Virus hepatitidy C (HCV), antigeny cor, NS3, NS4, NS5, IgG protilátky

Share Tweet Pin it

Porážka jater pomocí viru typu C je jedním z akutních problémů infekčních onemocnění a hepatologie. Pro onemocnění je charakteristická dlouhodobá inkubační doba, během níž nejsou klinické příznaky. V této době je nosič HCV nejnebezpečnější, protože neví o své nemoci a je schopen infikovat zdravé lidi.

Poprvé se na konci 20. století hovořilo o viru, po němž začaly jeho úplné studie. Dnes víme jeho šest forem a velký počet podtypů. Tato variabilita struktury je způsobena schopností přeměňujícího činidla měnit.

Jádrem vývoje infekčního a zánětlivého procesu v játrech je destrukce hepatocytů (jeho buněk). Jsou ničeny pod přímým vlivem viru, který má cytotoxický účinek. Jedinou šanci identifikovat patogenní látku v předklinickém stádiu je laboratorní diagnostika, která zahrnuje hledání protilátek a genetickou sadu viru.

Co jsou protilátky proti hepatitidě C v krvi?

Pro člověka, který je zdaleka v medicíně, je obtížné pochopit výsledky laboratorních studií, aniž by měli nějaké názory na protilátky. Faktem je, že struktura patogenu se skládá z komplexu bílkovinných složek. Po proniknutí do těla způsobují reakci imunitního systému, jako by ho dráždily svou přítomností. Tím se začíná tvorba protilátek proti antigenům hepatitidy C.

Mohou být několika druhů. Vzhledem k vyhodnocení jejich kvalitativního složení se doktor podaří podezření na infekci u člověka, stejně jako na určení fáze onemocnění (včetně zotavení).

Primární metodou pro detekci protilátek proti hepatitidě C je enzýmová imunotest. Jeho cílem je nalézt specifickou Ig, která je syntetizována v reakci na infiltraci infekce do těla. Poznamenáváme, že ELISA umožňuje podezření na onemocnění, po které je nutná další polymerázová řetězová reakce.

Protilátky dokonce i po úplném vítězství nad virem zůstávají po celý život v lidské krvi a svědčí o minulém kontaktu imunity s patogenem.

Fáze nemoci

Protilátky proti hepatitidě C mohou poukazovat na fázi infekčně-zánětlivého procesu, který pomáhá specialistovi vybrat efektivní antivirové léky a sledovat dynamiku změn. Existují dvě fáze onemocnění:

  • latentní. Osoba nemá žádné klinické příznaky, přestože je již nositelem viru. Současně bude test protilátek (IgG) pro hepatitidu C pozitivní. Úroveň RNA a IgG je malá.
  • akutní - charakterizováno zvýšením titru protilátek, zejména IgG a IgM, což naznačuje intenzivní násobení patogenů a těžkou destrukci hepatocytů. Jejich destrukce je potvrzena růstem jaterních enzymů (ALT, AST), což je odhaleno biochemií. Kromě toho je patogenní agens RNA detekována ve vysoké koncentraci.

Pozitivní dynamika na pozadí léčby je potvrzena snížením virové zátěže. Po zotavení se nerozpoznává RNA patogenu, zůstávají pouze imunoglobuliny G, což indikuje přenášené onemocnění.

Indikace pro EIA

Ve většině případů se imunita nemůže samostatně vypořádat s patogenem, neboť nevytváří proti němu silnou odezvu. To je způsobeno změnou struktury viru, což vede k tomu, že produkované protilátky jsou neúčinné.

Obvykle se test ELISA provádí několikrát, protože může mít za následek negativní výsledek (první nemoc) nebo falešně pozitivní (u těhotných žen, při autoimunitních patologických stavech nebo při terapii proti HIV).

Pro potvrzení nebo vyvrácení odpovědi na ELISA je nutné provést opakování během jednoho měsíce a také darovat krev pro PCR a biochemii.

Prokázaly se protilátky proti viru hepatitidy C:

  1. injekčními uživateli drog;
  2. u lidí s jaterní cirhózou;
  3. pokud je těhotná žena nosičem viru. V takovém případě se matka i dítě podrobí vyšetření. Riziko infekce se pohybuje v rozmezí od 5% do 25%, v závislosti na virové zátěži a aktivitě onemocnění;
  4. po nechráněném sexu. Pravděpodobnost přenosu viru nepřesahuje 5%, nicméně v případě traumatu na slizniční genitálie, u homosexuálů, stejně jako milovníci častých změn partnerů, je riziko mnohem vyšší;
  5. po tetování a piercingu;
  6. po návštěvě kosmetologického salonu se špatnou pověstí, protože infekce může nastat prostřednictvím kontaminovaných nástrojů;
  7. před darováním krve, pokud se chce člověk stát dárcem;
  8. u zdravotnického personálu;
  9. pro zaměstnance internátní školy;
  10. nově propuštěn z MLS;
  11. pokud je zjištěn nárůst jaterních enzymů (ALT, AST) - vyloučení poškození virových orgánů;
  12. v úzkém kontaktu s nosičem viru;
  13. u osob s hepatosplenomegalií (zvýšený objem jater a sleziny);
  14. u HIV pozitivních lidí;
  15. v osobě s žloutenkou kůže, hyperpigmentací dlaní, chronickou únavou a bolestí v játrech;
  16. před plánovaným chirurgickým zákrokem;
  17. při plánování těhotenství;
  18. u lidí se strukturálními změnami v játrech, identifikovaných ultrazvukem.

Imunoenzymatická analýza se používá jako screening pro hromadný průzkum lidí a hledání nosičů viru. Pomáhá tak předcházet vypuknutí infekčních onemocnění. Léčba zahájená v počáteční fázi hepatitidy je mnohem účinnější než terapie proti cirhóze.

Typy protilátek

Chcete-li správně interpretovat výsledky laboratorní diagnostiky, musíte vědět, jaké protilátky jsou a co mohou znamenat:

  1. anti-HCV IgG je hlavním typem antigens reprezentovaných imunoglobuliny G. Mohou být detekovány během primárního vyšetření člověka, takže člověk může mít podezření na onemocnění. S kladnou odpovědí stojí za zmínku pomalý infekční proces nebo kontakt imunity s viry v minulosti. Pacient potřebuje další diagnostiku pomocí PCR;
  2. anti-HCVcoreIgM. Tento typ značky znamená "protilátky proti jaderným strukturám" patogenního činidla. Objevují se v blízké budoucnosti po infekci a indikují akutní onemocnění. Zvýšení titru se zaznamenává se snížením síly imunitní obrany a aktivace virů v chronickém průběhu onemocnění. Při remise je marker slabě pozitivní;
  3. anti-HCV celkem - celkový index protilátek proti strukturálním proteinovým sloučeninám patogenu. Často je to přesně to, co vám umožňuje přesně diagnostikovat fázi patologie. Laboratorní testování se stává informativním po 1-1,5 měsíci od okamžiku vniknutí HCV do těla. Celkové protilátky proti viru hepatitidy C jsou stanovení imunoglobulinů M a G. Jejich růst je pozorován v průměru 8 týdnů po infekci. Trvají po celý život a naznačují chorobu, která byla přenesena nebo její chronický průběh;
  4. anti-HCVNS. Indikátor je protilátka proti nestrukturálním buňkám proteinu. Ty zahrnují NS3, NS4 a NS5. První typ se nachází na počátku onemocnění a indikuje kontakt s imunitou s HCV. Je to indikátor infekce. Dlouhodobé uchování vysoké úrovně je nepřímým příznakem chronické infekce virem-zánětlivého procesu v játrech. Protilátky ke zbývajícím dvěma typům proteinových struktur jsou detekovány v pozdním stadiu hepatitidy. NS4 - indikátor stupně poškození orgánů a NS5 - naznačuje chronický průběh onemocnění. Snížení jejich titrů může být považováno za začátek remise. Vzhledem k vysokým nákladům na laboratorní testování se v praxi zřídka používá.

Existuje také další značka - HCV-RNA, která zahrnuje hledání genetické sady patogenů v krvi. V závislosti na virové zátěži může být nosič infekce více či méně nakažlivý. Pro test se používají testovací systémy s vysokou citlivostí, které umožňují v předklinickém stádiu detekovat patogenní látku. Kromě toho může PCR detekovat infekci ve stadiu, kdy protilátky ještě nejsou k dispozici.

Čas vzhledu protilátek v krvi

Je důležité si uvědomit, že se objevují protilátky v různých časech, což umožňuje přesněji stanovit stupeň infekčně-zánětlivého procesu, posoudit riziko komplikací a rovněž podezření na hepatitidu na začátku vývoje.

Celkové imunoglobuliny se začnou registrovat v krvi v druhém měsíci infekce. Během prvních 6 týdnů se hladina IgM rychle zvyšuje. To naznačuje akutní průběh onemocnění a vysokou aktivitu viru. Po nástupu vrcholu jejich koncentrace se pozoruje pokles, který naznačuje nástup další fáze onemocnění.

Pokud jsou protilátky třídy G detekovány na hepatitidě C, stojí za to podezření na konec akutní fáze a na přechod patologie na chronickou. Detekují se po třech měsících od okamžiku infekce v těle.

Někdy lze celkovou protilátku izolovat již ve druhém měsíci onemocnění.

Pokud jde o anti-NS3, detekují se v pozdější fázi v počáteční fázi sérokonverze a anti-NS4 a -NS5.

Vysvětlení studií

Pro detekci imunoglobulinů se používá metoda ELISA. Je založen na reakci antigen-protilátka, která se objevuje působením speciálních enzymů.

Obvykle se celkové skóre nezaznamenává v krvi. Pro kvantifikaci protilátek se používá pozitivní faktor "R". Indikuje hustotu testovacího značení v biologickém materiálu. Jeho referenční hodnoty jsou od nuly do 0,8. Rozmezí 0,8-1 naznačuje pochybnou odpověď diagnózy a vyžaduje další vyšetření pacienta. Při překročení jednotky R je kladný výsledek.

Antigeny hepatitidy s

Dnes víme minimálně 10 strukturální a nestrukturální proteiny, které jsou kódovány genomem HCV. Strukturní proteiny zahrnují jádro, obal 1 a obal 2. Jádrový protein je nukleokapsidový protein, zatímco obal 1 a obal 2 jsou glykoproteiny vnější obálky viru. Protein p7 je také kódován v strukturální oblasti, jejíž funkce není jasná, ale analogie s dalšími zástupci rodiny Flaviviridae naznačuje, že její funkce je spojena s uvolňováním virionu z infikované buňky.
Tento protein se štěpí buněčným peptidáza z obalu 2, avšak nikoliv ve všech případech, což způsobuje existenci obalu 2 ve formě dvou a více méně rozšířených forem.

