 1 měsíc po infekci. V některých případech je to jediný marker latentní infekce HBV. Stanovení DNA viru umožňuje diagnostikovat hepatitidu B způsobenou mutantními kmeny, u kterých nejsou detekovány jiné markery infekce.
2. DNA z hepatitidy B (kvantitativní analýza) - Koncentrace DNA (virové zátěž) je jedním z testů používaných k určení fáze chronické hepatitidy B a účinnosti antivirové terapie. Analýza probíhá před a během léčby.
3. Genotypizace hepatitidy B - nemoci způsobené různými genotypy viru se mohou v klinickém průběhu a výsledku lišit. Hepatitida B, způsobená virem genotypu C, často trvá chronickým průběhem a má vysoké riziko transformace na cirhózu jater nebo hepatocelulárního karcinomu. Pacienti infikovaní virem genotypu A lépe reagují na léčbu.
4. Ultrasenzivní DNA-PCR pro hepatitidu B (kvalitativní metoda) - předá je za včasné zjištění nemoci. Vysoce informující ve studiích krve dárce. Může být použita k potvrzení spontánního nebo léčivého odběru viru z lidského těla.
5. Ultrasenzivní PCR pro hepatitidu C (kvantitativní metoda) - diagnostiku DNA viru hepatitidy B v kvantitativním vyjádření. Byla provedena analýza účinnosti léčby.
6. Stanovení mutací rezistence na antivirotika lamivudin, telbivudin, entecavir, adefovir, tenofovir (společně s analýzou "kvantitativní DNA pro hepatitidu B"). Aby bylo možné předložit analýzu, je nezbytné, aby pacienti s chronickou hepatitidou B byli před zahájením antivirové terapie a během podávání léků. Výsledek obsahuje informace o dostupnosti rezistence viru hepatitidy B k antivirovým lékům:
   • R - virus je rezistentní na antivirové léčivo (byly detekovány rezistenční mutace tohoto léku);
   • S - virus hepatitidy B je citlivý na drogu (norální hodnota, mutace rezistence nejsou detekovány);
   • I - příčinou infekce může být rezistence k tomuto léku.

Studie PCR pro hepatitidu C: typy, indikace, přepis

Virová hepatitida C je vážné onemocnění, které se objevuje při poškození jater. U osmdesáti procent pacientů přechází do chronické formy. Vírus se množí v jaterních buňkách - hepatocytech - a způsobuje jejich smrt. Mrtvé tkáně jsou nahrazeny ložisky pojivové tkáně, fibróza se vyvíjí.

S rozvojem fibrózy jater, je schopen plnit svou funkci, začíná cirhóza, což je nebezpečné pro jeho komplikací: zvyšující se tlak v portální žíle, gastrointestinální krvácení, poruchy srážlivosti krve, mentální změny kvůli poškození mozku jádra toxických produktů.

Příčinou onemocnění je infekce virem z rodiny Flaviviridae, což je typ viru RNA. To znamená, že genetický materiál, kterým jsou syntetizovány proteiny patogenu, je kódován molekulou ribonukleové kyseliny. Infekce nastává skrze krev, sexuálně a od těhotné ženy až po plod. Bohužel mezi infekcí a počátkem produkce protilátek může proběhnout poměrně velká doba - od dvou týdnů do šesti měsíců. To neumožňuje stanovení infekce metodou enzymového imunoanalýzy a zahájením léčby v časných stádiích.

Co je analýza PCR?

PCR je metoda molekulární analýzy, která umožňuje detekci genetického materiálu patogenu již v prvním týdnu po infekci za použití polymerázové řetězové reakce. Studie má vysokou specificitu, přesnost a umožňuje nejen stanovit přítomnost nebo nepřítomnost viru, ale i jeho koncentraci a genotyp.

Pro studii si vezměte pacientovu krev, v níž se může potenciálně nalézt RNA viru. Krev se přidá primerů - uměle syntetizované krátké délce části požadovaného genu a RNA polymerázu - speciální enzym, který násobí množství genetického materiálu patogenu. Pomocí speciálního přístroje se provádí několik cyklů vytápění a chlazení. Materiál je pak analyzován a porovnán se známými virovými geny, na základě kterých se dospěje k závěru o přítomnosti nebo nepřítomnosti infekce.

