Kvalitativní a kvantitativní analýza PCR pro hepatitidu C: negativní, pozitivní, dekódování

Hepatitida C - virová onemocnění jater způsobené HCV Flavivirus, v němž struktura obsahuje molekulu ribonukleové kyseliny (RNA) (z viru hepatitidy anglicky C.). RNA nese genetický kód viru. Jeho přítomnost umožňuje analýzu PCR pro hepatitidu C.

HCV je nebezpečí pro člověka a to tzv sérologická okno (doba mezi infekcí a vzhledu reakce imunitního systému), může být dostatečně dlouhý - od několika týdnů do šesti měsíců.

To nezjistí infekci a začne léčbu včas.

V závislosti na individuálních vlastnostech hostitelského těla se HCV může projevit v akutní formě a může se také vyvinout jako chronické onemocnění, které bude vyžadovat dlouhodobou a nákladnou léčbu. Při detekci protilátek proti HCV se provádí řada laboratorních testů, včetně PCR pro hepatitidu C. Tento test se provádí u všech lidí, v jejichž krvi byly nalezeny protilátky proti HCV.

Co je analýza PCR?

Laboratorní analýza PCR pro hepatitidu C - studie biologického materiálu k identifikaci přítomnosti flavaviru.

Polymerázová řetězová reakce (jak je zkratka dešifrována) ukazuje kvantitativní hodnotu virového poškození organismu, jeho kvalitativní charakteristiky a také genotyp viru obsahujícího RNA.

Na základě jejich základů a na základě dalších analýz je určen způsob a doba trvání léčby, stejně jako epidemiologický faktor (riziko přenosu na jiný nosič).

Co je analýza RNA pro hepatitidu C?

PCR s hepatitidou C se také nazývá analýza RNA (HCV RNA), protože není známa. Flavavirus obsahuje částice RNA s velikostí virionu 30-60 nm. Jednou z charakteristik tohoto mikroorganismu je vysoká tendence k mutacím.

Každý z poddruhů (genotypů) viru má odlišný odpor, který způsobuje různé metody léčby a povahu další prognózy pro pacienta.

Biologický materiál (žilní krve) je řešeno půst a obvykle testovány PCR v reálném čase (vysoce citlivé v reálném čase, diagnostika ke stanovení dolní meze 15 IU / ml za použití automatického režimu uzavřený systém).

Existují další testy, například COBAS AMPLICOR s citlivostí 50-100 IU / ml. U každé laboratorní studie je důležitá prahová citlivost, tj. schopnost činidla detekovat minimální koncentraci viru v biologickém materiálu.

Druhy analýzy hepatitidy C pomocí metody PCR

PCR pro hepatitidu C zahrnuje tři důležité složky:

• kvalitativní analýza;
• kvantitativní analýza;
• genotypizace.

Tyto testy mohou určit povahu viremie, stejně jako genetické znaky patogenu. V závislosti na citlivosti diagnostického systému se test provádí jednou a někdy se provede druhý test s citlivějším činidlem pro potvrzení nebo vylepšení výsledků.

Vysoce kvalitní PCR na hepatitidě C

Analýza PCR pro kvalitu hepatitidy C je dalším běžným názvem pro test polymerázové řetězové reakce. Standardní citlivost testu, která umožňuje detekci přítomnosti virové léze, je v rozmezí 10-500 IU / ml.

Negativní analýza PCR pro hepatitidu C ukazuje, že koncentrace viru v krvi pacienta je pod prahem vnímavosti diagnostického systému.

Pokud kvalitativní PCR poskytla odpověď "nezjištěnou", je pro následnou léčbu důležité znát práh citlivosti činidla.

Bílkovinné frakce na flavavirus se objevují mnohem později.

Kvantitativní PCR s hepatitidou C

PCR kvantitativní hepatitida C je indikátorem virové zátěže, která odráží hladinu koncentrace RNA z FLA v těle. Jedná se o ukazatel, který ukazuje, kolik fragmentů virové RNA je obsaženo na jeden kubický centimetr krve. PCR hepatitidy výsledků Kvantitativní zkouška C RNA v konvenčním systému jsou uvedeny v mezinárodních jednotkách na ml (IU / ml), a mohou být zaznamenány v různými způsoby, například - 1,7 ppm nebo 1,700,000 IU / ml.

Kvantitativní PCR diagnostika hepatitidy C se podává pacientům před zahájením antivirové terapie a ve 12. týdnu léčby k vyhodnocení výsledků vybraného způsobu boje proti HCV. Virové zatížení umožňuje identifikovat tři důležité ukazatele onemocnění:

• infekčnost, tj. stupeň rizika přenosu viru z jednoho nosiče na jiný (čím vyšší je koncentrace RNA z FLA, tím vyšší je pravděpodobnost infekce jiné osoby, například během sexuálního kontaktu);
• metoda a účinnost léčby;
• trvání a prognóze antivirové terapie (čím vyšší je virální zátěž, tím trvá léčba delší).

Kvantitativní PCR diagnostika hepatitidy C závisí na typu laboratorního testu a prahu jeho citlivosti. Dolní hranice normy je obvykle považována za až 600 000 IU / ml, průměrná hodnota je v rozmezí 600 000-700 000 IU / ml. Výsledky z 800 000 IU / ml a výše jsou považovány za vysoké hladiny viru obsahujícího RNA.

Genotypizace

S ohledem na vysokou mutační aktivitu HCV v přírodě je důležité stanovit ve fázi testování, který genotyp viru je v krvi pacienta. Celkově je na planetě zaznamenáno 11 genotypů viru hepatitidy C, které zahrnují mnoho poddruhů. Na území Ruské federace jsou 1, 2 a 3 běžné.

PCR RNA hepatitidy C spolu s genotypizací je velmi důležitou složkou analýzy, protože umožňuje lékaři určit rezistenci (rezistenci) viru, vybrat vhodné léky a předepsat průběh léčby.

Genotypování také umožňuje nepřímo určit stav jater. Například genotyp 3 HCV je často doprovázen steatózou, v níž se tuk akumuluje v buňkách těla.

Krevní test PCR pro hepatitidu C by měl poskytnout číslo, které určuje genotyp. V laboratorních odpovědích může být napsáno "ne psáno" - a to znamená, že v lidské krvi je virus, který není určen testovacím systémem. To může znamenat, že genotyp není pro danou zeměpisnou oblast netypický. V tomto případě je nutné znovu provést analýzu s vyšší citlivostí diagnostického systému.

Dekódování analýzy PCR pro hepatitidu C

Test PCR pro hepatitidu C lze kvantifikovat na základě výše uvedených údajů. Při obdržení výsledků laboratorních testů jsou obvykle uvedeny následující údaje:

• "Nalezeno" / "nebylo nalezeno" (vysoce kvalitní PCR pro hepatitidu C);
• množství frakcí obsahujících RNA, například 831,680 IU / ml (kvantitativní PCR test);
• číslo, které určuje HCV genotyp, například - 1, 2, 3, 4;
• název testu je nejčastěji v reálném čase.