Nestrukturované genomové oblasti HCV kóduje 6 proteinů - NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A a NS5B. Protein NS2 je proteázou závislou na viru. NS4A protein působí jako efektor nebo kofaktor NSZ-proteolytické aktivity v NS4A / NS4B, NS4B / NS5A, NS5A / NS5B řezání viru polyproteinu.

V současné době fragmenty strukturní a nestrukturální proteiny získané genetickým inženýrstvím (rekombinantní proteiny) nebo chemickou syntézou, se používají jako antigeny při konstrukci enzymatických imunoanalýzových systémů. První generace imunoenzymatických testovacích systémů se objevila na trhu v roce 1989 a byla založena na přímém testu ELISA. Jako imunosorbent byly použity fragmenty dvou proteinů NS3 a NS4 označené jako 5-1-1 a C100-3.

Současně, potvrzující testy založené na imunoblotu s rekombinantními proteiny (RIBA). Citlivost těchto testovacích systémů první generace byla u ELISA pouze 64% au imunoblotu 55%. Testovací systémy druhé generace se objevily na trhu v roce 1991. Jako antigen adsorbován na pevné fázi v těchto testovacích systémů používaných kapsidové proteiny (fragment s22-3) a antigeny nestrukturní oblast NS3 (fragmenty C200 a sZZs) a NS4, čímž dojde ke zlepšení studie senzitivity a specificity. Vzhledem k tomu, humorální imunitní odpověď na antigeny (kapsidy strukturálních proteinů) naginaetsya rychlejší gem na nestrukturálních proteinů, období od infekce detekovatelné sérokonverze byla snížena na dva měsíce.

Potvrzovací testovací systémy založené na imunoblot povoleno identifikovat antigeny podílející se na reakci. Výsledky získané s těmito testovacích systémů bylo interpretováno jako pozitivní odpovědi protilátek pouze tehdy, když se nachází v testovacím substrátu, alespoň dva antigeny, přičemž výsledek je definována v přítomnosti reakce se pouze jeden z antigenů. Bylo zjištěno, že specifičnost druhé generace testovacích systémů závisí na zdroji antigenů. V roce 1993 se na trhu objevila třetí generace testovacích systémů. Kromě výše uvedených antigenů v těchto testovacích systémů se používají také antigeny, které mají sekvenci aminokyselin, která odpovídá imunodominantní části NS5 proteinů.

V testovacích systémech první, druhé a třetí generace, as antigeny Byly použity rekombinantní nebo syntetické peptidy. V současné době je také možné identifikovat testovací systémy čtvrté generace, ve kterých se jako imunosorbenty používají kombinace rekombinantních a syntetických peptidů.

Zkušenosti s aplikací testovacích systémů různé generace na světě jsou velmi velké. Bylo zjištěno, že při použití testovací systémy z první nebo druhé generace u pacientů s akutní virové protilátky hepatitidy C byla detekována v 10-16, a v některých případech 25 do 30 týdnů od začátku, se diagnosticums třetí generace nechá toto období snížit 2-3 týdny. Podle zobecněný Zkouška citlivosti dat systémů první, druhé a třetí generace jsou příslušně 70-80%, 92-95% a 97%.

Současně, podle S. Colin, 2001, citlivost testovacích systémů ze třetí generace bylo 98,9% u pacientů s chronickým onemocněním jater a 97,2% u speciálních kontrolních panelů séra. Dosažení vysoké citlivosti testovacích systémů třetího a čtvrtého generace imunoanalýzy zahrnuje některé problémy při zajištění specifičnosti studií, které mohou v některých případech vést k falešně pozitivním výsledkům. V literatuře existují údaje o možných chybách ve specifičnosti testovacích systémů ELISA 3. Jsou společné všem testovacím systémům ELISA, včetně testovacích systémů pro diagnostiku AIDS.

Falešně pozitivní výsledky mohou být důsledkem zvýšené Obsah ve vzorcích gama-globulinů (sérový africké rasy nemocných, mnohočetný myelom, revmatoidní faktory), jaterní onemocnění (cirhóza, rakovina), autoimunitních onemocnění (kolagenové choroby, autoimunitní hepatitida), jiných virových infekcí (HIV, hepatitidy B), a dlouhodobé skladování séra měnící se teplotní podmínky. Provádění jakékoli imunizace může být také doprovázeno zvýšením frekvence falešně pozitivních výsledků. V současné době jsou doporučovány následující opatření k odstranění tohoto problému: a) opětovné umístění vzorku do stejné IFTS; b) opakovaná detekce anti-HCV v jiném IFNT; c) použití potvrzovacích testů na bázi ELISA a imunoblotu.

Použití navrhovaných ověřovacích metod výsledky často vedou k nesrovnalostem v jejich závěrečné interpretaci, jak dokládá výzkum ruských a zahraničních badatelů.

V současné době dosahují výrobci IFTS pro detekci anti-HCV vysokou citlivost nebo úplnější detekci protilátek proti NS3 nebo protilátek proti jádrovým antigenům. Srovnávací studie prováděné na různých rizikových skupinách a speciálních kontrolních panelech ukázaly, že testovací systémy, které lépe detekovaly protilátky proti NS3, byly poněkud citlivější než testovací systémy, které lépe identifikovaly protilátky proti jádrovým antigenům. Jejich citlivost byla 99,9% a 98,6%.

Celkové markery a transkripce analýzy protilátek proti hepatitidě C

Virová poškození jater dnes se často projevuje v praxi gastroenterologů. A vůdce, samozřejmě, bude mezi těmito hepatitidami C. Chystá se do chronické fáze, způsobí značné poškození jaterních buněk a naruší jeho trávicí a bariérové ​​funkce.

Hepatitida C se vyznačuje pomalým tokem, dlouhým obdobím bez projevů hlavních symptomů onemocnění a vysokým rizikem komplikací. Onemocnění po dlouhou dobu se sama nevydává a může se odhalit pouze testem protilátek proti hepatitidě C a dalším markerům.

Hepatocyty (jaterní buňky) jsou virusem ovlivněny, způsobují jejich dysfunkci a destrukci. Postupně, poté, co prochází etapou chronické léčby, onemocnění vede ke smrti osoby. Včasná diagnóza pacienta pro protilátky proti hepatitidě C může zastavit vývoj onemocnění, zlepšit kvalitu a délku života pacienta.

Virus hepatitidy C byl poprvé izolován na konci 20. století. Medicína dnes rozlišuje mezi šesti variantami viru a více než stovkou jeho podtypů. Definice odrůdy mikroba a jeho podtypu u člověka je velmi důležitá, protože určuje průběh onemocnění, a tedy přístupy k jeho léčbě.

Od prvního vstupu viru do lidské krve, před nástupem prvních příznaků trvá 2 až 20 týdnů. Více než čtyři pětiny všech případů akutní infekce se objeví bez jakýchkoli příznaků. A pouze v jednom z pěti případů je možné vyvinout akutní proces s charakteristickým jasným klinickým obrazem podle všech pravidel přenosu žloutenka. Chronický průběh infekce získává více než polovinu nemocných a pak se dostane do cirhózy jater.

Časově identifikované protilátky proti viru hepatitidy C dokáží diagnostikovat infekci v nejčastějším stádiu a poskytnou pacientovi šanci na úplné vyléčení.

Co jsou protilátky proti hepatitidě C?

Lidé, kteří nejsou příbuzní medicíně, mohou mít přirozenou otázku - protilátky proti hepatitidě C, co to je?

Virus tohoto onemocnění ve své struktuře obsahuje řadu bílkovinných složek. Při požití tyto proteiny způsobují, že imunitní systém reaguje a tvoří protilátky proti hepatitidě C. V závislosti na typu původního proteinu jsou izolovány různé typy protilátek. Jsou určeny laboratorně v různých časech a diagnostikují různé stadia onemocnění.

Jak se provádí test protilátek proti hepatitidě C?

K detekci protilátek proti hepatitidě C člověk v laboratoři produkuje plot žilní krve. Tato studie je vhodná, protože nevyžaduje předběžnou přípravu, vyjma abstinence před jídlem 8 hodin před zahájením léčby. Ve sterilní zkumavce se zachovává krve subjektu, po imunologické enzymatické analýze (ELISA) založené na vazbě antigen-protilátka jsou detekovány vhodné imunoglobuliny.

Indikace pro diagnózu:

  • poruchy činnosti jater, stížnosti pacienta;
  • zvýšené ukazatele jaterní funkce v biochemické analýze - transaminázy a frakce bilirubinu;
  • předoperační vyšetření;
  • plánování těhotenství;
  • pochybné údaje o ultrazvukové diagnostice břišní dutiny, zejména jater.

Ale často se v krvi často objevují protilátky proti hepatitidě C, a to při vyšetření těhotné nebo plánované operace. U osob je tato informace v mnoha případech šokem. Ale neměňte paniku.

Existuje řada případů, kdy jsou možné falešně negativní i falešně pozitivní výsledky diagnózy. Proto se po konzultaci s odborníkem doporučuje opakovat spornou analýzu.

Pokud jsou detekovány protilátky proti hepatitidě C, nestojí za to, aby se přizpůsobily nejhorším. Měli byste se poradit se specialistou a provést další vyšetření.

Typy protilátek proti hepatitidě C

V závislosti na antigenu, ke kterému jsou vytvořeny, jsou protilátky proti hepatitidě C rozděleny do skupin.

Anti-HCV IgG - protilátky třídy G proti viru hepatitidy C

Toto je hlavní typ protilátek stanovený pro diagnostiku infekce během počátečního screeningu u pacientů. "Tyhle markery hepatitidy C, co to je?" - každý pacient se zeptá lékaře.

Pokud jsou tyto protilátky proti hepatitidě C pozitivní, znamená to, že imunitní systém byl předtím vystaven tomuto viru, může dojít k pomalému nástupu onemocnění bez živého klinického obrazu. V době odběru vzorků není aktivní replikace viru.

Detekce imunoglobulinových dávek v krvi člověka je důvodem dalšího vyšetření (detekce RNA způsobujícího hepatitidu C).

Anti-HCV jádro IgM - protilátky třídy M na nukleární proteiny HCV

Tento typ značek začíná vystupovat ihned poté, co patogenní mikroorganismus zasáhne lidské tělo. Laboratoř lze sledovat měsíc po případu infekce. Pokud jsou detekovány protilátky proti hepatitidě C třídy M, je diagnostikována akutní fáze. Počet těchto protilátek se zvyšuje v okamžiku oslabení imunity a aktivace viru v chronickém procesu onemocnění.

Při poklesu aktivity patogenu a přechodu onemocnění na chronickou formu může tento typ protilátek v průběhu výzkumu přestat být diagnostikován v krvi.