Typy PCR analýzy pro hepatitidu C

Existují tři typy analýzy PCR:

1. Kvalitativní analýza PCR. První fáze studie. Umožňuje vám identifikovat genetický materiál viru v krvi.

Kvantitativní analýza PCR. Umožňuje určení virové zátěže - koncentrace genetického materiálu patogenu v jednom mililitru krve. Tato studie se provádí před zahájením léčby a poté v první, čtvrté, dvanácté a (pokud je kurz dlouhý) ve dvacátém čtvrtém týdnu léčby, aby se vyhodnotila jeho účinnost.

Genotypizace. Příčinný faktor hepatitidy C se často a rychle mění. Na planetě bylo nalezeno sedm variant genotypu tohoto viru. V Rusku jsou společné první, druhé a třetí typy. Každý z genotypů má jinou rezistenci k terapii, například účinnost léčby prvního typu je šedesát procent a pro druhý a třetí dosahuje osmdesát pět. Proto, aby bylo možné vybrat vhodná léčiva a předepsat dostatečnou dobu trvání léčby, je nutné přesně určit, jaký typ viru je pacient infikován.

Indikace pro analýzu PCR pro hepatitidu C

Studie PCR je předepsána v následujících případech:

• kontakt s nemocnou, která by mohla vést k infekci;
• pozitivní imunoanalýza spojená s enzymem;
• příznaky jaterní cirhózy: změny velikosti jater, zvětšení sleziny, výskyt podkožního žilního plexu na břiše;
• výskyt příznaků poškození jater: bolesti na pravé straně břicha, zožnění kůže;
• zvýšená aktivita ALT a AST v biochemické analýze krve;
• před zahájením léčby k určení virové zátěže;
• sledovat účinnost antivirové léčby;
• po dokončení léčby k monitorování relapsu;
• v přítomnosti diagnostikované hepatitidy B, aby se vyloučilo smíšené poškození jater.

Dekódování studie PCR pro hepatitidu C

Dekódování analýzy PCR a enzymového imunoanalýzy pro hepatitidu C by mělo být řešeno specialistou na hepatologii nebo na infekční nemoci. Analýza výsledků PCR je nezbytná v kombinaci s biochemickým vyšetřením krve, biopsií a ultrazvukem. Pouze kvalifikovaný lékař bude schopen analyzovat výsledky studií a na základě nich předepsat správnou léčbu.

Dekódování kvalitativní analýzy.

Genetický materiál patogenu byl nalezen v analyzovaném biologickém materiálu. Infekce je potvrzena.

Neexistuje žádná infekce nebo množství RNA patogenu je pod hranicí citlivosti.

Dekódování kvantitativní analýzy.

Normální postava pro zdravé lidi. To znamená, že v testovaném materiálu není přítomna žádná RNA hepatitidy C nebo její koncentrace je pod prahem citlivosti studie.

Koncentrace RNA je nižší než rozsah kvantifikace. Takové výsledky jsou interpretovány velmi opatrně, korelují je s údaji jiných studií, často provádějí druhou studii.

Úroveň virové zátěže v dané koncentraci je považována za nízkou. Obvykle snížení množství viru znamená, že terapie je úspěšná.

Více než 8 * 10 ^ 5 IU / ml

Úroveň virové zátěže v dané koncentraci je považována za vysokou.

Více než 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

Množství RNA je nad horní hranicí rozsahu kvantifikace. Závěry o stupni virové zátěže s tímto výsledkem nejsou možné. Obvykle se v takových případech opakuje test s ředěním vzorku krve.

Dekódování genotypizace.

Byla detekována RNA specifického genotypu

V biomateriálu je detekován virus hepatitidy C specifického genotypu a podtypu. Výsledek je kódován římskými číslicemi a latinkou, například - 1a, 2b. Existuje sedm genotypů a šedesát sedm podtypů, ale v Rusku existují pouze tři první typy.

RNA virové hepatitidy C byla detekována

V krvi se RNA nachází v Rusku vzácným genotypem, který nelze přičíst prvnímu, druhému nebo třetímu typu. Je zapotřebí více výzkumu.

Tento výsledek naznačuje, že pacient je zdravý, nebo že úroveň RNA patogenu je příliš malá.