Nejdůležitější v rozluštění analýzy PCR pro hepatitidu C je druhá položka, která ukazuje virovou zátěž určující prognózu, způsob a trvání léčby.

Pokud je analýza PCR pro hepatitidu C negativní a pozitivní ELISA - co to znamená?

Pro dešifrování laboratorních testů je důležité kontaktovat odborníka na hepatologii nebo infekční onemocnění, který vysvětlí informace získané v souladu s typem diagnostického systému a prahem jeho citlivosti. V lékařské praxi je mnoho údajů o krevních testech, které mohou vést člověka bez lékařského vzdělání ke zmatku.

Například, v případě, že test na HCV PCR negativní a pozitivní ELISA, může to znamenat, že v tomto okamžiku v krvi pacienta není HCV, ale před tím, než trpěl akutní formy hepatitidy C. Předpokládá se, že pozitivní-linked immunosorbent assay (ELISA), ukazuje, že v krvi se objevují protilátky po vpádu viru v minulosti. Ale v moderní lékařské praxi ELISA analýza není dostatečně spolehlivé a často dává neobvyklé výsledky, takže lékaři použít jako primární screening. Při diagnostice onemocnění se specialisté řídí právě pomocí PCR testů.

Užitečné video

V následujícím videu je velmi podrobné a zajímavé říci, co je základem metody PCR, jak se provádí analýza:

Závěr

Venózní krev se obvykle užívá k analýze PCR s hepatitidou C. Nejčastěji dochází k dvojímu odběru vzorků biologického materiálu - ELISA a přímo k testu PCR. Pro správné výsledky zkoušek je nutné dodržovat hlavní pravidla laboratorního odběru vzorků biologického materiálu:

• krev pro analýzu se podává ráno na prázdném žaludku;
• mezi jídlem a krví by měla trvat nejméně 8 hodin;
• Před provedením testu byste měli také vyloučit alkohol a smažené potraviny;
• Během dne, než předáte krev, musíte se vyvarovat vysoké fyzické námahy.

Výsledky vyšetření krve jsou obvykle připraveny následující den.

Diagnóza viru hepatitidy C

Virus hepatitidy C (HCV) je virus obsahující RNA z rodiny Flaviviridae. Tato infekce je schopná reprodukovat v krevních buňkách (monocyty, neutrofily, B-lymfocyty a makrofágy) a rovněž poškozovat buňky jater samotné - hepatocyty. Vzhledem k vysokému stupni mutační aktivity je tento typ hepatitidy schopen vyhnout se vlivu lidského imunitního systému.

Existuje 11 genotypů a množství podtypů takového viru, které se liší stupněm poškození jater a ovlivňují načasování léčby hepatitidou. Tato různorodá hepatitida C vyžaduje různé metody antivirové terapie. Například hepatitida 1. a 4. genotypu by měla být léčena 48 týdnů a pro léčbu proti virům druhého a třetího druhu může trvat pouze 24 týdnů.

Po rychlém testu hepatitidy C bylo dosaženo pozitivního výsledku, provedla se PCR analýza k identifikaci RNA viru ve vzorcích krve.

Diagnostika PCR

Polymerázová řetězová reakce (PCR) je experimentální technikou pro detekci virů. Takováto analýza pro hepatitidu C umožňuje významné zvýšení koncentrace některých fragmentů DNA nebo RNA v předkládaných vzorcích. To umožňuje rozpoznat je a dokonce i počítat číslo.

Tento test na hepatitidu C se provádí následujícím postupem:

1. Vzorek krve (genetický materiál), který může obsahovat požadovaný gen pro hepatitidu, se zavede do zkumavky. Na své místo jsou speciální látky - primery, jsou to segmenty krátké délky od požadovaného genu, které jsou syntetizovány chemicky. V této nádobě je také přidána DNA nebo RNA polymeráza, je schopna vytvořit řetězce nukleové kyseliny, zcela identické s původním. K získanému složení je přidán výběr volných nukleotidů, které jsou speciálním stavebním materiálem pro DNA a RNA, z nichž jedna obsahuje drobné částice radioaktivního fosforu.
2. Výsledná směs se nejprve zahřeje na 95 stupňů, díky níž se v normálním stavu proplouvá, a proto jsou obě šroubovice DNA kvůli tomuto účinku oslabeny.
3. Pro pokračování analýzy se lék ochlazuje, v tomto okamžiku jsou primery připojeny k požadované oblasti genomu viru hepatitidy a neumožňují vytvoření DNA do dvojité šroubovice. Když se směs ochladí, polymeráza vyhledá jednotlivé vlákna nukleotidů. Během připojení tohoto enzymu klouže podél řetězce DNA (jako blok pomocí lana) a na dvojité šroubovice není schopen "pracovat", za tím účelem se směs zahřívá.
4. Pro prodloužení analýzy se provádí opětovné ohřev, což opět vede k oddělení nukleotidových řetězců. Při provádění takových cyklů PCR ve vzorku o neznámém množství zvyšuje hepatitidy genů v geometrických poměrech a jiných genetických materiálů vyrobených (vytvořeny) v lineárním modelu.
5. Pro dokončení studie je roztok purifikován z reziduálních nukleotidových částic. Oddělují se elektroforézou s oddělením molekulových řetězců DNA parametry molekulové hmotnosti. Takové testy na hepatitidu pomocí PCR umožňují určit, zda jsou v testovaném vzorku přítomny požadované geny viru nebo ne.

Výhodou tohoto testu je velmi vysoký prah citlivosti PCR reakce. Taková technika pro provádění diagnostiky v ideálním případě vyžaduje pouze jeden genom viru pro celý vzorek.

Kromě toho je taková PCR zcela specifická. V každém z genů existuje jedinečná sekvence nukleotidů, která se stejně jako otisk prstu nikde nepodaří opakovat. Pro tuto analýzu hepatitidy C jsou primery syntetizovány takovým způsobem, že zcela odpovídají jedinečným částem požadovaných genů, které žádná jiná sekvence nemá.

Tato technika také umožňuje analyzovat a určit hepatitidu v c, což pomáhá stanovit definitivní diagnózu.

Taková laboratorní analýza umožňuje získávat informace více než jen přítomnost nebo nepřítomnost HCV RNA nebo jiného typu ve vzorcích krve. Při definování parametru radioaktivního záření je také možnost odhalit, kolik bylo původně nalezeno požadovaný genetický materiál ve studovaném vzorku. To nám umožňuje určit parametr tzv. Virové zátěže - koncentraci částic hepatitidy RNA v určitém objemu.