Celkové protilátky proti HCV - celkové protilátky proti hepatitidě C (IgG a IgM)

V praktických situacích jsou častěji odkazovány na tento typ studia. Protilátky proti viru hepatitidy C jsou detekce obou skupin markerů jak M, tak G. Tato analýza se stává informativní po akumulaci první třídy protilátek, tj. 3-6 týdnů po infekci. O dva měsíce později jsou v průměru po tomto datu aktivně produkovány imunoglobuliny třídy G. Jsou určeny v krvi nemocného člověka po celý život nebo dokud není virus odstraněn.

Celkové protilátky proti hepatitidě C jsou univerzálním způsobem primárního screeningu onemocnění jeden měsíc po infekci člověka.

Anti-HCV NS - protilátky proti nestrukturálním proteinům HCV

Uvedené markery patřily ke strukturním proteinovým sloučeninám vyvolávajícím hepatitidu C. Existuje však skupina proteinů nazývaných neštrukturální proteiny. Mohou být také použity k diagnostice nemocí pacienta. Jedná se o skupiny NS3, NS4, NS5.

Protilátky proti NS3 prvkům jsou detekovány v první fázi. Charakterizujte primární interakci s patogenem a slouží jako nezávislý indikátor přítomnosti infekce. Dlouhodobá retence těchto titrů ve velkých objemech může být indikátorem zvýšeného rizika přechodu infekce do chronické formy.

Protilátky proti NS4 a NS5 jsou detekovány v pozdních periodech onemocnění. První z nich ukazuje úroveň poškození jater, druhá - o zahájení mechanismů chronické infekce. Snížení titrů obou indikátorů bude pozitivním příznakem nástupu remisí.

V praxi je přítomnost nestrukturovaných protilátek proti hepatitidě C v krvi zřídka kontrolována, neboť to výrazně zvyšuje náklady na studii. Častěji se pro studium stavu jater používá jádra protilátek proti hepatitidě C.

Ostatní markery hepatitidy C

V lékařské praxi existuje několik dalších indikátorů, které posuzují přítomnost pacienta s virem hepatitidy C.

HCV-RNA - RNA viru hepatitidy C

Příčinným faktorem hepatitidy C je obsahování RNA, proto je možné provést metodu PCR s reverzní transkripcí k detekci genu patogenu v krvi nebo biomateriálu odebraném jaterní biopsií.

Tyto testovací systémy jsou velmi citlivé a mohou detekovat i jednu jednotlivou část viru v materiálu.

Tímto způsobem je možné nejen diagnostikovat onemocnění, ale také určit její typ, což pomáhá vytvořit plán pro budoucí léčbu.

Protilátky proti hepatitidě C: interpretace analýzy

Pokud pacient obdrží výsledky analýzy pro detekci hepatitidy C enzymovou imunotestu (ELISA), může se divit - protilátky proti hepatitidě C, co to je? A co ukazují?

Při studiu biomateriálu na hepatitidu C se nezjistí celkové protilátky.

Zvažme příklady analýz IFA pro hepatitidu C a jejich interpretaci:

„Virus hepatitidy C: antigeny viru a reakce na ně, imunitní systém hostitele informační příručky Novosibirsk UDC 616,36-002,14: virus 578891] -078,33 hepatitidy C :. "

VIRUS HEPATITIS C:

antigeny viru a reakce

na ně imunitní systém

Virus hepatitidy C: antigeny viru a reakce imunitního systému makroorganismu na ně:

informační a metodický manuál / L.I. Nikolaeva.

- Novosibirsk: Vector-Best, 2009. 78 s.

Manuál popisuje aktuální pochopení molekulární biologie virem hepatitidy C (HCV) antigenu a jeho imunitní obranou hostitele při infikovaných tímto virem. Zkoumal rozdíly ve specifické humorální imunity u lidí s akutní a chronickou hepatitidou C, vzory změny v obsahu antivirových protilátek s aktuálním průběhu akutních a chronických infekcí, jakož i specifické rysy humorální imunity u dětí s markerů infekce HCV.

Příručka je určena zaměstnancům biologických a lékařských výzkumných ústavů, pracovníkům lékařských diagnostických center a studentům fakult doktorského vzdělávání lékařů.

L.I. Nikolaeva - doktor biologických věd, přední vědecký pracovník Výzkumného ústavu virologie VI Lenina. D.I. Ivanovskiy Ruská akademie lékařských věd.

Vydává se v autorském vydání.

© Nikolaev LI, 2009 © ZAO Vector-Best, 2009

SEZNAM AKRONYMŮ

ako - aminokyselina (tý) zbytek (-tki) ALT - alaninaminotransferázy APC - antigen prezentující buňky AST - aspartátaminotransferáza HCV - hepatitidy TOS C virus - hepatitida C HIV - virus lidské imunitní nedostatečnosti HPV - viru podobných částic HWR - hypervariabilní oblast IL - interleukin IFN - interferon kD - kilodaltonů LDL - nízkohustotní lipoproteiny VLDL - lipoproteinů s velmi nízkou hustotou mAb - monoklonální protilátku MHC - hlavního histokompatibilního komplexu (hlavního histokompatibilního komplexu) NTR - nepřekládané oblasti AHC - OST První hepatitidy C RT-PCR - reverzní transkripce polymerázové řetězové reakce HPV - psevdovirusnye částice PCR - polymerázová řetězová reakce CHC - chronické hepatitidy C TCL - T-helper lymfocyty CTL - cytotoxické T lymfocyty EPR - endoplazmatické retirulum

OBSAH

Kapitola 1. Virus hepatitidy C

1.1. Organizace virového genomu

1.2. Struktura virionu

Kapitola 2. Hlavní antigeny viru hepatitidy.

2.1. Struktura, funkce a epitopy obalených glykoproteinů

2.2. Nukleokapsidový antigen

2.3. Charakteristika bílkoviny NS2

2.4. Struktura, funkce a epitopy NS3 proteinu.

2.5. NS4a a NS4b polypeptidy a jejich determinanty. 35

2.6. Biologický význam a epitopy proteinů NS5a a NS5b

Kapitola 3. Role imunitního systému při omezování infekce HCV

3.1. Hlavní faktory imunitního systému, které ovlivňují vylučování viru v akutní fázi infekce. _

3.2. Úloha odpovědi T-buněk u hepatitidy C

3.3. Humorální odpověď na antigeny viru hepatitidy C 49 3.3.1. Specifické protilátky v akutní fázi infekce. _ 3.3.2. Zvláštní humorální imunity v přirozeném průběhu chronické hepatitidy C. 55 3.3.3. HCV specifickou humorální imunitu u lidí, kteří podstoupili akutní infekci se zotavením

3.3.4. Specifická humorální imunita u dětí s markery infekce HCV

ÚVOD

V současnosti se v Ruské federaci, stejně jako ve většině zemí, vyskytuje nepříznivá epidemiologická situace u parenterální virové hepatitidy [1-3]. Očekává se, že do roku 2015-2020. počet infikovaných lidí po celém světě se zdvojnásobí [2, 3]. Od roku 2001 se výskyt akutní hepatitidy C (OCS) v naší zemi snižuje [1, 4]. Po roce 2004 se začal snižovat incidence detekce osob s chronickou hepatitidou C (CHC) [5, 6].

Nicméně, u dětí až do roku 2006 zaznamenán nárůst počtu pacientů s chronickou hepatitidou C [1, 5, 6]. Odborníci odhadují, že 4.01.-04.2.% ruských občanů je infikováno virem hepatitidy C (HCV), a většina z nich mají chronickou infekci [7, 8]. Pro CHC typické progresivním průběhem vedoucí ke vzniku cirhózy jater (30%), primárního hepatocelulárního karcinomu (15%) a extrahepatálních projevů (až 74%) [9, 10].

Navzdory intenzivnímu studiu infekce HCV, je stále schopen určit příčinu častých forem chronické infekce, pro identifikaci konkrétního imunitní odpověď, což způsobuje přirozenou eliminaci viru v akutní fázi infekce, stejně jako pro vytvoření preventivní vakcínu. Je známo, že HCV antigeny jsou schopné vyvolat odpověď B- a T-buněk, což 15 až 25% lidí s akutní hepatitidou C postačuje k odstranění viru [2, 11]. Nejčastěji ale akutní fáze infekce přechází do chronické formy na pozadí více či méně výrazné adaptivní imunitní odpovědi [12, 13].

Virus hepatitidy C - unikátní patogen, který je schopen se vyhnout imunitní kontroly, vytvářet nové genetické a antigenní variace, oddálení tvorby T-helper a reakci T-killer buněk u akutní infekční hepatitidy C a způsobit znovu získáno u lidí. Intenzivní studium HCV infekce začala po identifikaci původce v roce 1989 a v první řadě sleduje hlavní cíl - vytvoření preventivní vakcíny [14, 15]. Na konci roku 1990, po neúspěšných pokusech vyvinout vakcínu založenou na rekombinantních obalových proteinů HCV v zaměření studie antivirové imunity byl vypracován na specifickou odpověď T buněk.

Je třeba poznamenat, že studie ochranných imunitních mechanismů u hepatitidy C je do značné míry omezena nedostatkem dostupného laboratorního modelu infekce, virus postihuje pouze lidi a šimpanzy. Jak ukázal A. Basset a spoluautoři, u šimpanzů infikovaných virem je průběh infekce lehčí a obnovení se vyskytuje častěji než u lidí [16].

Tento manuál shrnuje aktuální údaje o HCV antigenech a zkoumá možnosti imunitní ochrany lidského těla v této infekci. Zvláštní pozornost je věnována konkrétní humorální odezvě, neboť spadá mimo oblast intenzivního studia. Jak uvedli zahraniční vědci, je to způsobeno zejména nedostatkem dostupných metod pro analýzu protilátek proti odděleným (individuálním) antigenům HCV [17]. Od roku 1998 se v naší zemi vyráběly imunoenzymové testovací systémy pro analýzu imunoglobulinů pro jednotlivé HCV antigeny, které umožnily domácím specialistům získat cenné informace o charakteristikách humorální odpovědi na virové proteiny.

6 Kapitola 1. Virus hepatitidy C

1.1. Organizace virového genomu 1989-1990., Díky vývoji molekulárně genetických technik umožněno klonování a izolace HCV genomu, a virus sám o sobě, jejichž existence byla předpovídal dříve [14, 15, 18, 19]. Vlastnosti organizace genomu HCV umožnily zařazení do rodiny Flaviviridae do nového rodu Hepacivirus, který se později stal členem jiných virů [15, 20, 21]. HCV genom je jednovláknová RNA mající kladnou polaritu a obsahuje přibližně 9400-9600 nukleotidových zbytků. Je charakterizován: jedinečným otevřeným čtecím rámcem, krátkými 5- a 3-koncovými netranslatovanými oblastmi (NTO) a oblastmi s vysokou frekvencí mutací [21, 22].