Situace je možná, pokud je analýza PCR pro hepatitidu C negativní a enzymový imunotest detekuje protilátky proti viru. To znamená, že pacient měl v akutní formě hepatitidu C a uzdravil se. Přibližně dvacet případů infekce vede k spontánnímu vyléčení, pokud tělo pacienta vykazuje dostatečnou odolnost proti infekci.

Navzdory skutečnosti, že PCR je velmi přesná analýza, její výsledky mohou být zkresleny v následujících situacích:

• krev byla transportována do laboratoře za nevhodných podmínek, teplotní režim byl porušen;
• byl vzorek biomateriálu kontaminován;
• v krvi byly zbytky stop heparinu a dalších antikoagulancií;
• Ve zkoumané látce byly inhibitory - látky, které zpomalují nebo zastavují polymerázovou řetězovou reakci.

Výhody PCR v porovnání s jinými metodami

1. Diagnóza v počátečních fázích. PCR detekuje genetický materiál vyvolávajícího onemocnění. Pomocí analýzy imunofluorescence lze stanovit pouze imunoglobuliny - látky, které organismus produkuje v reakci na infekci. V případě infekce způsobené hepatitidou C může být interval mezi infekcí a nástupem imunitní odpovědi několik týdnů a měsíců, kdy bude ELISA neúčinná. PCR poskytne odpověď už v prvním týdnu po infekci.

Nízká pravděpodobnost chyby. Ve studovaném materiálu se určuje genetický materiál, který je charakteristický pouze pro jeden typ patogenů. To vám umožňuje vyloučit falešné výsledky. Při ELISA jsou možné chyby, protože stejný druh protilátek lze uvolnit proti různým virům - takové protilátky se nazývají zkřížené reakce.

Vysoká citlivost. PCR může detekovat RNA patogenu i v minimálních množstvích. To umožňuje identifikovat skryté infekce.

Jak se připravit na dodávku krve pro výzkum PCR

Pro analýzu PCR se pro hepatitidu C sbírá venózní krev. Obvykle se z pacientovy žíly najednou odeberou dvě části krve: první se odešle pro PCR a druhá pro ELISA. To se provádí, aby bylo možné přesněji posoudit, jak špatně je pacient infikován tímto virem a jak proti němu bojuje imunita.

Obvykle jsou pro pacienta vyžadována následující pravidla:

• vyšetření krve se odebere ráno;
• přestávka mezi posledním jídlem a dodávkou krve by měla být osm až deset hodin;
• dva nebo tři dny před analýzou se musíte vzdát smažených a mastných potravin a alkoholu;
• po dobu čtyřiadvaceti hodin před analýzou by se pacient měl vyhnout fyzické námaze: nemají váhy, nechodí do tělocvičny nebo do bazénu.

Dekódování analýzy PCR pro hepatitidu C

Zvláštní laboratorní studie - analýza hepatitidy C ptsr - významně zjednodušuje diagnostiku tohoto virového onemocnění. Výjimka není a hepatitida C. Malý vzorek krve může být zkontrolován na obsah RNA a jiného genetického materiálu virové látky. Analýza pomocí PCR provádí všechny osoby s protilátkami proti hepatitidě C, které cirkulují v krevní plazmě, jejíž přítomnost potvrdila kvalitativní detekci.

Interpretace výsledků je interpretována v grafu výzkumného formuláře jako "pozitivní" nebo "negativní" analýza. Navíc pomocí PCR je možné nejen kvalitativně stanovit minimální obsah viru, ale také počítat počet částic. Je tedy možné určit odhadovanou virovou zátěž a stanovit co nejpřesněji lékařskou taktiku léčby.

Virové poškození jater

Játra jako prvek trávicího ústrojí zaberou obrovskou zátěž. Ve svých buňkách dochází k většině metabolických reakcí všech typů metabolismu, což zajišťuje optimální fungování všech orgánů a systémů. Současně je jeho detoxikační hodnota skvělá pro odstraňování strusky a produktů metabolismu fermentační žlučou.