Kvalitativní analýza PCR

Tato analýza umožňuje určit přítomnost viru hepatitidy ve vzorcích krve. Musí to být provedeno u všech lidí, u kterých bylo zjištěno, že mají protilátky proti hepatitidě.

Výsledkem takové studie mohou být pouze dvě hodnoty:

• "Zjistil." Takový pozitivní výsledek testu je interpretován takto: v analyzovaném vzorku byly nalezeny fragmenty RNA viru hepatitidy z biologického materiálu. Z toho vyplývá, že došlo k infekci pacienta tímto virem. To může znamenat, že příčinný účinek hepatitidy se v těle násobí a infikuje nové buňky a ničí játra.
• "Nezjištěno". Tento výsledek ukazuje, že ve vzorku, který je analyzován v laboratoři bylo zjištěno, že fragmenty RNA, která je specifická pro virus hepatitidy C Existuje také možnost, že se koncentrace RNA viru-patogenu ve vzorku byl tak malý, že test nebyl schopen identifikovat. V takových případech se říká, že úroveň koncentrace je pod prahem citlivosti testu.

Takový test může být také falešně pozitivní nebo negativní z důvodu kontaminace biologického materiálu nebo přítomnost specifických látek ve vzorcích, reagující s chemickými složkami nezbytnými pro analýzu.

Je třeba zdůraznit, že v akutních fázích hepatitidy C může kvalitativní studie s použitím metody PCR detekovat jeho RNA po pouhých 1-2 týdnech od okamžiku infekce těla. To znamená, že onemocnění může být identifikováno dlouho před vznikem vnějších symptomů nebo výskytem protilátek proti hepatitidě v těle.

Vzorkování krve (z žíly) se s výhodou provádí na prázdném žaludku.

Kvantitativní analýza PCR

Pomocí této analýzy určete úroveň koncentrace viru hepatitidy u pacienta (virové zátěž). Takový test musí být předložen za účelem odhadnutí množství RNA viru v jednotce určitého objemu.

Analýza testů na hepatitidu c, provedená pomocí této techniky, může mít následující výsledky:

• Kvantitativní ukazatel (v obrázcích)

Koncentrace viru (počet) je uvedena v číselném vyjádření. K tomu se používají různé jednotky: buď ME / ml (mezinárodní jednotka na mililiter) nebo kopie / ml (počet kopií virové RNA v mililitrech). Průměrně 1 IU / ml odpovídá 4 kopiím / ml, protože různé testovací systémy mají pro tyto jednotky různé konverzní faktory.

Nízké virové zatížení je pro tento test považováno za méně než 400 000 IU / ml a vysoká je 8000000 IU / ml.

Toto kvantitativní hodnocení umožňuje určit míru infekčnosti onemocnění ("infekčnost") pacienta. Čím více tento indikátor analýzy, tím vyšší je riziko přenosu patogenu na jiné osoby (sexuálním stykem nebo vertikální cestou).

Tento verdikt znamená, že kvantitativní metoda nemohla detekovat hepatitidu RNA, ale samotný virus je přítomen v těle pouze ve velmi nízké koncentraci. To bylo potvrzeno provedením dodatečné kvalitativní analýzy PCR a jeho pozitivní výsledek naznačuje přítomnost hepatitidy.

Kvantitativní analýza PCR prováděna v různých fázích antivirové terapii (1., 4., 12. a 24. týdnů) poskytuje údaje o účinnosti léčby a provést nezbytné opravy.

Specificita analýzy

Tento test musí být předložen k určení různých genotypů hepatitidy C. V současnosti je známo 11 genotypů tohoto patogenu a mnoho subtypů. Genotypy hepatitidy typu C prvního, druhého a třetího druhu jsou v naší zemi běžné. V laboratořích může detekovat různé subtypů těchto druhů: 1a, 1b, 2a, 2b, nebo 3, 4, 5, 6 genotypů s různými modifikacemi podtypy. U všech těchto hepatitid je specificita detekce 100%.

Objasnění modifikace genotypu umožňuje zvolit vhodnou léčbu. Přítomnost určitého typu genotypu u pacienta neukazuje, že onemocnění je jednodušší nebo obtížnější, jsou pouze odrůdy viru hepatitidy a ne více.

V těch případech, kdy laboratoř nemůže izolovat genotyp viru, může být vydán výsledek: "Není napsán. Byly studovány genotypy: takové a takové (například la, 2b, 3av). Tento přepis naznačuje, že v laboratoři nebyly žádné odpovídající reagenty, které by mohly určit genotyp viru hepatitidy. Ve studii byla provedena kontrola virů uvedených v seznamu, ale nebyla zjištěna jejich shoda s vzorkami RNA.

Pro provedení konečné diagnózy je pouze jeden druh analýzy nedostatečný. Každý z testů může poskytnout falešně pozitivní výsledek. Komplexní studie se provádí k určení přesného typu hepatitidy a stupně infekce touto infekcí těla. Zároveň se provádí biopsie jater a testování jeho enzymů: ALAT, ASAT, stejně jako alkalická fosfatáza a LDH. Může se také provádět bilirubinový test a analýza protrombinového indexu.

Pouze komplex těchto testů a laboratorních testů s obecnou analýzou stavu pacienta pomůže určit přítomnost hepatitidy v těle, její tvar a také stupeň závažnosti. Na jejich základě může lékař určit další léčbu a provést možnou prognózu pro pacienta.

HCV, RNA kvantitativně [PCR v reálném čase]

Studie k identifikaci původce hepatitidy C (HCV), v němž metodou real-time polymerázové řetězové reakce (RT-PCR) je určena přítomností genetického materiálu (RNA) viru a jeho objemu (virová zátěž) ve vzorku krve.

HCV RNA může být detekována v koncentraci pod dolní hranicí lineárního rozsahu koncentrací. Rozsah lineárních koncentrací je rozsah, v němž lze přesně vypočítat počet kopií patogenu. Pro tuto analýzu je lineární rozsah koncentrací HCV DNA stanovený detekčním zesilovačem 7,5 x 10 2 - 1,0 × 10 8 kopií / ml vzorku.

Ruské synonymy

Virus hepatitidy C (HCV), kvantitativní stanovení RNA.

Synonyma Anglicky

RNA virové hepatitidy C, kvantitativní, PCR v reálném čase, krve, HCV virová zátěž, RNA virové hepatitidy C Quant.

Metoda výzkumu

Polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí v reálném čase.

Jaký biomateriál lze použít pro výzkum?

Jak se správně připravit na studium?

Nekuřte po dobu 30 minut před dávkováním krve.

Obecné informace o studii

Virus hepatitidy C (HCV) je virus obsahující RNA z rodiny Flaviviridae, který postihuje játra. Je schopen množit se v krevních buňkách (neutrofily, monocyty a makrofágy, lymfocyty B) a indukují kryoglobulinemii, Sjogrenův nemoc, a B buněk lymfoproliferativní onemocnění. HCV je díky vysoké mutační aktivitě schopen vyhnout se účinkům ochranných mechanismů imunitního systému. Existuje 6 genotypů a mnoho subtypů viru, které mají různé hodnoty pro prognózu vývoje onemocnění a účinnost antivirové terapie.