Otevřený čtecí rámec kóduje jeden proteinový prekurzor, nazývaný polyprotein, který se skládá z 3008 až 3037 aminokyselinových zbytků (jak) [23]. Jako výsledek společného a posttranslačního proteolytického štěpení polyproteinu a zpracování produktů se vytvářejí strukturní a nestrukturální proteiny. Rozložení virových antigenů v polyproteinu, místa působení proteáz a stupeň homologie mezi různými izoláty viru je znázorněn na obr. 1 [24].

Vzhledem k genetické rozmanitosti HCV na počátku 90. let bylo obtížné klasifikovat jeho izoláty. V roce 1994 na II. Mezinárodní konferenci o viru hepatitidy C a souvisejících virech bylo dohodnuto, že založí klasifikaci viru na genomové oblasti kódující NS5b protein [25]. V důsledku toho bylo izolováno 6 genotypů a asi 80 podtypů HCV.

(5-NTO) * (3-STO) 92% 81% 55% 65% 57% 70% 65% 66% 70% 26% Obr. 1. Schéma lokalizace virových antigenů v polyproteinu [24]. Místa působení buněčných proteáz jsou označena šipkami shora, pro serinovou proteázu HCV - zespodu. Místo štěpené virovou proteázou NS2 / NS3 je označeno hvězdičkou.

Níže je procentní podíl homologie mezi izoláty viru s ohledem na HTO.

Hlavní genotypy jsou homologní o 65-70%, subtypy (podtypy) - o 77-80% a genetické varianty v jednom izolátu - o 95-97%. Později v roce 2005 skupina odborníků objasnila klasifikaci HCV [26]. Doporučuje se ponechat termín "genotyp" namísto "hliněného", který navrhli někteří badatelé. Při psaní virových izolátů by měla být analyzována oblast jádra / El, NS5b genomu a stanovena nukleotidová sekvence celé virové RNA, pokud existuje podezření na rekombinaci [27]. Všechny známé izoláty HCV jsou nyní zařazeny do šesti genotypů a genotypy 7-10 zavedené některými výzkumníky jsou považovány za podtypy.

Nejkonzervovanější částí HCV RNA je 5-terminální HTO-přibližně 92% homologie [22]. Kvůli tomuto konzervativnímu místu bylo možné detekovat virovou RNA v různých izolátech pomocí RT-PCR (reverzní transkripce polymerázové řetězové reakce) [28, 29]. V infikovaném organismu existuje HCV jako množina geneticky odlišných, ale blízce příbuzných variant nazvaných quasispecies, jejichž nukleotidová sekvence je několik procent [30].

Během infekčního procesu dochází k imunizaci viru: některé varianty HCV jsou odstraněny hostitelským imunitním systémem, zatímco jiné vznikají [31, 32]. Nové varianty viru se objevují kvůli nepřítomnosti RNA-dependentní RNA polymerázy HCV, korigující aktivity 3-exonukleázy [33]. Proto chyby, které se vyskytují během replikace virové RNA, nejsou vyloučeny.

Většina změn v nukleotidové sekvenci HCV RNA se nachází v tak zvaných synonymních místech, jejichž mutace neovlivňují biologicky důležité vlastnosti viru. Srovnání synonymických webů vám umožňuje zjistit odlišnost srovnávaných variant virů. Při studiu izolátů HCV izolovaných na různých územích bylo zjištěno, že proniknutí viru do lidské populace se pravděpodobně objevilo zhruba před tisíci lety [34, 35].

První prvek HCV genomu, 5-terminální HTO, sestává z 341 nukleotidových zbytků a vykonává důležité biologické funkce. Tato oblast tvoří interakce s virovou RNA ribozom 40S podjednotky tvoří komplexní strukturu vazebné místo s názvem anglickou zkratkou IRES (vnitřní ribozomální vstupní místa) [36]. IRES HCV má složitou prostorovou strukturu (obrázek 2) [37, 38].

- 480 60- 140-440-5500

Obr. 2. Schéma sekundární struktury IRES se čtyřmi hlavními doménami (I-IV), pseudo-node, main (1) a dalšími (2) kodony je dáno s malými změnami od článku D.M. Forton a spoluautoři [38].

Po vazbě IRES HCV na 40S podjednotku ribozomu začíná tvorba aktivního translačního komplexu a přenos virového genomu začíná mechanismem nezávislým na čepici [37, 39]. Za účelem zahájení translace se kodon AUG použije v pozici 342 (obrázek 2). Bylo zjištěno, že během interakce RNA viru a podjednotky 40S ribozomu v tomto druhém se vyskytují komplexní konformační změny, což je jedinečný proces [40].

Pro translaci genomu HCV jsou zapotřebí obvyklé (kanonické) buněčné iniciační faktory eIF2 a eIF3. Protože aktivní komplex je tvořen translační pomalu, je počáteční rychlost překlad je nízká, ale zvyšuje interakci a RNA noncanonical buněk aktivačních proteinů, jako je antigen La, heterogenní jaderný ribonukleoproteinové L, a ribozomální protein rpS5 několika neidentifikovaný buněčného proteinu [41-44 ].

Schopnost IRES HCV vázat se na ribosom může inhibovat určité buněčné proteiny, peptidy a vitamin B12 [45-49].

Krátké RNA, nazývané krátké rušivé RNA, které jsou komplementární k místům IRES, navazují na ně, zastavují přenos genomu viru [50]. Ukázalo se, že antivirový účinek alfa, beta a gamma interferonů se projevuje také na úrovni IRES-mediované translace [51]. Bylo zjištěno, že HCV má specifické tkáňové rozdíly ve struktuře IRES [38, 52, 53]. Je možné, že toto je jeden ze způsobů, jak zajistit perzistenci viru v buňkách mnoha tkání.

Při replikaci genomu HCV se vytváří RNA s negativní polaritou nazývanou negativní RNA vlákno. Je nestabilní, štěpeno buněčnými enzymy (za 30 minut téměř o 60%) [54]. V infikované buňce je poměr plus a mínus řetězců RNA 10: 1 [55]. Pro účinnou replikaci virového genomu je požadován buněčný protein PTB (protein vázající polypyrimidinový trakt), který váže polypyrimidinovou RNA dráhu [56]. V modelových experimentech bylo zjištěno, že asi 1000 kopií RNA plus řetězců a asi 100 kopií RNA mínusových řetězců je vytvořeno na infikovanou buňku za den [57].

Posledním prvkem genomu - 3-terminální NTO - podílejících se na iniciaci replikace (iniciačního místa se nachází v minustsepi RNA), a regulace translace při stabilizaci genomové RNA [41, 59-61]. Ve struktuře 3-terminálního NTO se rozlišují tři prvky:

1) krátký úsek variabilní sekvenci skládající se z 40 nukleotidových zbytků, 2) poliuridinovy ​​traktu, obsahující 36 nebo více zbytků uridin, a 3) unikátním konzervované oblasti X, který se skládá z 98 nukleotidů [60]. Oblast X má složitou sekundární strukturu, ve které je izolována jedna dlouhá a dvě krátké vlasy [61]. Bylo zjištěno, že tato oblast je přímo zapojen do tvorby replikační komplex, regulace iniciace translace a replikace [41, 62, 63].

1.2. Bylo prokázáno, že struktura virionu v časném experimenty s HCV filtrace přes filtry s různým průměrem pórů, že velikost virion 30 až 60 nm, která se shoduje s údaji z elektronové mikroskopie analýzy viru v biologických vzorcích [64, 65]. V časných 1990 ze séra lidí s hepatitidou C byly izolovány částice RNA obsahující prostředek, který, když ultracentrifugace v gradientu soustředěna v pěti oblastech v rozsahu hustoty 0,95-1,21 g / ml [66-68]. Každá z těchto zón byla použita k infekci šimpanzů [68]. A ukázalo se, že oblast s hustotou 0,95-1,10 g / ml měla nejvyšší infekčnost. Tato neobvykle nízkou hustotou virové částice je vysvětlen vztah HCV s lipoproteiny o nízké hustotě v séru (LDL) a velmi nízkou hustotou (VLDL) [19, 66].

Lipoproteiny jsou kulovité částice tvořené jednou vrstvou fosfolipidů s cholesterolem inkluze a apolipoproteiny B a E, je vnitřní dutina je vyplněna částice triglyceridů [69]. Hlavní funkcí lipoproteinů je dodávka triglyceridů a cholesterolu do různých buněk. Syntéza lipoprotein se vyskytuje v endoplazmatickém retirulume (EPR), hepatocyty, kde se pravděpodobně interagují s belkovolipidnoy HCV obálky tvoří komplex [70]. Části obálky HCV odpovědné za tvorbu komplexu viru s LDL / VLDL dosud nebyly stanoveny. Tento komplex se nazývá lipovirální částice. Viriony v komplexu jsou chráněny z protilátek neutralizující virus, a může proniknout do hepatocytů pomocí receptoru pro LDL [68]. Asi 75% lipoproteinů cirkulujících v krvi se vrátí do hepatocytů prostřednictvím speciálního receptoru pro LDL; zbytek spadne do hepatocytů jinak. Bylo zjištěno, že asi 20% virionů není spojeno se sérovými lipoproteiny [71].

Vyšetřování odolnosti HCV vůči organickým rozpouštědlům, A.M. Prince a kolegové ukázali, že virus má skořepinu lipid-protein, který je vytvořen z hostitelské buňky a lipid virové povrchové proteiny [72]. V následujících letech, HCV struktura byla zpřesněna pomocí vysoké rozlišení elektronového mikroskopickou analýzou jaterních biopsií pacientů s hepatitidou C, a syntetické částice, podobné viru (HPV). HPV se tvoří po expresi fragmentu HCV genomu (nazývaného replikon) v různých vektorech. Jako vektory byly použity viry vezikulární stomatitidy, vakcínie a bakulovirus [73-75]. Když je začleněn do genomu retroviru (HIV nebo viru leukémie myší) nukleotidové sekvence kódující obalové proteiny HCV, které umožňují příjem psevdovirusnye částice (HPV), v plášti, který obsahoval proteiny E1 a E2 HCV, a všechny ostatní prvky částic jsou retrovirové [76, 77 ]. Použití HPV usnadnilo studium morfologie a sestavení HCV, stejně jako studium vlastností proteinů. Zejména rozměry byly specifikovány průměr virion 50 nm, což odpovídá současným údajů získaných ve studii nativního viru izolované z pacientů s hepatitidou C [78, 79].