Porážka jater různými přírodními viry je extrémně nebezpečná pro orgán. Různorodý klinický obraz a nedodržování léčby hepatitidy vede na první místo z hlediska zdravotních rizik. Hepatitida C je chronická a může dávat negativní výsledek testu po dlouhou dobu, pomalu parazitizovat lidské tělo. Virus je přenášen prostřednictvím biologických tekutin: krve a méně často prostřednictvím spermií. Narkotika zneužívání nesterilních injekčních stříkaček, přirozená dodávka nakažených žen, náhodné úrazy nebo škrty zdravotníků může vést k přenosu viru zdravým lidem.

Včasnou diagnózu onemocnění brání skrytý klinický obraz a nesystematická patologie. Pozitivní výsledek může být jednoduše vynechán špatnou kvalitou. Pouze významná léze jaterních buněk způsobuje určitou symptomatologii, nicméně negativní účinek viremie v té době neopouští žádnou možnost obnovit orgán.

Moderní medicína vyvinula speciální metody pro rozpoznání nejmenší stopy viru. PCR, jestliže jaterní biopsie může detekovat nejmenší poškození jater a minimální hladinu protilátek proti viru. Analýza pomocí PCR je nejjednodušší a nejspolehlivější v diagnostické praxi.

Kvalitativní analýza

Podstatou polymerázové reakce je vývoj sekvence RNA. Reakce se provádí, když v krevní plazmě existují stejné virové proteiny.

Speciální katalyzátory umožňují syntetizovat podobnou sekvenci virového řetězce, která se porovná se známými nukleotidy virové RNA. Na základě toho se určuje virové zatížení a poškození jater.

PCR je schopen detekovat i jediný přítomnost požadovaného genu v odebrané krvi. Tato diagnostická řetězová reakce je také velmi specifická. Sekvence nukleotidových řetězců je pro každé zvíře jedinečná, takže enzymatické primery vytvářejí identické sekvence požadované genetické informace. Tak může být každý virus detekován s nejmenší přesností, i když jeho kvantitativní index je extrémně malý.

U pacientů, u nichž byla nalezena protilátka proti virové hepatitidě, byla provedena kvalitativní studie ptsr nebo ifa. Výsledek analýzy může být buď pozitivní nebo negativní, což v obou případech vyžaduje léčbu.

Decipher pozitivní reakce řetězové reakce následuje jako přítomnost fragmentů RNA viru hepatitidy nebo jako fenomén infekce.

V krevní plazmě v okamžiku, kdy se virus aktivně množí a parazitizuje jaterní buňky. Diagnostika PCR může negativně reagovat, pokud jsou částice virové RNA přítomny v plazmě poněkud pod úrovní citlivosti testu nebo vůbec žádná. Po přímé infekci množství viru roste poměrně pomalu a až po 1 až 2 týdnech, jestliže může být jiný kvalitativní výzkum odlišný.

Negativní analýzu lze získat v následujících případech:

1. Při odebírání materiálu za nevhodných podmínek získání vzorku krve se znečištěním;
2. Při předchozích injekcích pacientů s heparinem.
3. Pokud jsou ve vzorkách přítomny jiné enzymy a substráty, které narušují průběh řetězové reakce.

Kvantitativní analýza

Kvantitativní test jako mikrobiologická diagnóza slouží k určení virové zátěže. Potvrzená kvalitativní analýza viremie je základem pro stanovení množství genetického materiálu a jeho koncentrace. Počet detekované virové RNA se stanoví v jednotce objemu krve, obvykle v 1 mililitru. Požadované materiály jsou vyjádřeny v mezinárodních jednotkách, některé laboratoře v analýze ifa používají počet kopií.

Obvykle před jakýmkoli terapeutickým režimem se provádí kvantitativní analýza PCR. Vírusové RNA se počítá dostatečně často: po jednom, čtyřech, dvanácti a čtyřiadvaceti týdnech. 12. týden je považován za indikativní, protože na základě analýzy v tomto období se provádí dekódování účinnosti lékařských opatření.

Kvantitativní analýza pomocí PCR nebo ifa zahrnuje odběr vzorků z žíly.

Interpretace výsledků s vysokou virovou zátěží začíná číslem 800 000 IU / ml. Takový pozitivní výsledek pro hepatitidu C odráží přítomnost nejméně 3 000 000 výtisků v jednom mililitru krve. Nízká hladina viremie se zastaví na čísle 400 000 IU / ml. Výsledky studie mohou být hodnoty jako negativní odezva, stejně jako "nižší než rozsah měření".