Hlavní cestou přenosu - prostřednictvím krve (léky na krvinky a plazmu, dárcovských orgánů, non-sterilní stříkačky a jehly pro tetování nástroje, piercing). Pravděpodobně infekce během sexuálního styku a dítě od matky během porodu, ale to se děje zřídka.

Akutní virová hepatitida je zpravidla charakterizována asymptomatickým průběhem a ve většině případů zůstává nediagnostikovaná. Pouze 15% infikovaných lidí má akutní onemocnění - s nevolností, bolesti těla, nedostatkem chuti k jídlu a ztrátou hmotnosti (zřídka se doprovází žloutenka). V 60-85% nakažených vyvine chronická infekce, která je 15 krát vyšší, než je frekvence chronické hepatitidy B. chronická hepatitida C, dochází ke zvýšení jaterních enzymů a špatné manifestace symptomů. U 20-30% pacientů vede onemocnění k cirhóze jater, což zvyšuje riziko jaterní insuficience a hepatocelulárního karcinomu.

Detekce HCV RNA indikuje proliferaci viru v těle a je metodou diagnostiky onemocnění. Genetický materiál viru mohou být detekovány pomocí PCR v 10-12 dní po infekci - v tomto období, specifické protilátky, které jsou vyráběny v několika měsíců po infekci, a ne jaterní funkce jsou v rámci referenčního rozsahu.

PCR je detekována virovou RNA kvalitativně nebo kvantitativně. Kvůli kvalitativní metodě se potvrzuje přítomnost viru hepatitidy C a jeho aktivní reprodukce. Kvantitativní stanovení virové zátěže s přihlédnutím k genotypu HCV umožňuje kontrolu současné léčby a předvídání průběhu onemocnění.

Účinnost léčby se odhaduje množstvím RNA před a během léčby. Obvykle se v prvních třech měsících úspěšné léčby sníží virální zátěž krve několikrát. Při účinné terapii dochází v prvních 4-12 týdnech léčby ke snížení počtu virů o dva řády a po ukončení léčby se genetický materiál viru v krvi nezjistí. Absence poklesu viremie po 12 týdnech od začátku léčby naznačuje její neúčinnost. Doporučuje se provést analýzu před začátkem léčby ve 4., 12. a 24. týdnu léčby a 24 týdnů po skončení kurzu. Trvání léčby a frekvence kvantitativního stanovení RNA viru hepatitidy C závisí na genotypu viru a stupni poškození jater.

Na co se používá výzkum?

• Potvrďte diagnózu "virové hepatitidy C".
• Předpovědět průběh virové hepatitidy C.
• Sledovat antivirovou terapii a řešit problém dalších léčebných taktik.

Kdy je přiřazena studie?

• S kvalitní detekcí RNA viru hepatitidy C.
• Při akutní a chronické virové hepatitidě C.
• Se smíšenou hepatitidou.
• Při plánování, během a po ukončení antivirové léčby.

Co znamenají výsledky?

• Nenalezeno - RNA viru hepatitidy C nebyla detekována nebo hodnota je pod limitem citlivosti metody (200 kopií / ml = 400 IU / ml).
• kopií / ml (IU / ml) - byla zjištěna RNA viru hepatitidy C. Nízkou viremii (nejpříznivější prognóza průběhu onemocnění a účinnost terapie).
• > 2 * 10 ^ 6 kopií / ml (> 4 x 10 ^ 6 IU / ml) - RNA viru hepatitidy C byla detekována. Vysoká viremie.
• > 1,0 * 10 ^ 8 kopií / ml (> 2 x 10 ^ 8 IU / ml) - RNA viru hepatitidy C byla detekována v koncentracích nad lineární koncentrační rozmezí.

Lineární rozsah koncentrace HCV RNA C určené detekci termocykleru, 7,5 x 10 2 - 1,0 x 10 8 kopií / ml (1,5 x 3-2 10. x 10 8 IU / ml).

Co může ovlivnit výsledek?

Nespolehlivý výsledek je možné získat pomocí:

• kontaminace biomateriálu;
• přítomnost ve vzorku inhibitorů - chemických a proteinových látek ovlivňujících různé složky PCR;
• přítomnost heparinu v krvi.

Důležité poznámky

• Úroveň virové zátěže v krvi neukazuje stupeň poškození jater a závažnost onemocnění. Pro jejich vyhodnocení je nutné vyšetřit biochemické indikátory a biopsie.
• Při plánování léčby je velmi důležité určit genotyp viru hepatitidy C.

Doporučuje se také

Kdo jmenuje studii?

Literatura

• Vozianova Zh.I. Infekční a parazitické nemoci: ve 3 t. - K.: Zdraví, 2000. - T.1.: 600-690.
• Kishkun AA Imunologické a sérologické studie v klinické praxi. - M.: MIA LLC, 2006. - 471-476 str.
• Harrisonovy principy vnitřního lékařství. 16. vyd. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.

• Lerat H, Rumin S, Habersetzer F a další. In vivo tropismus genomických sekvencí viru hepatitidy C v hematopoetických buňkách: vliv virové zátěže, virového genotypu a buněčného fenotypu. Krev. 1998 15. května 91 (10): 3841-9.PMID: 9573022.
• Revie D, Salahuddin SZ. Typy lidských buněk důležité pro replikaci viru hepatitidy C in vivo a in vitro: staré tvrzení a aktuální důkazy. Virol J. 2011 11. července; 8: 346. doi: 10.1186 / 1743-422X-8-346. PMID: 21745397.

Studie PCR pro hepatitidu C: typy, indikace, přepis

Virová hepatitida C je vážné onemocnění, které se objevuje při poškození jater. U osmdesáti procent pacientů přechází do chronické formy. Vírus se množí v jaterních buňkách - hepatocytech - a způsobuje jejich smrt. Mrtvé tkáně jsou nahrazeny ložisky pojivové tkáně, fibróza se vyvíjí.

S rozvojem fibrózy jater, je schopen plnit svou funkci, začíná cirhóza, což je nebezpečné pro jeho komplikací: zvyšující se tlak v portální žíle, gastrointestinální krvácení, poruchy srážlivosti krve, mentální změny kvůli poškození mozku jádra toxických produktů.

Příčinou onemocnění je infekce virem z rodiny Flaviviridae, což je typ viru RNA. To znamená, že genetický materiál, kterým jsou syntetizovány proteiny patogenu, je kódován molekulou ribonukleové kyseliny. Infekce nastává skrze krev, sexuálně a od těhotné ženy až po plod. Bohužel mezi infekcí a počátkem produkce protilátek může proběhnout poměrně velká doba - od dvou týdnů do šesti měsíců. To neumožňuje stanovení infekce metodou enzymového imunoanalýzy a zahájením léčby v časných stádiích.