Na Obr. 3 je elektronový mikrofotogram HPV získaný transmisním elektronovým mikroskopem [79].

Obr. 3. Elektronová mikrofotografie s negativním kontrastem HPV [79].

Dole vlevo, se silnějším vzrůstem, je zobrazen jeden virion s povrchovými bílkovinami ve tvaru T.

Pod obálkou HCV je nukleokapsid, který je tvořen jádrovým proteinem a obsahuje virovou RNA (obrázek 4). Rozměry nukleokapsidu, stanovené elektronovou mikroskopickou analýzou virových částic s neformovaným obalem, jsou 33-40 nm [74].

Dosud nebylo možné izolovat HCV v množství dostatečném pro jeho podrobné studium, a to buď od nemocných, nebo od šimpanzů. To je způsobeno nízkým obsahem viru, jeho heterogenitou a schopností vytvářet komplexy s protilátkami a lipoproteiny v krvi. První zpráva o kultivaci HCV na transplantovatelných buněčných kulturách byla provedena P.G. Deryabin a spoluautoři v roce 1997 [81]. V roce 2005 publikovaly čtyři skupiny výzkumníků experimentální údaje o expresi viru v transplantovatelných buněčných kulturách s produkcí infekčních virových částic [82-85].

Morfogenez HCV se provádí v membránách endoplazmatického retiruluma, vakuol v Golgiho aparátu a buněčné cytoplazmě. Strukturní proteiny viru se štěpí z polyproteinu pomocí buněčných enzymů (signálních peptidáz a peptidpeptidáz). Jádro proteinu zůstává na cytoplazmatické povrchu EPR a lipidů vakuoly v cytoplazmě a obalové proteiny částečně proniknout do vnitřní dutiny EPR.

V endoplazmatickém retikulu tvoří E1 a E2 proteiny komplex a podléhají zpracování, které pravděpodobně končí sekrečními vakuoly Golgiho aparátu. Nukleokapsid po obalení RNA je potažen a virus je vařený do cisterna EPR. Na základě výsledků analýzy jaterních biopsií pacientů s HCV na základě V. Falcon et al navrhli, že konečná fáze morfogeneze viru dochází v EPR jako cytoplazmatických vezikulárních struktur [86]. Vytvořené virové částice opouštějí buňku v sekrečních vakuolách [87].

Rychlost tvorby virionů u pacientů s chronickou infekcí HCV může dosáhnout 1012 částic denně a poločas virionů v krvi je přibližně 3 hodiny [88].

Kapitola 2. virus hepatitidy C antigen vztlaková obalové proteiny jsou HCV E1 a E2 proteiny, nukleokapsidový a nestrukturální proteiny NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A NS5B.

Navíc jsou z virového genomu také přenášeny menší polypeptidy: peptid p7, protein F a málo studovaný polypeptid s molekulovou hmotností asi 8 kDa [89].

Poslední dva menší proteiny jsou syntetizovány jako výsledek čtení genetické informace z dalších iniciačních kodonů lokalizovaných v oblasti genomu kódujícího jádrový protein [22]. Bylo zjištěno, že malý studovaný polypeptid s molekulovou hmotností přibližně 8 kDa se čte z kodonu 2 (viz obr. 2). Uspořádání HCV proteinů v membráně EPR je znázorněno na obr. 5.

Peptid p7, nazývané také HCV viroporinom formy heptamers tvořící kanál kationtů specifické, jehož hodnota v biologii viru není dosud plně stanovena [91]. Předpokládá se, že se účastní počátečních fází morfogeneze viru. Nedávno byl prokázán účinek peptidu p7 na infekční vlastnosti HCV [92].

F protein je syntetizován ve smyku čtecího rámce genetického kódu na nukleotidovou zbytek (nový iniciační kodon začíná 341 th nukleotidového zbytku, viz. Obr. 2) a má

EPR dutina Obr. 5. Uspořádání HCV proteinů v EPR membráně je dáno s malými změnami od článku B. Lindenbach a C.M. Rýže [90].

konzervativní aminokyselinové sekvence [93, 94]. Hypotéza o účasti tohoto proteinu v rozvoji perzistentních VGSinfektsii [94, 95]. Možná, že existuje souvislost mezi proteinu F a vzhled jaterní steatózy u chronické hepatitidy C, bylo prokázáno, že protilátky proti tomuto proteinu, se nacházejí pouze u 10% pacientů s chronickou hepatitidou C, ale je-li jejich vývoj míra detekce jaterní steatózou těchto protilátek zvýšila trojnásobně [96]. V současné době probíhá intenzivní studie biologických funkcí malých proteinů HCV.

2.1. Struktura, funkce a obalovým glykoproteinem epitopy Opláštění E1 proteiny (ako 192-383) a E2 (ako 384-746) jsou fragmenty polyproteinu jsou uspořádány pro dřeňové (core) proteinu (viz. Obr. 1) [97, 98]. Podle elektroforetickou analýzou, molekulární hmotnost proteinu E1 je 31 kDa, E2 - 70 kDa. Oba proteiny patří k transmembránovým proteinům a obsahují sacharidové zbytky [97]. Hlavní funkce těchto proteinů

- interakce s receptory a zajištění penetrace virového genomu do cytoplazmy buňky.

Biosyntéza proteinů HCV se provádí na ribozómech spojených s EPR. V důsledku speciálního translokačního signálu vstupuje většina polyproteinového úseku odpovídající E1 a E2 do dutiny cisterna EPR. Tam, buněčné signální peptidázy štěpí tyto proteiny od sebe, stejně jako od jádra proteinu [62, 97-99]. (Akce místa peptidázy jsou uvedeny na obr. 1.) Poté, že obalové proteiny HCV zůstávají vázány na membrány kvůli transmembránových částmi EPR lokalizovaných na COOH-konci oblastech polypeptidových řetězců [99, 100].

Komplexní proces prostorového stohování nebo skládání proteinů E1 a E2 začíná současně s překladem a končí po něm. Hlavní stadia prohnutí proteinů E1 se provádějí po dobu 1 hodiny pomocí buněčného proteinu chaperonu calnexinu, který s ním tvoří krátkodobý komplex [101, 102]. Za účasti kalnexinu z osmi cysteinových zbytků glykoproteinu E1 se tvoří čtyři disulfidové (S-S) vazby. Za další hodinu je prostorová struktura glykoproteinu E1 stabilizována [103].

Skládání proteinu E2 je delší (přibližně 4 hodiny) než u proteinu E1.

Zjevně je to kvůli přítomnosti cysteinových zbytků v molekule 18-20, které mohou tvořit 9-10 disulfidových vazeb a intenzivní glykosylaci proteinu E2 [104]. Prostorové balení proteinu E2 probíhá za účasti kalnexinu a neidentifikovaných chaperonů, stejně jako proteinu E1 [103, 104].

Předpokládá se, že po dokončení se v proteinu E2 vytvoří 8-9 disulfidových vazeb v jednom polypeptidu a jedna S-vazba mezi oběma E2-E2 polypeptidy.

Komplex proteinů shellů E1-E2 se vytváří bez vzniku kovalentních vazeb [103-105]. Stechiometrie tohoto komplexu dosud nebyla prokázána, pravděpodobně převažující složkou je protein E2 [104]. Ne vždy skládání proteinů a tvorba komplexu glykoproteiny probíhá správně, nesprávně sestaveny E1 a E2 proteinů, a jejich komplexy se nacházejí v EPR nádržích vysoké molekulové agregáty, [105].

Pod působením buněčných enzymů sítě EPR jsou proteiny E1 a E2 glykosylovány, čímž vzniká tak zvaná chitobiózová kůra [97].

Proces glykosylace začíná současně se sklápěním bílkovin a končí vakuoly Golgiho aparátu. Glykosylace poskytuje správné prostorové balení, tvorbu specifické antigenní struktury a výskyt biologické aktivity v obalených glykoproteinech. Navíc po glykosylaci mohou být proteiny E1 a E2 sekretovány z buněk a jsou lépe chráněny před jistými proteolytickými enzymy buňky.

Obě HCV glykoprotein jsou transmembránové proteiny typu I, které se vyznačují přítomností NH2-koncové ektodomény (tzv proteinové části, vystavené z lipidové dvojvrstvy membrány viru) a COOH-terminální transmembránové oblasti. jeden nebo dva transmembránový řetězec podílí na tvorbě E1-E2 komplexu a opěrných glykoproteinů v lipidové dvojvrstvy membrány nalezené v viru E1 a E2 proteiny, [106-108].

V poslední době je velká pozornost věnována výzkumníci hledání v obálce HCV glykoproteinu fúzní peptid (fúzního peptidu), který poskytuje spojení lipidových dvojvrstev endosomech a viru. U HCV je model (který byl částečně potvrzen) penetrace do buňky navržen analogicky s procesním znakem viru klíšťové encefalitidy. Podle tohoto modelu, ve styku s HCV receptoru komplexu viru receptoru, která proniká do buněk ve formě endocytických vakuol (tento proces se označuje jako receptorem zprostředkované endocytózy). V další fázi se endocytózní vakuol spojuje s endozomem (struktura cytoplazmatických buněk vezikulárních buněk), která je charakterizována nízkými hodnotami pH. Pod vlivem kyselého prostředí endozomu povrchové glykoproteiny HCV procházejí konformační změny, které vedou k zavedení a vykazující fúzní peptid v endosomální membráně. Tento proces spouští fúzi lipidové dvojvrstvy viru a endozomální membrány, která končí uvolněním HCV RNA do cytoplazmy buňky.

Dosud nebylo zjištěno, který z obou glykoproteinů HCV obalu je peptid fúze. Existuje několik předpokladů o jeho lokalizaci v proteinu El: v oblasti s aminokyselinovými zbytky 265-287 nebo 272-281 nebo 275-293 [107, 109]. Zjištěno podobnost v primární struktuře zamýšlené fúzní peptid HCV subtypu 1a (ako 265-287), se stejnými peptidy v některých zástupců rodiny Flaviviridae (viz obr. 6) [109].

V glykoproteinu El HCV byly identifikovány čtyři N-glykosylační místa: to jsou zbytky asparaginu v pozicích 196, 209, 234 a 305 [110-112]. Při použití metody bodových mutací v virové RNA kódující protein E1 byl schopen prokázat, že vymizení glykosylační místa v poloze 209 a 234 nemá vliv na tvorbu E1-E2 komplexu [110, 113]. Oligosacharidové zbytky

Obr. 6. Primární struktura fúzního peptidu u jednotlivých členů rodiny Flaviviridae [109].