Kvantitativní test s odhadem "pod měřicím rozmezím" říká, že reakce nedokázala vypočítat RNA. Vírus cirkuluje v těle, jak je naznačeno kladným kvalitativním testem. Negativní indikátor kvantitativní analýzy ptsr nebo ifa indikuje nepřítomnost RNA v tomto vzorku krve.

Navzdory omezeným způsobům přenosu viru v krvi narůstá riziko přenosu viru prostřednictvím tajemství pohlavních orgánů, od matky k dítěti.

Kvantitativní analýza poskytuje významnou pomoc při hodnocení terapeutických intervencí. IFa a ptsr odrážejí účinek antivirových léků, pomáhají stanovit načasování terapie a posuzují tvorbu imunity u pacientů. Včasná negativní odpověď z laboratorních testů svědčí o úspěšné léčbě a potřebě zkrátit trvání léčby. Pomalý pokles míry viremie může být dešifrován jako potřeba změnit terapeutický průběh. Úroveň virové zátěže určuje prognózu onemocnění. Hepatitida s nízkou rychlostí je pravděpodobně jednoduše léčena a může zcela odstranit virus z těla. Vysoká míra přítomnosti viru v krvi vyžaduje pozornou léčbu a mnohostrannou léčbu.

Kvalitativní analýza hepatitidy C

Zanechat odpověď

Kvalitativní analýza polymerázové řetězové reakce - PCR pro hepatitidu C určuje přítomnost nebo nepřítomnost HCV v těle. V laboratoři se studuje struktura RNA, v níž se virus nachází. Pokud je zjištěn virus C, je nutné podstoupit léčbu, protože zanedbávaná jaterní choroba vede k vážným následkům. Kvalitativní PCR se provádí po zotavení za účelem potvrzení nepřítomnosti protilátek. Jmenován a pro preventivní vyšetření. Při nízké koncentraci patogenu v krvi nemůže PCR (kvalitativní) detekovat nic, protože diagnostický systém má své prahy citlivosti. V případě počátečního stadia onemocnění nebo mírné formy je PCR nakonec diagnostikována pomocí ultrazvuku.

Co je RNA virus?

Termín RNA viru hepatitidy C (nebo RNA viru hepatitidy C) se nazývá samotné onemocnění jater. Virus C se váže na zdravou tělesnou buňku a proniká dovnitř. Časem se šíří po celém těle, je to jen dostat se do krve. Výsledkem je, že patogen proniká játry, spojí se s buňkami a tvrdě pracuje. Hepatální buňky (hepatocyty) pracují pod jeho vlivem, podstupují změny a z tohoto zahynou. Čím delší je virus C v játrech, tím více buněk zemře. Postupně se rozvíjejí nebezpečné nemoci, které vedou ke zhoubné degeneraci a smrti.

Infekce jater s tímto typem viru se nemůže projevit jakýmkoliv způsobem externě. Po mnoho let nebo desítek let se nakažená osoba cítí naprosto zdravá a pouze náhodná vyšetření nejčastěji odhaluje patologii. Při darování krve na hepatitidu se zkoumá část řetězce RNA (ribonukleové kyseliny), která je součástí lidského genu (DNA). Výsledky laboratorního výzkumu by neměly být používány pro sebe-léčbu, protože to je pouze indikátor. Lékař určí přesný obraz a další diagnózu.

Po dokončení: svědectví o studii

Pro potvrzení HCV je přiřazena PCR analýza (polymerázová řetězová reakce). Studie PCR pomáhají najít patogenní materiál ve struktuře RNA a předepisovat účinnou terapii. Jsou jmenováni v následujících případech:

• identifikace příznaků zánětu jater;
• screeningové studie prevence;
• vyšetření osob v kontaktu;
• diagnóza hepatitidy smíšeného původu (definice hlavního patogenu);
• Stanovení úrovně aktivity reprodukce viru v chronické formě;
• cirhóza jater;
• k určení účinnosti předepsané léčby.

Studie PCR jsou určeny lékařem k určení účinnosti průběhu léčby hepatitidy.