Co je analýza PCR?

PCR je metoda molekulární analýzy, která umožňuje detekci genetického materiálu patogenu již v prvním týdnu po infekci za použití polymerázové řetězové reakce. Studie má vysokou specificitu, přesnost a umožňuje nejen stanovit přítomnost nebo nepřítomnost viru, ale i jeho koncentraci a genotyp.

Pro studii si vezměte pacientovu krev, v níž se může potenciálně nalézt RNA viru. Krev se přidá primerů - uměle syntetizované krátké délce části požadovaného genu a RNA polymerázu - speciální enzym, který násobí množství genetického materiálu patogenu. Pomocí speciálního přístroje se provádí několik cyklů vytápění a chlazení. Materiál je pak analyzován a porovnán se známými virovými geny, na základě kterých se dospěje k závěru o přítomnosti nebo nepřítomnosti infekce.

Typy PCR analýzy pro hepatitidu C

Existují tři typy analýzy PCR:

1. Kvalitativní analýza PCR. První fáze studie. Umožňuje vám identifikovat genetický materiál viru v krvi.

Indikace pro analýzu PCR pro hepatitidu C

Studie PCR je předepsána v následujících případech:

• kontakt s nemocnou, která by mohla vést k infekci;
• pozitivní imunoanalýza spojená s enzymem;
• příznaky jaterní cirhózy: změny velikosti jater, zvětšení sleziny, výskyt podkožního žilního plexu na břiše;
• výskyt příznaků poškození jater: bolesti na pravé straně břicha, zožnění kůže;
• zvýšená aktivita ALT a AST v biochemické analýze krve;
• před zahájením léčby k určení virové zátěže;
• sledovat účinnost antivirové léčby;
• po dokončení léčby k monitorování relapsu;
• v přítomnosti diagnostikované hepatitidy B, aby se vyloučilo smíšené poškození jater.

Dekódování studie PCR pro hepatitidu C

Dekódování analýzy PCR a enzymového imunoanalýzy pro hepatitidu C by mělo být řešeno specialistou na hepatologii nebo na infekční nemoci. Analýza výsledků PCR je nezbytná v kombinaci s biochemickým vyšetřením krve, biopsií a ultrazvukem. Pouze kvalifikovaný lékař bude schopen analyzovat výsledky studií a na základě nich předepsat správnou léčbu.

Dekódování kvalitativní analýzy.

Genetický materiál patogenu byl nalezen v analyzovaném biologickém materiálu. Infekce je potvrzena.

Neexistuje žádná infekce nebo množství RNA patogenu je pod hranicí citlivosti.

Dekódování kvantitativní analýzy.

Normální postava pro zdravé lidi. To znamená, že v testovaném materiálu není přítomna žádná RNA hepatitidy C nebo její koncentrace je pod prahem citlivosti studie.

Koncentrace RNA je nižší než rozsah kvantifikace. Takové výsledky jsou interpretovány velmi opatrně, korelují je s údaji jiných studií, často provádějí druhou studii.

Úroveň virové zátěže v dané koncentraci je považována za nízkou. Obvykle snížení množství viru znamená, že terapie je úspěšná.

Více než 8 * 10 ^ 5 IU / ml

Úroveň virové zátěže v dané koncentraci je považována za vysokou.

Více než 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

Množství RNA je nad horní hranicí rozsahu kvantifikace. Závěry o stupni virové zátěže s tímto výsledkem nejsou možné. Obvykle se v takových případech opakuje test s ředěním vzorku krve.

Dekódování genotypizace.

Byla detekována RNA specifického genotypu

V biomateriálu je detekován virus hepatitidy C specifického genotypu a podtypu. Výsledek je kódován římskými číslicemi a latinkou, například - 1a, 2b. Existuje sedm genotypů a šedesát sedm podtypů, ale v Rusku existují pouze tři první typy.

RNA virové hepatitidy C byla detekována

V krvi se RNA nachází v Rusku vzácným genotypem, který nelze přičíst prvnímu, druhému nebo třetímu typu. Je zapotřebí více výzkumu.

Tento výsledek naznačuje, že pacient je zdravý, nebo že úroveň RNA patogenu je příliš malá.

Situace je možná, pokud je analýza PCR pro hepatitidu C negativní a enzymový imunotest detekuje protilátky proti viru. To znamená, že pacient měl v akutní formě hepatitidu C a uzdravil se. Přibližně dvacet případů infekce vede k spontánnímu vyléčení, pokud tělo pacienta vykazuje dostatečnou odolnost proti infekci.

Navzdory skutečnosti, že PCR je velmi přesná analýza, její výsledky mohou být zkresleny v následujících situacích:

• krev byla transportována do laboratoře za nevhodných podmínek, teplotní režim byl porušen;
• byl vzorek biomateriálu kontaminován;
• v krvi byly zbytky stop heparinu a dalších antikoagulancií;
• Ve zkoumané látce byly inhibitory - látky, které zpomalují nebo zastavují polymerázovou řetězovou reakci.

Výhody PCR v porovnání s jinými metodami

1. Diagnóza v počátečních fázích. PCR detekuje genetický materiál vyvolávajícího onemocnění. Pomocí analýzy imunofluorescence lze stanovit pouze imunoglobuliny - látky, které organismus produkuje v reakci na infekci. V případě infekce způsobené hepatitidou C může být interval mezi infekcí a nástupem imunitní odpovědi několik týdnů a měsíců, kdy bude ELISA neúčinná. PCR poskytne odpověď už v prvním týdnu po infekci.

Jak se připravit na dodávku krve pro výzkum PCR

Pro analýzu PCR se pro hepatitidu C sbírá venózní krev. Obvykle se z pacientovy žíly najednou odeberou dvě části krve: první se odešle pro PCR a druhá pro ELISA. To se provádí, aby bylo možné přesněji posoudit, jak špatně je pacient infikován tímto virem a jak proti němu bojuje imunita.

Obvykle jsou pro pacienta vyžadována následující pravidla:

• vyšetření krve se odebere ráno;
• přestávka mezi posledním jídlem a dodávkou krve by měla být osm až deset hodin;
• dva nebo tři dny před analýzou se musíte vzdát smažených a mastných potravin a alkoholu;
• po dobu čtyřiadvaceti hodin před analýzou by se pacient měl vyhnout fyzické námaze: nemají váhy, nechodí do tělocvičny nebo do bazénu.

Co je RNA viru hepatitidy C?

Studie RNA viru hepatitidy C je nejdůležitějším postupem, který umožňuje stanovit trvání a metody léčby pacientů s velkou přesností. Diagnostika onemocnění se skládá z několika různých krevních testů, jako jsou:

• markery hepatitidy C (anti-HCV);
• detekci RNA viru hepatitidy C (HCV RNA).