TBE - klíšťové encefalitidy, virus VZHL - žlutá zimnice virus, VYAE - virus japonské encefalitidy, den - dengue virus, Gunwi County - virus Cunha, WNV - virus západonilské horečky. HCV podtržené zbytky obecných amino kyselin (dva 2 cystein a glycin), zbytky kurzívou aminokyselin, podobný v jejich fyzikálně-chemické vlastnosti.

v pozicích 196 a 305 jsou potřebné pro správné prostorové stohování proteinu El a také pro tvorbu glykoproteinového komplexu E1-E2. Kromě toho se ukázalo, že sacharidové zbytky v pozici 196 a 209 glykoproteinu El jsou nezbytné k udržení infekčnosti viru [112].

Na Obr. 7 je hypotetický model prostorového umístění E1 proteinu vypočtené podle proteomické analýzy, počítačové simulace a srovnávací analýzu obalového proteinu E viru TBE.

Oligosacharidových řetězců glykoproteinů HCV tvořen většinou 6-9 manosové zbytky připojené na dvou N-acetylglukosaminových zbytků [114, 115]. Pouze E2 protein detekován více komplexní typ oligosacharidů s menším počtem manosy zbytky, které částečně nahrazuje fukózy a N-acetylglukosaminu zbytky jsou v koncové poloze oligosacharidové řetězce [115].

Glykoprotein E2 zjištěna 11 glykosylační místa na asparaginových zbytcích v poloze 417 (1) 423 (2) 430 (3), 448 (4), 476 (5), 532 (6), 540 (7), 556 (8 ), 576 (9), 623 (10) a 645 (11) [111, 112, 115].

Ukazuje se, že komplex glykoproteinů E1-E2 se nevytváří, pokud

Obr. 7. Schéma navrhované prostorové struktury proteinu El je prezentováno v jednoduché modifikaci od článku R.F. Garry a S. Dash [107].

Legenda: lanový - polypeptidový řetězec, válce - alfa helix, šipky - struktura beta, tridenty - oligosacharidové řetězce, černé segmenty - disulfidové vazby.

neexistuje žádný oligosacharidový řetězec v pozici 10 proteinu HCV E2.

Virus ztrácí svou infekčnost, pokud v glykoproteinu E2 v pozicích 1, 2, 4, 8, 10 a 11 [111] nejsou žádné sacharidové zbytky. Kromě toho bylo zjištěno, že oligosacharidové řetězce v polohách 1, 6 a 11 se podílejí na tvorbě epitopů, na kterých se tvoří protilátky neutralizující virus [108, 116].

Bylo zjištěno, že viry podtypu la a 3a se liší v počtu oligosacharidových řetězců v obalených proteinech [117]. V glykoproteinu E2 jsou na rozdíl od proteinu E1 upraveny oligosacharidové zbytky v poloze 423 a 430 [115, 116].

Glykoprotein E2 je obtížné studovat pomocí fyzikálně chemických metod analýzy proteinové struktury, především kvůli velkému množství sacharidových zbytků. Množství oligosacharidových řetězců v glykoproteinu E2 ztěžuje získání krystalů bílkovin pro rentgenovou difrakční analýzu a provádění jaderné magnetické rezonance. Z tohoto důvodu, model Sekundární struktura byla vyrobena pro zkrácené formy (ektodomény) E2 proteinu pomocí počítačových programů, které předpovídají poskládání proteinu a srovnávací analýzy již studovány obalem čeledi flaviviridae proteiny [112]. Jedná se o fragment ektodomény glykoproteinu E2 (ako 384-660) bez jeho transmembránovou část, která má mnoho biologických vlastností tkvící v plné délky E2 proteinu. Může vytvářet komplex s glykoproteinem E1, interagovat s monoklonálními protilátkami k konformačním epitopům proteinu E2, stejně jako s heparin sulfátem a některými buněčnými receptory.

V tomto prostorovém modelu ektodomény glykoproteinu E2, navržené A.T. Yagnik a kol. Odhalili nízký obsah sekundárních strukturních prvků (asi 37%) a převahu neuspořádaných míst [113]. Prvky sekundární struktury jsou představovány převážně beta-foldními oblastmi a několika krátkými alfa-helikálními fragmenty. Jedná se o první a zatím jediný model glykoproteinu E2, který zjevně odráží jeho skutečnou sekundární strukturu s nějakou aproximací. Vzhledem ke složitosti a nejednoznačnosti tohoto modelu není jasně zastoupen.

Jedním z hlavních rysů primární struktury proteinu E2 je přítomnost oblastí s nestabilní aminokyselinovou sekvenci, která se nazývá variabilní a hypervariabilní [118, 119]. V proteinu E2 byly nalezeny tři oblasti s velmi vysokou frekvencí aminokyselinových substitucí, to jsou hypervariabilní oblasti (HWR). Původ HWR lokalizovány v NH 2-terminální části proteinu E2 v místě aminokyselinových zbytků 384-411, HWR druhý - na místě se zbytky 474-482 a třetí v poslední době zjištěno, - na místě se zbytky 431-466 nebo 434-450 [120- 122].

Bylo zjištěno, že první HWR, i přes vysokou frekvenci aminokyselinových substitucí, vždy zachovává celkový pozitivní náboj a stabilní profil hydrofilnosti / hydrofobicity.

Navíc jeho čtyři aminokyselinové zbytky v pozicích 385, 389, 406 a 409 jsou velmi konzervativní, tj. E. vyskytují se velmi často u studovaných izolátů HCV [123, 124]. Všechny různé varianty aminokyselinové sekvence prvního HWR může být snížena na konvenční sekvenci, která se skládá z nejčastěji se vyskytujících aminokyselinových zbytků v každé z 27 pozic (384-411) proteinové části E2 [124, 125]. Biologická úloha první HWR je poskytnout časná stadia HCV sorpce na povrchu buněk a v „pohyblivý cíl“ představující imunitní systém, který je tvořen neustále mění nové antigenní varianty tohoto proteinu E2 oblasti [31, 123, 126].

Existuje důkaz, že druhá a třetí HRV se podílejí na vazbě HCV na buněčné receptory [121, 127].

V důsledku variability aminokyselin ve všech třech hypervariabilních oblastech glykoproteinu E2 se tvoří tzv. Nepolapitelné varianty viru, tj. pro které v současné době neexistuje žádná imunitní odpověď.

Dalším rysem obalového proteinu E2 - přítomnost míst polypeptidového řetězce, které mají podobnost s jinými proteiny.

Tento jev se nazývá molekulární mimikry. Tak, dvanáct konzervované zbytky aminokyselin (pozice 660-671), E2 protein domény vytvořené RePHD identické fosforylačních míst v ribozomální translační iniciační faktor eIF2a [128]. Díky této podobnosti může HCV zastavit antivirový účinek IFN-alfa. Protein kináza R po aktivaci interferonem-alfa by měla fosforylovat faktor eIF2a, což následně vede k zastavení translace HCV RNA. Ale protein E2, který využívá doménu ReHDD, interaguje s proteinovou kinázou R místo faktoru eIF2a a biosyntéza virových proteinů pokračuje [129].

V NH2-terminální části proteinu E2 bylo pozorováno molekulární mimikry se sekcimi lehkých a těžkých řetězců imunoglobulinů a receptoru T-buněk [118]. Předpokládá se, že tato strukturní podobnost může být příčinou autoimunitních poruch u pacientů infikovaných HCV, jako je směsná kryoglobulinemie typu II a B-buněčný non-Hodgkinův lymfom [130].

Jak bylo uvedeno výše, obalené proteiny HCV poskytují interakci viru s buněčnými receptory. Bylo zjištěno, že tyto zbytky oligosacharid skořepinové glykoproteinů může hrát klíčovou roli v navázání viru a její případná receptorům, jako jsou DC-SIGN (CD209), L-SIGN (CD209L) a asialoglykoproteinový receptor [117, 131, 132]. První dva potenciální receptorové proteiny jsou typu C lektinu a působit jako povrchové molekuly adheze, poskytující kontakt mezi dendritických buněk, endoteliálních a T-buněk. L-SIGN receptor přítomný na povrchu endoteliálních buněk sinusoid jater a lymfatických uzlin, a DC-SIGN - na dendritických buněčném povrchu. Tyto receptory mají zvláštní uglevodraspoznayuschy část vápníku závislé CRD (rozpoznávání uhlohydrátů domény), které se mohou vázat k sacharidovým zbytků E1 a E2 proteiny [117, 131]. Vzhledem k tomu, že receptory DC-SIGN a L-SIGN nejsou nalezeny v hepatocytech, nelze je považovat za hlavní cíle HCV. Tyto receptory zachycují, akumulují virus a přenášejí je do T buněk a případně do hepatocytů.

Asalogaloglykoproteinový receptor je přítomen na povrchu jaterních buněk a umožňuje pronikání glykoproteinů, které na konci sacharidových řetězců neobsahují zbytek sialové kyseliny. S tímto receptorem jsou specificky asociovány rekombinantní proteiny E1 a E2 získané expresí odpovídajících fragmentů HCV RNA v buňkách hmyzu [132].

Bylo zjištěno, že rekombinantní E2 protein interaguje s jiným potenciálním virovým receptorem (nebo koreceptem), transmembránovým CD81 proteinem [133]. Tento receptor je přítomen na povrchu většiny buněk (s výjimkou erytro- a krevních destiček) a podílí se na buněčných funkcích spojených s adhezí, mobilitou, metabolickou aktivací a transformací. CD81 patří do skupiny proteinů tetrapaninu a má charakteristickou strukturu: 4 transmembránové řetězce a velkou a malou extracelulární smyčku. Ukázalo se, že velká extracelulární smyčka CD81 se specificky váže na rekombinantní virový protein E2 [133].

V oblasti A.T. Yagnik a spoluautoři v této interakci zahrnují dvě povrchové oblasti proteinu E2 s jak 474-494 a 522-551 [112]. Nicméně v pozdější studii bylo zjištěno, že aminokyselinové zbytky proteinu E2 v pozicích 420, 527, 530 a 535 přicházejí do kontaktu s velkou smyčkou CD81 [134].

Experimenty s HPV, HPV a nativní virus ze séra pacientů s CHC potvrdila, že CD81 je zapojen do procesu vstupu HCV do buňky, ale jiné, než je potřeba nějaký jiný protein, který stimuluje endocytózy [77, 78, 134]. S pomocí CD81 a proteinu v buňce pronikne virionů, které nejsou spojené s lipoproteiny, protože potřeba kontakt virový glykoprotein E2 a CD81. Je známo, že obsah těchto virionů je přibližně 20% (viz oddíl 1.2). Tímto způsobem může buňka proniknout do virionů, které nejsou spojené s lipoproteiny, protože tvorba HCV komplexu s nimi, samozřejmě, zabraňuje kontaktu s E2 glykoproteinu receptoru CD81.