Existuje kvalitativní i kvantitativní analýza PCR. Kvantitativní PCR ukazuje procento RNA s nosiči viru v krvi a kvalitativní PCR indikuje přítomnost nebo nepřítomnost viru. Pozitivní ukazatel kvality (přítomnost hepatitidy C RNA) také vyžaduje kvantitativní studium. Vysoká koncentrace patogenu hepatitidy C je spojena s rizikem přenosu, tj. S kontaminací ostatních. Nízké množství je lépe zacházeno. Množství RNA virů v krvi nesouvisí s intenzitou onemocnění. Analýza PCR se provádí také v případě terapie interferonem, aby se předepsal trvání a složitost průběhu léčby.

Vlastnosti kvalitativní analýzy PCR pro hepatitidu C

Kvalitativní analýza s indexem polymerázové řetězové reakce je přiřazena všem pacientům, kteří mají v krvi protilátky proti hepatitidě C. Kdo se zotavil a získal zpět, měl by být opětovně testován. Doporučuje se předat analýzu hepatitidy B, pak v případě pozitivního závěru a na hepatitidě D. Také kvalitativně analyzovaná reakce by měla být provedena ve spojení s jinými krevními testy. Analýzy ukazují kompletní obraz šíření viru.

Z výsledků testů bude vidět pouze pozitivní test na hepatitidu C nebo negativní, tj. Přítomnost nebo nepřítomnost viru. Pokud je závěr "zjištěn", pak je virus aktivně i nadále aktivní. Označení "nebylo nalezeno" označuje nepřítomnost viru nebo jeho malé množství. S tímto indikátorem bychom měli vzít v úvahu skutečnost, že analytická citlivost diagnostických systémů je odlišná a hepatitida C RNA může být stále v krvi, ale v analýze se nezjistila.

Zvláště citlivá metoda PCR s ultra-hepatitidou C se odhaluje i v nepatrných množstvích. Používá se hybridizační fluorescenční studie, která je mnohonásobně vyšší než standardní PCR systémy. Metoda se používá v několika případech:

• podezření na skryté formy hepatitidy C;
• Diagnostika PCR nebyla patogenem potvrzena, ale existují protilátky;
• v případě využití;
• identifikovat počáteční stadium infekce.

Zpět na obsah

Vysvětlení analýzy

Konečné rozhodnutí v diagnóze je ovlivněno PCR dekódováním HCV, zejména s ultrametodou. Hlavním nedostatkem tohoto výzkumu je přísné dodržování sterilních podmínek pro vzorek a materiály. Malá odchylka někdy ukazuje nepřesné závěry analytika, komplikuje diagnózu a následnou léčbu. Analýza PCR pro stanovení RNA viru hepatitidy ne vždy ukazuje obraz choroby s důvěrou, někdy jsou připuštěny nepřesnosti v obou směrech.

Při diagnostice viru hepatitidy se doporučuje provést komplexní vyšetření.

Norma indikátorů

Absence JgM protilátek proti RNA ve virové hepatitidě C je považována za normu při analýze polymerázové řetězové reakce. Současně zjištění sérologické analýzy naznačují přítomnost protilátek proti viru C a to je také v mezích normy. Kvalitativní definice neukazuje intenzitu onemocnění, pouze odhaluje příčinný účinek hepatitidy C v RNA. Taková analýza se opakuje po ošetření, aby se potvrdilo skutečné uzdravení.

Odchylky

Pokud jsou přítomny protilátky JgM proti HCV RNA, znamená to rozvoj infekce. Nemoc je akutní nebo chronická, projevuje se v různých fázích. Pokud dojde k poklesu počtu protilátek, bude analýza indikovat dosažení výsledků léčby během regenerace. Existují extrémně vzácné případy falešně pozitivních nálezů v diagnostice. Objevují se u žen během těhotenství a u lidí s jinými infekčními nemocemi.

Kvalitativní a kvantitativní analýza PCR pro hepatitidu C: negativní, pozitivní, dekódování

Hepatitida C - virová onemocnění jater způsobené HCV Flavivirus, v němž struktura obsahuje molekulu ribonukleové kyseliny (RNA) (z viru hepatitidy anglicky C.). RNA nese genetický kód viru. Jeho přítomnost umožňuje analýzu PCR pro hepatitidu C.

HCV je nebezpečí pro člověka a to tzv sérologická okno (doba mezi infekcí a vzhledu reakce imunitního systému), může být dostatečně dlouhý - od několika týdnů do šesti měsíců.