První studie se provádí s prvním podezřením na hepatitidu. Druhá možnost je nejdůležitější v léčbě HCV RNA, proto ji zvažte podrobněji.

Co je virovou hepatitidou C?

Virová hepatitida C nebo HCV je infekční onemocnění, které postihuje játra. Infekce virem probíhá v krvi. Můžete se infikovat transfuzí krve, když nejsou dodržována pravidla pro sterilizaci lékařských nástrojů. Existuje méně případů, kdy je onemocnění dosaženo sexuálně nebo od těhotné matky k plodu. Hepatitida C má 2 typy.

Chronická hepatitida C je nejnebezpečnější. Je to forma nemoci, která může trvat celý život. To vede k závažným problémům ve fungování jater, jako je cirhóza nebo rakovina. U 70-90% infikovaných lidí se choroba dostává do chronické fáze.

Nejdůležitějším nebezpečím hepatitidy C je to, že probíhá tajně, bez ikterických příznaků. V tomto případě se nejčastěji stěžují na horečku, nevolnost a zvracení, fyzickou slabost, zvýšenou únavu, ztrátu chuti k jídlu a váhu. V tomto případě dochází na malém zhutnění jaterních tkání k jeho maligní degeneraci. Z tohoto důvodu se virusová hepatitida C často nazývá "časová bomba" nebo "láskyplný zabiják".

Další zvláštnost onemocnění spočívá v jeho velmi pomalém vývoji, odhadovaný za desítky let.

Infikovaní zpravidla necítí žádné příznaky a nepochybují o jejich skutečném stavu. Často může být onemocnění identifikováno pouze tehdy, když se k lékaři odkazuje na jiný problém.

Riziková skupina zahrnuje:

• děti, které dostaly od matek virus viru hepatitidy C;
• drogově závislí;
• lidé, kteří propíchnuli části těla nebo vyrobili tetování nesterilními nástroji;
• dárcovská krev nebo orgány (do roku 1992, kdy nebyla provedena hemodialýza);
• lidé infikovaní HIV;
• Zdravotní pracovníci v kontaktu s infikovanými pacienty.

Stanovení hepatitidy C RNA

Stanovení RNA viru hepatitidy C, také nazývaný hepatitidy C PCR této studie biologického materiálu (krev), se kterou lze identifikovat v těle okamžité dostupnosti genomateriala viru hepatitidy B (nějaký daný virus je jediná částice RNA).

Hlavní testovací metodou je PCR nebo metoda polymerázové řetězové reakce.

Existují dva typy krevních testů pro stanovení HCV RNA:

Test kvality

Provedení kvalitativní analýzy umožňuje zjistit, zda je virus v krvi. Všichni pacienti, kteří mají protilátky proti C-hepatitidě, by se měli podrobit tomuto testu. Pomocí jeho výsledků získáte 2 odpovědi: "přítomný" nebo "chybějící" virus. Na výsledku pozitivního testu (zjištěného) je možné posoudit aktivní množení viru, který infikuje zdravé buňky v játrech.

Test provedený pro vysoce kvalitní PCR je naladěn na specifickou citlivost od 10 do 500 IU / ml. Pokud je virus v hepatitidě nalezen v krvi se specifickým obsahem méně než 10 IU / ml, pak může být detekce viru nemožná. Velmi nízká hodnota specifického obsahu viru je pozorována u pacientů, pro které je předepisována antivirová léčba. Proto je důležité, aby citlivost zdravotnického systému byla vysoká pro diagnostiku a stanovení kvalitativního výsledku polymerázové řetězové reakce.

Často se polymerázová řetězová reakce C-hepatitidy provádí okamžitě po nalezení odpovídajících protilátek. Následné testy, kdy prochází antivirová léčba, probíhají ve 4., 12. a 24. týdnu. Další analýza po ukončení PVT se provádí po 24 týdnech. Pak - jednou za rok.

Kvantitativní test

Kvantitativní analýza PCR RNA, někdy označovaná jako virové zátěž, určuje koncentraci (specifický obsah) viru v krvi. Jinými slovy, virální zátěž je definována jako určité množství virové RNA, která může být v určitém množství krve (obvyklé je použít 1 ml v kosti). Jednotky pro výsledky testů jsou mezinárodní (standardní) jednotky, dělené o jeden mililitr (IU / ml). Obsah viru někdy vypadá jinak, záleží na laboratořích, kde se provádí výzkum. U hepatitidy C kvantifikace někdy používá hodnoty, jako jsou kopie / ml.

Je třeba si uvědomit, že neexistuje žádná specifická závislost na závažnosti C-hepatitidy na koncentraci tohoto kmene v krvi.

Kontrola "virové zátěže" vám umožňuje určit stupeň infekčnosti onemocnění. Takže riziko smrti virem jiné osoby se zvyšuje s nárůstem koncentrace hepatitidy v krvi. Kromě toho vysoký obsah viru snižuje účinek léčby. Malá virovou zátěž je proto velmi příznivým faktorem pro úspěšnou léčbu.

Kromě toho test hepatitidy C a jeho stanovení pomocí PCR hrají velkou roli v aplikaci terapie proti onemocnění a určení úspěšnosti léčby. Na základě výsledků testů je plánován rehabilitační kurz. Například při příliš nízkém poklesu specifické koncentrace viru hepatitidy se protinádorová léčba prodlužuje a naopak.

V moderním lékařství se předpokládá, že zátěž je vyšší než 800000 ME / ml je vysoká. Zatížení nad 10000000 ME / ml je považováno za kritické. Odborníci z různých zemí a dodnes neměli stejný názor na limity virové zátěže.

Četnost kvantitativního testu

Kvantitativní analýza hepatitidy se obecně provádí před antivirovou terapií a 3 měsíce po skončení léčby, aby se zjistila kvalita léčby.

Výsledkem kvantitativního testu bude kvantitativní vyhodnocení výsledků výše uvedeného vzorku. V důsledku toho nebude vynesen verdikt "pod měřeným rozmezím" nebo "v krvi nebude zjištěn".

Parametr citlivosti kvalitativního testu je obvykle nižší než citlivost kvantitativní analýzy. Chybějící přepis naznačuje, že oba typy analýz nenalezly RNA viru. Při testu "pod měřeným rozmezím" kvantitativní analýza pravděpodobně nenalezla hepatitidovou RNA, ačkoli to potvrzuje přítomnost viru s velmi malým specifickým obsahem.

Hepatitida C a její genotypy

Genotypizace viru hepatitidy C RNA diagnostikovat přítomnost různých genetických typů hepatitida C. Věda nezná více než 10 typů v genomu viru, ale i pro lékařskou praxi dostatečně rozlišit několik genotypů, které mají největší podíl na oblasti. Určení genetického typu hraje klíčovou roli při volbě časového rozvrhu léčby, což je velmi důležité, pokud se vezme v úvahu široká škála vedlejších účinků léků proti hepatitidě.