Až 80% HCV je v těle infikovaných lidí ve formě komplexu s lipoproteiny (to jsou tzv. Lipovirální částice). Tyto částice vstupují do buněk pomocí receptoru pro LDL (viz bod 1.2) a dalšího receptoru SR-BI (další označení je Cla-1) [126]. Receptor SR-BI se nachází na povrchu mnoha buněk, ale jeho nejvyšší obsah je zaznamenán v játrech a steroidních tkáních. Hlavním úkolem tohoto receptoru je dodat buňkám lipidy, které tvoří lipoproteiny s vysokou hustotou. Receptor SR-BI patří k transmembránovým proteinům. Má dvě membránové prameny, velkou extracelulární smyčku a dvě krátké cytoplazmatické oblasti v NH2- a COOH-koncové oblasti [135]. Bylo zjištěno, že první HVR rekombinantního proteinu E2, HPV a viru odvozeného z buněčné kultury může být spojen s tímto receptorem [136-138]. HCV z krevního séra lidí s hepatitidou C interaguje s receptorem SR-BI bez účasti prvního HWR a proteinu E2 [118].

Abychom vysvětlili tento jev, bylo navrženo, že virus proniká do buňky za použití komplexu s vícesložkovými receptory tvořeného CD81-SR-BI [77, 138].

Je známo, že negativně nabité sacharidové řetězce povrchových glykoproteinů buňky mohou sloužit jako centra primární vazby různých virů [139]. Díky tomuto procesu vzrůstá obsah viru na povrchu buněk a zvyšuje se pravděpodobnost jeho interakce se specifickým receptorem. Pokusy o vazbu HCV na hepatocytické buněčné kultury ukázaly, že tento proces může být blokován heparinem a suraminem, který má negativní náboj [140]. Část, která se specificky váže na heparin, pravděpodobně lokalizován v první HWR glykoprotein E2 a / nebo v oblasti s ako 559-614, kde odhalilo vysoký obsah pozitivně nabitých aminokyselinových zbytků [112, 126]. Při experimentech s pseudovirovými částicemi HCV však nebyla pozorována interakce proteinu E2 s heparinem [141]. Je zřejmé, že zapojení glukosaminoglykanů v komplexním procesu penetrace HCV do buňky vyžaduje další studium.

Jak vyplývá z provedených studií v posledních deseti letech, HCV má široký buněčný tropismus. Virus se replikuje v hepatocytech, periferních mononukleárních buněk a ascitu, lymfy a monocytů [142-144], dendritických buněk [52, 145], krvetvorných progenitorových buněk [146], [38] mikroglie kardiomyocytů [147], střevní epitel [ 148], osteoblasty [149] a B buněčné folikuly lymfatických uzlin [150]. To je pravděpodobně důvod, proč existuje více než jeden receptor pro HCV.

V analýze antigenních a imunogenních vlastností je věnována velká pozornost studie shellových proteinů, protože tyto informace jsou nezbytné pro vývoj vakcín proti hepatitidě C.

Bylo zjištěno, že glykoproteiny E1 a E2 mají vysokou imunogenicitu. Při imunizaci šimpanzů s rekombinantními obalovými proteiny byly tedy získány specifické protilátky proti těmto proteinům s titrem 1/819200 [15]. Nicméně v přirozeném průběhu akutní a chronické hepatitidy C u lidí je humorální odpověď na virové glykoproteiny E1 a E2 mnohem slabší.

Publikované údaje o detekci lineárních B-epitopů v proteinech E1 a E2 jsou uvedeny v tabulce. 1. Pro analýzu těchto epitopů byly použity metody peptidového skenování, fágového zobrazení a monoklonálních protilátek. Metoda peptidového skenování je založena na použití syntetických peptidů pokrývajících celou aminokyselinovou sekvenci proteinu a stanovení jejich imunoreaktivity, tj. E. schopnost interagovat s protilátkami pacientů s hepatitidou C. Poprvé byla provedena studie obalových proteinů HCV ve společnosti Chiron (USA) [151]. Později v roce 1997 byly publikovány výsledky peptidového skenování glykoproteinů E1 a E2, ve kterých

Jediné séry od žen infikovaných před 17 lety jediným izolátem HCV, které kontaminují léčivo anti-D imunoglobulinem, byly použity [152].

Prostřednictvím úsilí tří skupin výzkumníků vedených J. Dubuissonem, M. Flintem a A.H. Patel, bankovní myší a lidské monoklonální protilátky byla stanovena (ICA), HCV, s nimiž by mohly identifikovat některé lineární a konformační epitopy B-shell E1 a E2 proteiny [79, 109, 153-155].

Na Obr. 8 znázorňuje uspořádání B-epitopů v glykoproteinu E2, zjištěných pomocí MCA.

Obzvláště zajímavé jsou B epitopy, vazba protilátek, které vedou k neutralizaci viru. Takový virus neutralizující epitop byl detekován v prvním HBP proteinu E2 [156].

Další epitop, který neutralizuje vazbu viru na buňku (takzvaný epitop NOB z "neutralizace vazby"),

Obr. 8. Umístění B-epitopů detegovaných MCA v proteinu E2.

Schéma je uvedeno s malými změnami v publikacích R.F. Clayton a kol. [79] a A.M. Owsianka a kol. [155].

Na vrcholu obdélníků je MKA rozpoznávající ektodoménu E2 proteinu, E2 bílkoviny v plné délce v kombinaci s proteiny E1 a E2 v kompozici HPV. Níže je uvedena MKA, která interaguje s ektodoménou proteinu E2 nebo s proteinem E2 v plné délce v komplexu s proteinem E1. V černé barvě je MCA inhibující vazbu na CD81 ektodomén E2, protein E2 v plné délce v kombinaci s E1 a HPV zvýrazněn černě. Šedá barva je označena MCA inhibicí vazby HPV na CD81.

konformační struktury ve formaci, která, podle předpokladu, jedna skupina autorů zapojených aminokyselinové zbytky 406 až 644 ze sekvence proteinu E2 [76, 156, 157] a, v souladu s další - zbytky sekvencí 414-443 a 490-519 [158 ].

Ukazuje se, že další komplikovaný konformační B-epitop, který nemá vlastnosti neutralizující virus, může být tvořen aminokyselinovými zbytky z 3 míst:

297-306 protein E1, 480-494 a 613-621 protein E2 [167].

V glykoproteinech E1 a E2 byly identifikovány T helper (CD4 +) a T-killer (CD8 +) epitopy (tabulka 2).

V současné době pokračují studie lokalizace a struktury B- a T-epitopů obalových proteinů HCV. Informace o tomto tématu naleznete na webových stránkách Národního laboratoře Los Alamos (USA): http://hcv.lanl.gov.

* Pokud byly 20-členné peptidy použity k určení epitopu, pak neexistuje přesná lokalizace.

2.2. Nukleokapsidový antigen Schéma lokalizace nukleokapsidového proteinu (synonyma: jádro, jádro) v polyproteinu je znázorněno na obr. 1. Tento protein je zapojen do klíčových fázích morfogeneze viru: vytváří virové nukleokapsidový zahájit HCV RNA balení a montáž virového obalu [74, 178, 179].

Pravděpodobně má kor protein další biologické funkce. Tak, v různých modelových pokusech ukazují, že interaguje s regulačními proteiny a některé konstrukční prvky buněčného: Protein p53 [179], což je první receptor faktoru nekrotizujícího nádory [180] receptor lymfotoxinu-beta [181], transkripční lzip faktor [182 ], STAT3 protein (což zvyšuje transkripční signál) [183], heterogenní jaderný ribonukleoprotein K [184] helikázy DDX3 [185] cytoplasma triglyceridů váčky [186], mitochondrie [187] cytokeratin buňky [188]. Předpokládá se, že korbelok se podílí na vývoji steatózy a hepatokarcinogeneze u pacientů s chronickou hepatitidou C, [179, 186].

Protein nukleokapsidu se vytváří nejprve mezi všemi virovými bílkovinami v procesu biosyntézy, odštěpuje se z polyproteinu signálními peptidázovými buňkami [190]. V konečné proteolytické hydrolýze jádrového proteinu se účastní nově objevená peptidáza peptidáza SPP, která zahrnuje neobvyklé štěpení intramembránou [189, 190].

Zpracování nukleokapsidového proteinu je doprovázeno přechodem jeho formy p23 (193 jako) na p21 (173 jako) a fosforylací OH skupinami serinových zbytků [189]. Štěpený část (174-193 ako) nese translokační signál, přičemž NH 2-terminální část proteinu E1 spadá dovnitř nádrže EPR [191].

Zralá forma koroproteinu má dobře definovanou amfipatickou strukturu: hydrofilní NH2-terminální oblast a hydrofobní COOH-koncovou oblast [192]. V souladu s tím se v proteinu izoluje doména D1 (hydrofilní) a doména D2 (hydrofobní). Podobná struktura je charakteristická pro nukleokapsidové proteiny rodiny Flaviviridae. Někdy je v korproteinu izolována třetí doména (centrální), která má neobvykle vysoký obsah tryptofanových zbytků (46).

Hydrofilní Doména D1 je vazebné místo RNA, hlavní konzervativní B-epitopy a fragment odpovídá za dimeru jádrového proteinu [192]. Funktivně aktivní forma nukleokapsidového proteinu je tvořena dvěma polypeptidovými řetězci, tj. cor protein je dimer, ve kterém převažuje alfa-helikální strukturní organizace. Hydrofobní doména D2, který zajišťuje spojení s lipidové membrány a cytoplazmě vměstků se nacházejí amfipatickou alfa-helix s výraznými hydrofilními a hydrofobními povrchy.

Mezi všemi virovými proteiny má kor- proteinový protein nejvyšší obsah konzervativních zón v primární struktuře [193].

Umístění hlavních funkčně důležitých oblastí nukleokapsidového proteinu je znázorněno na obr. 9. V těchto důležitých oblastech třeba poznamenat, oblast kotevní protein s 72 až 91 aminokyselinových zbytků, která spolupracuje s obalového proteinu E1 [194] část se zbytky 69-104 nutné k zachování infekčnosti HCV [195] zóna 65 zbytků -72, což je pravděpodobné, že v kontaktu s peptidem P7 v raných fázích morfogeneze viru [195].

Podle elektronové mikroskopie je jádrový protein lokalizován v buňce na EPR membránách, na lipidových váčcích v cytoplazmě stejně jako v jádře. Přenos bílkoviny do jádra buňky je prováděn buněčným transportním proteinem bisparnin NLS, který v tomto případě interaguje se speciální signální sekvencí v jádrovém proteinu [196].