To nezjistí infekci a začne léčbu včas.

V závislosti na individuálních vlastnostech hostitelského těla se HCV může projevit v akutní formě a může se také vyvinout jako chronické onemocnění, které bude vyžadovat dlouhodobou a nákladnou léčbu. Při detekci protilátek proti HCV se provádí řada laboratorních testů, včetně PCR pro hepatitidu C. Tento test se provádí u všech lidí, v jejichž krvi byly nalezeny protilátky proti HCV.

Co je analýza PCR?

Laboratorní analýza PCR pro hepatitidu C - studie biologického materiálu k identifikaci přítomnosti flavaviru.

Polymerázová řetězová reakce (jak je zkratka dešifrována) ukazuje kvantitativní hodnotu virového poškození organismu, jeho kvalitativní charakteristiky a také genotyp viru obsahujícího RNA.

Na základě jejich základů a na základě dalších analýz je určen způsob a doba trvání léčby, stejně jako epidemiologický faktor (riziko přenosu na jiný nosič).

Co je analýza RNA pro hepatitidu C?

PCR s hepatitidou C se také nazývá analýza RNA (HCV RNA), protože není známa. Flavavirus obsahuje částice RNA s velikostí virionu 30-60 nm. Jednou z charakteristik tohoto mikroorganismu je vysoká tendence k mutacím.

Každý z poddruhů (genotypů) viru má odlišný odpor, který způsobuje různé metody léčby a povahu další prognózy pro pacienta.

Biologický materiál (žilní krve) je řešeno půst a obvykle testovány PCR v reálném čase (vysoce citlivé v reálném čase, diagnostika ke stanovení dolní meze 15 IU / ml za použití automatického režimu uzavřený systém).

Existují další testy, například COBAS AMPLICOR s citlivostí 50-100 IU / ml. U každé laboratorní studie je důležitá prahová citlivost, tj. schopnost činidla detekovat minimální koncentraci viru v biologickém materiálu.

Druhy analýzy hepatitidy C pomocí metody PCR

PCR pro hepatitidu C zahrnuje tři důležité složky:

• kvalitativní analýza;
• kvantitativní analýza;
• genotypizace.

Tyto testy mohou určit povahu viremie, stejně jako genetické znaky patogenu. V závislosti na citlivosti diagnostického systému se test provádí jednou a někdy se provede druhý test s citlivějším činidlem pro potvrzení nebo vylepšení výsledků.

Vysoce kvalitní PCR na hepatitidě C

Analýza PCR pro kvalitu hepatitidy C je dalším běžným názvem pro test polymerázové řetězové reakce. Standardní citlivost testu, která umožňuje detekci přítomnosti virové léze, je v rozmezí 10-500 IU / ml.

Negativní analýza PCR pro hepatitidu C ukazuje, že koncentrace viru v krvi pacienta je pod prahem vnímavosti diagnostického systému.

Pokud kvalitativní PCR poskytla odpověď "nezjištěnou", je pro následnou léčbu důležité znát práh citlivosti činidla.

Bílkovinné frakce na flavavirus se objevují mnohem později.

Kvantitativní PCR s hepatitidou C

PCR kvantitativní hepatitida C je indikátorem virové zátěže, která odráží hladinu koncentrace RNA z FLA v těle. Jedná se o ukazatel, který ukazuje, kolik fragmentů virové RNA je obsaženo na jeden kubický centimetr krve. PCR hepatitidy výsledků Kvantitativní zkouška C RNA v konvenčním systému jsou uvedeny v mezinárodních jednotkách na ml (IU / ml), a mohou být zaznamenány v různými způsoby, například - 1,7 ppm nebo 1,700,000 IU / ml.

Kvantitativní PCR diagnostika hepatitidy C se podává pacientům před zahájením antivirové terapie a ve 12. týdnu léčby k vyhodnocení výsledků vybraného způsobu boje proti HCV. Virové zatížení umožňuje identifikovat tři důležité ukazatele onemocnění:

• infekčnost, tj. stupeň rizika přenosu viru z jednoho nosiče na jiný (čím vyšší je koncentrace RNA z FLA, tím vyšší je pravděpodobnost infekce jiné osoby, například během sexuálního kontaktu);
• metoda a účinnost léčby;
• trvání a prognóze antivirové terapie (čím vyšší je virální zátěž, tím trvá léčba delší).