Metody léčby virové hepatitidy C

Jediným efektivním způsobem léčby viru hepatitidy je zpravidla kombinace dvou léků: interferonu-alfa spolu s ribavirinem. Odděleně tyto léky nejsou tak účinné. Doporučená dávka léků a načasování aplikace by měla být předepsána pouze lékařem a individuálně pro každého pacienta. Léčba těmito léky může trvat 6 až 12 měsíců.

Dnešní drogy nebyly vynalezeny, což zaručuje 100% zotavení z viru. Při správně zvolené léčbě může léčba pacientů dosáhnout až 90% počtu případů.

Kvalitativní analýza PCR pro hepatitidu C

Hepatitida je závažné onemocnění, které má mnoho příčin vzniku. Jádrem jeho vývoje je přímé nebo nepřímé poškození jater. Vzhledem k jeho významu pro celý organismus lze jen odhadnout, jak špatná je patologie. V tomto článku budeme podrobněji diskutovat o charakteristikách kurzu a laboratorní diagnostice hepatitidy C.

Příčinou onemocnění je virové činidlo, které se týká patogenů obsahujících RNA. Má charakteristickou vlastnost - schopnost mutovat, tedy změnu struktury. Kvůli této infekci uniká napadení imunitního systému a ve většině případů vede k chronickému zánětu jater.

Vzhledem k existenci různých podtypů viru by měl být výběr léčiv proveden s přihlédnutím k výsledkům genotypizace. Přes dlouhou studii onemocnění a zvláštností struktury HCV nebylo možné vyvinout specifickou vakcínu proti této nemoci.

Potíže včasné diagnostiky jsou v asymptomatickém průběhu hepatitidy, což vede k tomu, že se osoba v průběhu cirhózy obrací na doktora. K detekci onemocnění včas je nutná pravidelná fyzická prohlídka. Pouze laboratorním vyšetřením krve lze identifikovat HCV a zabránit infekci ostatních. Skutečnost, že nosič infekce může po dlouhou dobu nevědět o patologii a nadále přenášet virus zdravým lidem.

Trasy přenosu

Virus se ve většině případů šíří krví, protože obsahuje největší koncentraci patogenních látek. Infekce se tak přenáší:

• s hemodialýzou;
• při pichání jehlou;
• v průběhu boje, když je kůže zraněna a dochází k hemokontaktu;
• s transfuzí krve (krevní transfúze).

Pravděpodobnost infekce důvěrnou intimitou je nevýznamná, protože sperma a vaginální výtok obsahují malý počet patogenů. Riziko infekce se významně zvyšuje, pokud je ohrožena celistvost sliznice genitálií. Toto je pozorováno u agresivního a análního sexu.

S ohledem na vertikální způsob přenosu infekce se provádí v procesu porodu. V období gestace nemůže patogen proniknout do embrya do placenty. Při přirozeném druhu se patogenní látka přenáší na dítě při traumatu na kůži, když je pozorován kontakt s matkou.

Po průniku patogenu do zdravého organismu začíná syntéza protilátek, což je ochrana před infekcí a patří do imunitní struktury. Jsou nalezeny během počáteční studie osoby pomocí ELISA.

K potvrzení diagnózy pacient podstoupí polymerázovou řetězovou reakci. Jedná se o analýzu identifikace genetického materiálu patogenního činidla a stanovení virové zátěže.

Laboratorní diagnostika hepatitidy C

Laboratorní diagnostika začíná enzymovým imunoanalýzou. Jeho hlavním úkolem je detekovat protilátky proti patogenu. Jeho účinnost je téměř 95%. Díky tomuto výzkumu v předklinickém stádiu je možné identifikovat nosič viru a odeslat ho k dalšímu vyšetření.

Kvalitativní analýza ELISA indikuje přítomnost nebo nepřítomnost imunoglobulinů v krvi pacienta. Jeho výsledek může být "pozitivní" nebo "negativní". Po obdržení prvního variantu odpovědi se osoba dostane k dalšímu vyšetření - PCR. Jeho cena závisí na kvalitě činidel a laboratoři. Náklady na polymerázovou řetězovou reakci mohou dosáhnout 4 000 rublů.

Vlastnosti PCR

Při polymerázové řetězové reakci umožňuje i malé množství biologického materiálu odhadnout virové zatížení v krvi, tj. Vypočítat koncentraci patogenů v jednom mililitru kapaliny.

S příchodem PCR byla diagnostika hepatitidy mnohem jednodušší. Analýza umožňuje identifikovat HCV RNA, stanovit stupeň infekčního procesu a infekčnost nosiče viru.

Existuje několik typů genetické diagnostiky:

1. kvalitativní analýza PCR pro hepatitidu C - potvrzuje přítomnost nebo nepřítomnost HCV v krvi vyšetřovaného:
2. kvantitativní, díky čemuž je možné vypočítat koncentraci virů a stanovit stupeň onemocnění. Výsledek je uveden v IU / ml nebo v kopii / ml (v závislosti na laboratoři);
3. genotypizace je nezbytná k určení genotypu HCV. To je nutné pro přesný výběr léků, které budou v tomto případě nejúčinnější. Analýza nepřímo naznačuje závažnost patologického procesu v játrech. Takže u třetího genotypu patogenu se nejčastěji pozoruje steatóza, jehož vývojem je akumulace tuku v hepatocytech (jeho buňkách). Navíc typ viru ovlivňuje výsledek a trvání terapeutického kurzu.

Kvalitativní analýza PCR pro hepatitidu C

Prvním krokem v laboratoři je studium biologického materiálu pro přítomnost HCV RNA. Je důležité si uvědomit, že kvalitativní analýza hepatitidy C má určitou úroveň citlivosti, a proto nemůže vždy dát správnou odpověď. V tomto případě se doporučuje provést opakovanou laboratorní diagnostiku s použitím jiných činidel.

Pro získání spolehlivých výsledků by měl být použit testovací systém s citlivostí nejméně 50 IU / ml.

Výsledek diagnózy může být buď "pozitivní" nebo "negativní". Není-li patogen nalezen v krvi, studie končí. Pokud je ve vzorku detekována patogenní látka, provede se kvantitativní výpočet virové zátěže.

Falešně negativní odpověď vzniká v případě narušení technologického procesu, například aktivní složky, které utlačují stavbu kopií patogenu do životního prostředí. Není tedy možné zobrazit skutečný obraz krve, kvůli kterému není diagnostikována lidská infekce.

Falešně pozitivní výsledek může být získán, pokud byla zkumavka pro biologický materiál a prostředí pro studium kontaminovány. Kromě toho je taková analýzová odezva možná se smíšenou infekcí, jestliže játra jsou postižena několika viry, například hepatitidou C a D.