Kvantitativní PCR diagnostika hepatitidy C závisí na typu laboratorního testu a prahu jeho citlivosti. Dolní hranice normy je obvykle považována za až 600 000 IU / ml, průměrná hodnota je v rozmezí 600 000-700 000 IU / ml. Výsledky z 800 000 IU / ml a výše jsou považovány za vysoké hladiny viru obsahujícího RNA.

Genotypizace

S ohledem na vysokou mutační aktivitu HCV v přírodě je důležité stanovit ve fázi testování, který genotyp viru je v krvi pacienta. Celkově je na planetě zaznamenáno 11 genotypů viru hepatitidy C, které zahrnují mnoho poddruhů. Na území Ruské federace jsou 1, 2 a 3 běžné.

PCR RNA hepatitidy C spolu s genotypizací je velmi důležitou složkou analýzy, protože umožňuje lékaři určit rezistenci (rezistenci) viru, vybrat vhodné léky a předepsat průběh léčby.

Genotypování také umožňuje nepřímo určit stav jater. Například genotyp 3 HCV je často doprovázen steatózou, v níž se tuk akumuluje v buňkách těla.

Krevní test PCR pro hepatitidu C by měl poskytnout číslo, které určuje genotyp. V laboratorních odpovědích může být napsáno "ne psáno" - a to znamená, že v lidské krvi je virus, který není určen testovacím systémem. To může znamenat, že genotyp není pro danou zeměpisnou oblast netypický. V tomto případě je nutné znovu provést analýzu s vyšší citlivostí diagnostického systému.

Dekódování analýzy PCR pro hepatitidu C

Test PCR pro hepatitidu C lze kvantifikovat na základě výše uvedených údajů. Při obdržení výsledků laboratorních testů jsou obvykle uvedeny následující údaje:

• "Nalezeno" / "nebylo nalezeno" (vysoce kvalitní PCR pro hepatitidu C);
• množství frakcí obsahujících RNA, například 831,680 IU / ml (kvantitativní PCR test);
• číslo, které určuje HCV genotyp, například - 1, 2, 3, 4;
• název testu je nejčastěji v reálném čase.

Nejdůležitější v rozluštění analýzy PCR pro hepatitidu C je druhá položka, která ukazuje virovou zátěž určující prognózu, způsob a trvání léčby.

Pokud je analýza PCR pro hepatitidu C negativní a pozitivní ELISA - co to znamená?

Pro dešifrování laboratorních testů je důležité kontaktovat odborníka na hepatologii nebo infekční onemocnění, který vysvětlí informace získané v souladu s typem diagnostického systému a prahem jeho citlivosti. V lékařské praxi je mnoho údajů o krevních testech, které mohou vést člověka bez lékařského vzdělání ke zmatku.

Například, v případě, že test na HCV PCR negativní a pozitivní ELISA, může to znamenat, že v tomto okamžiku v krvi pacienta není HCV, ale před tím, než trpěl akutní formy hepatitidy C. Předpokládá se, že pozitivní-linked immunosorbent assay (ELISA), ukazuje, že v krvi se objevují protilátky po vpádu viru v minulosti. Ale v moderní lékařské praxi ELISA analýza není dostatečně spolehlivé a často dává neobvyklé výsledky, takže lékaři použít jako primární screening. Při diagnostice onemocnění se specialisté řídí právě pomocí PCR testů.

Užitečné video

V následujícím videu je velmi podrobné a zajímavé říci, co je základem metody PCR, jak se provádí analýza:

Závěr

Venózní krev se obvykle užívá k analýze PCR s hepatitidou C. Nejčastěji dochází k dvojímu odběru vzorků biologického materiálu - ELISA a přímo k testu PCR. Pro správné výsledky zkoušek je nutné dodržovat hlavní pravidla laboratorního odběru vzorků biologického materiálu:

• krev pro analýzu se podává ráno na prázdném žaludku;
• mezi jídlem a krví by měla trvat nejméně 8 hodin;
• Před provedením testu byste měli také vyloučit alkohol a smažené potraviny;
• Během dne, než předáte krev, musíte se vyvarovat vysoké fyzické námahy.

Výsledky vyšetření krve jsou obvykle připraveny následující den.