Indikace pro kvalitativní výzkum

Lékař může pacienta přiřadit kvalitní studii pro detekci RNA viru hepatitidy C:

• při přijímání pozitivní nebo pochybné odpovědi enzymatického imunoanalýzy;
• pro ověření diagnózy;
• stanovení virové zátěže;
• staging stádium choroby;
• diagnostiku smíšené infekce. Často hepatitida C postihuje játra současně s virem "D";
• stanovení terapeutické taktiky s přihlédnutím k genotypu patogenu;
• hodnocení dynamiky změn na pozadí léčby antivirovými léky.

Výhody polymerázové řetězové reakce zahrnují:

1. vysoká citlivost techniky, která umožňuje zjištění faktu infekce v předklinické fázi;
2. identifikace genetického materiálu patogenu a ne protilátky proti němu;
3. možnost založení podtypu patogenního činidla;
4. vysokou rychlostí diagnostiky, protože není potřeba sešit na živné médium, ale stačí použít specifické zkušební systémy. Osoba obdrží výsledek po 5 hodinách;
5. univerzálnost. Analýza umožňuje identifikovat libovolný genetický materiál (RNA, DNA). Z tohoto důvodu může lékař potvrdit hepatitidu C a jiné typy onemocnění (B);
6. možnost detekce latentní infekce.

Kvantitativní výzkum

Při studiu krve polymerázovou řetězovou reakcí je možné vypočítat počet patogenů ve fixním objemu biologického materiálu. Indikátor je uveden v IU / ml. Vzhledem k analýze je možné stanovit stupeň infekčnosti pacienta, stanovit stupeň infekčního procesu a také zhodnotit účinnost farmakoterapie.

Na základě PCR se odborník rozhodne, které dávky léků mohou blokovat šíření patogenů. Dále je stanoveno trvání antivirové léčby a prognózy života. Je důležité si uvědomit, že testovací systémy jsou velmi citlivé, takže metoda umožňuje potvrdit lidskou infekci i v předklinické fázi.

Genotypizace

Vzhledem k tomu, schopnost patogenu mutovat, s cílem určit strategii léčby a výběr antivirotik vyžaduje jeho genotyp. Například léčba hepatitidy HCV 1 trvá 48 týdnů, pozitivní trend pozorovaný pouze v 60% případů. Genotypy 2 a 3 mají příznivější prognózu. Antivirotika jsou předepsána po dobu 8 měsíců a jejich účinnost dosahuje 85%.

Podle statistických údajů jsou HCV 1, 2 a 3 ve většině případů registrovány na území Ruské federace.

Při dešifrování laboratorní studie lze takovou odpověď uvést - "nepsanou". To znamená, že virus cirkuluje v oběhovém systému pacienta, který testovací systém nemůže rozpoznat. Výsledek analýzy v tomto případě naznačuje infekci osoby atypické pro danou geografickou oblast příčinného činitele.

Jak získat spolehlivé výsledky?

Pro kvalitativní výzkum PCR při detekci RNA příčinného původu hepatitidy C prokázaly správné výsledky, je nutné splnit požadavky na přípravu na laboratorní diagnostiku:

1. odebírání vzorků krve je prováděno na prázdném žaludku a "hladová" mezera by neměla být kratší než 8 hodin;
2. dva dny před zahájením studie se doporučuje přestat pít alkohol a odmítat ostré, mastné a uzené pokrmy;
3. zrušit zavedení léků, které snižují srážení krve, jako je heparin. Pokud jsou tyto léky předepsány z důvodů života, měli byste o tom informovat lékaře. Kromě toho by měl odborník vědět o přijetí jiných léků, které mohou ovlivnit výsledek laboratorního testu;
4. V předvečer sbírky biologického materiálu by neměly být prováděny fyzioterapeutické postupy a vystaveny těžké fyzické námaze.

Výsledky analýzy mohou ovlivnit nejen osoba, která daruje krev, ale i další faktory, a to:

• špatná krev;
• nedodržení doporučení pro přepravu biologického materiálu;
• nedostatečná odborná příprava pracovníků laboratoře;
• nedodržování výzkumných postupů;
• zavedení antikoagulancií (heparinu) v předvečer odběru vzorků krve. Tato skupina léků snižuje koagulaci, čímž zpomaluje práci činidel.

V různých laboratořích může být diagnostická odpověď mírně odlišná, ale tyto chyby neovlivňují konečný výsledek studie.

Zvláštní pozornost je věnována typům zkušebních systémů používaných v laboratoři. Často se dává přednost reaktantem s vysokou citlivostí. To je důležité pro pacienty s nízkým virovým zatížením, protože je obtížné zjistit.

Jak často probíhá laboratorní test?

Primárně se polymerázová řetězová reakce provádí u lidí, kteří byli testováni na protilátky proti viru hepatitidy v imunotestu. V tomto případě je určen k potvrzení infekce osoby a ke stanovení fáze onemocnění. Analýza navíc umožňuje určit podtyp viru, který je obzvláště důležitý pro výběr léků.

Další období povinného laboratorního testování je 3 měsíce od začátku antivirové léčby. Diagnostika poskytuje možnost zhodnotit účinnost léků, upravit dávku nebo je nahradit.

Kromě základních analýz může být PCR provedena dodatečně ve 4 a 24 týdnech od zahájení léčby. Pozitivní prognóza onemocnění je potvrzena snížením virové zátěže po třech měsících léčby. Například by se měla snížit z 1 milionu IU / ml na několik set tisíc.

Pokud koncentrace patogenních látek v krvi zůstává na stejné úrovni nebo se mírně zvyšuje, znamená to neúčinnost antivirových látek a vyžaduje jejich náhradu. Pomocí PCR na konci léčby je možné potvrdit oživení pacienta.

Pro správnou interpretaci výsledků laboratorní diagnózy je nutná konzultace s odborníkem na hepatologii nebo specialisty na infekční onemocnění. Vzhledem k vysokému výskytu falešných odpovědí na test ELISA se analýza používá výhradně pro primární screening. Pro důkladnější vyšetření pacienta se používá polymerázová řetězová reakce.

Může být vyléčen z hepatitidy C bez vedlejších účinků?

Dnes, moderní léky a nové generace sofosbuvir Daklatasvir s 97-100% pravděpodobností navždy tě uzdraví z hepatitidy C. Nejnovějším lék je k dispozici v ruštině na oficiální představitel indického farmgiganta Zydus Heptiza. Objednané zboží bude doručeno kuriérem do 4 dnů, platba po obdržení. Získejte zdarma poradenství v oblasti využití moderních léků, stejně jako dozvědět se o tom, jak si můžete zakoupit na oficiálních stránkách Zydus dodavatele v Rusku.