Vyšetřování nukleokapsid z nativního séra a jejich analogů vyrobených za použití HCV replikon, bylo zjištěno, že bez ohledu na svůj původ mají koeficient sedimentační asi 100 S, rostoucí v hustotních gradientů

Obr. 9. Uspořádání hlavních funkčně důležitých míst v nukleokapsidovém proteinu je uvedeno s malými změnami od článku C.L. Murray a kol. [195].

Níže jsou uvedeny počty aminokyselinových zbytků.

cesium 1,28 g / ml a průměr 33-46 nm, určený pomocí přenosového mikroskopu [197, 198]. Podle elektronové mikroskopické analýzy vzorků jaterních biopsií u osob s CHC, velikost nukleokapsidů viru v tomto případě kolísá intenzivněji: od 28 do 48 nm [198].

Jádro proteinu je jedním z nejvíce imunogenních antigenů HCV. Údaje o jeho B- a T-epitopech jsou uvedeny v tabulce. 3 a 4.

Je třeba poznamenat, že B epitopy nukleokapsidového proteinu jsou koncentrovány hlavně v hydrofilní doméně a v konzervativních oblastech.

2.3. Charakterizace proteinu NS2 NS2 protein se týká nestrukturních proteinů HCV, nachází se v polyproteinu po peptidu p7 (viz obr. 1). Protein NS2 má molekulovou hmotnost přibližně 23 kDa, neobsahuje sacharidové zbytky a je vázán na EPR membrány [206, 207]. Přesná topografie proteinu v membráně není stanovena, předpokládá se, že tvoří 3 transmembránové prameny (viz obrázek 5) [90]. Protein NS2 je špatně rozpustný, takže je obtížné studovat.

Hlavní biologickou funkcí proteinu NS2 je štěpení HCV serinové proteázy. Pro jeho implementaci tvoří protein NS2 komplex s polyproteinovým místem odpovídajícím proteinu NS3 [206, 208].

"Kazan (Privolzhsky) federální univerzita. N.I. Lobachevsky Nové záznamy knih do Fondu národní banky od 27. června do 4. září 2015 Kazan Records jsou vyrobeny ve formátu RUSMARC pomocí "Ruslan" ALIS. Materiál je systematicky uspořádán podle vědních oborů, v sekcích - v abecedě autorů a titulů. S krytem, ​​abstraktem a obsahem publikace lze nalézt v elektronickém katalogu. Neznámý název Materiály All-ruské konference str. "

„Ministerstvo školství a věd Ruské federace federální stát vzdělávací instituce vyššího profesního vzdělávání“ Tyumen State University „Ústav biologie, Ústav ekologie a genetiky, ON Zhigileva EKOLOGICKÁ PARAZITOLOGIE Vzdělávací a metodický komplex. Pracovní program pro studenty ve směru přípravy 06.03.01 biologie (stupeň bakalářský), tréninkové profily „Bio-ekologie“, forma školení na plný úvazek Ťumeň státu. "

„Ministerstvo školství a vědy Státní vzdělávací instituce vyššího odborného vzdělávání Tyumen State University Ústavu biologie, Katedra zoologie a evoluční Animal Ecology AV Tolstikov, V.A. Stolbov ENTOMOLOGIE Vzdělávací a metodický komplex. Pracovní program pro studenty ve směru příprava 35.03.10 krajinné architektury, tréninkový profil okrasných rostlin a mateřské školy, odborná příprava na plný úvazek formu Ťumeň. "

„Ministerstvo školství a věd Ruské federace federální stát vzdělávací instituce vyššího profesního vzdělávání“ Tyumen State University „Ústav biologie, Ústav anatomie a fyziologie člověka a zvířete Lepunova ON ANATOMIE A LIDSKÁ MORFOLOGIE Vzdělávací a metodický komplex. Pracovní program pro studenty 03.06.01 směr „biologie“, sekcích: botaniky, zoologie, fyziologie, genetika, bioecology, biochemie; forma vzdělávání. "

„Obecní“ Bezhanitsy okres „komunální rozpočtové obecně vzdělávací instituce“ Bezhanitsky STŘEDNÍ ŠKOLA „souhlasil potvrdit metodickou radu №1 hlavní Zápis z 08.27.2014 _ / SK MIKHEEV Pořadové číslo 71 ze dne 29.08.201 pracovní program pro předměty BIOLOGIE základního všeobecného vzdělání, stupeň 6 na akademický rok 2014-2015 mistra Irina Vasilyeva Bezhanitsy 2014 1.Poyasnitelnaya poznámce Práce na programu biologie splňuje federální. "

„Ministerstvo zemědělství Ruské federace Federální státní vzdělávací instituce vyššího profesního vzdělávání“ Kuban státní Agrární University »Oddělení mikrobiologie, virologie a epizootologie pokynech o disciplíně: B1.V.DV.1" Veterinary Virology„pro samostudium postgraduální kurz ve směru 2 výcvik 36.06.01 Veterinární a Animal Science, směr: „Veterinární mikrobiologie, virologie. "

„Ministerstvo školství a vědy Kaluga region státního rozpočtu instituce dalšího vzdělávání Kaluga kraje“ regionální ekologické a biologické Center „General Secondary obecně vývojový program,“ Pantry přírody „pro studenty mladšího školního věku (7-11 let) Doba realizace -2 let zkompilovaný učitelů dalšího vzdělávání : Timoshina E.V. Glebova S.V. Kaluga Obsah Vysvětlivka Relevantnost programu: Cíle a cíle programu. "

„“ Teoretická mechanika „Pokyny pro praktickou výuku ve 2. ročníku lékařské a biologické fakulty v letech 2012-2013 akademického roku 1. semestru specializace 201000 - Biotechnologické systémy a technologie 1. Úvodní lekce. Pohybové rovnice a rovnice trajektorie tochki.Reshite následující úkoly: 1. Podle rovnic pohybu bodu své dráhy získat rovnici v souřadnic formy a zvolte směr na obrázku 1) x = 3t -5, y = 4 - 2t; 2) x = 2t, y = 8t2; 3) x = 3t2, y = 4t2; "

«Http://www.bio.bsu.by/zoology/shalapyonok_ru.phtml Page 1 Tisk Webové stránky fakulty verze tiskového biologie nebo návrat Shalapenok Elena Semenovna personální oddělení zoologie, Biologická fakulta BSU. LIDÉ Department of Zoology Pedagogové vyučování a podporu vědecké pracovníky doktorandů a studentů Shalapenok Elena Semenovna (1931-2010), docent, Katedra zoologie, PhD, docent Graduate běloruštiny. "

„Ministerstvo školství a věd Ruské federace Penza State University Schválil: rektor _ AD Gulyakov ‚‘ _ 201, registrační číslo intrahigh základních profesních vzdělávacích programů vysokých školách Směr příprava 020 400 biologie Profile Bioecology tréninkového kvalifikace (studia) absolvent Forma studia na plný úvazek Penza, 2013 Obsah 1 Všeobecně. 1.1 Hlavní odborný vzdělávací program vysokoškolského vzdělávání. "

„Abstract s pracovním programem na téma“ Biology „na 2014-2015 akademický rok Grade 9 Účelem tohoto pracovního programu - vytvoření podmínek pro plánování, organizaci a řízení vzdělávacího procesu na téma biologie, viz“ Základy obecné biologie“Program.Rabochaya obsahuje následující části: oddíl 1. Vysvětlující memorandum, ve kterém jsou obecné cíle všeobecného vzdělávání specifikovány s ohledem na specifika předmětu. Pracovní program je založen na přibližném jádrovém programu. "

„Ministerstvo školství a věd Ruské federace federální stát vzdělávací instituce vyššího profesního vzdělávání“ Tyumen State University „Ústav biologie, Ústav ekologie a genetiky, ON Zhigileva ZÁKLADY EKOLOGIE Vzdělávací a metodický komplex. Pracovní program pro studenty v oblasti výcviku 42.03.02 Žurnalistika (bakalářská úroveň), vzdělávací profily "Seal", "Televizní žurnalistika", "Konvergentní žurnalistika". "

„Ministerstvo školství a vědy, Federální státní vzdělávací instituce vyššího odborného vzdělání Tyumen State University Institute of biologie Ústavu botaniky, biotechnologie a krajinářské architektury Marina V. Semenova Bioecological základní kompozice s rostlinami učebních materiálů. Pracovní program pro studenty směru 35.03.10 Profil krajinné architektury Krajina a krajina. "

„Ministerstvo školství a věd Ruské federace federální stát vzdělávací instituce vyššího odborného vzdělání Tyumen State University Ústav biologie, Ústav botaniky, biotechnologie a krajinářské architektury Belozerova A.A.MORFOBIOLOGICHESKIE VLASTNOSTI okrasných dřevin učebních materiálů. Pracovní program pro studenty směru 35.03.10 Zahradní architektura interní formy profilového tréninku Dekorativní růst rostlin a. "

„Ministerstvo školství a věd Ruské federace federální stát vzdělávací instituce vyššího profesního vzdělávání“ Tyumen State University „Institute of Katedry zoologie a evoluční ekologie zvířat OA Aleshin základní výcvik obecného biologického praxe: zoologie bezobratlých učebních materiálů. Pracovní program pro studenty v oboru školení 06.03.01 - "Biologie" (akademický bakalář), profil školení. "

„Ministerstvo školství a věd Ruské federace federální stát vzdělávací instituce vyššího profesního vzdělávání“ Tyumen State University „Ústav biologie, Ústav anatomie a fyziologie člověka a zvířete Lepunova ON MOLEKULÁRNÍ BIOLOGIE VIRŮ A JINÝCH INTRACELULÁRNÍCH PARAZITŮ Vzdělávací a metodický komplex. Pracovní program pro studenty 06.03.01 návod "Biologie", profil: biochemie; forma vzdělávání - prezenční Tyumen. "

„Federální Biomedical agentura státní zdravotní organizace“ sibiřského Medical Center Spolkové lékařské a biologické agentury „(FGBUZ SOMTS FMBA Ruska) standardy a technologie praktické sestry Pokyny profesní činnosti sestry procesní Novosibirsk 2013 Federální agentura pro biomedicínský FEDERÁLNÍ STÁTNÍ ROZPOČTOVÁ INSTITUCE ZDRAVÍ. "

„Ministerstvo školství a věd Ruské federace federální stát vzdělávací instituce vyššího odborného vzdělání Tyumen State University Ústav biologie, Ústav botaniky, biotechnologie a krajinářská architektura SP Arefiev Dane Vzdělávací a metodický komplex. Pracovní program pro studenty směr 35.03.10 krajinářské architektury na plný úvazek profilu tréninkových okrasných rostlin a mateřské Ťumeň State University. "

Dálný východní státní univerzita Isajev Synergetika biologie Úvodní učebnice Vladivostok Sešit je sestaven na základě kurzu přednášek pro studenty katedry buněčné biologie z Dálného východu State University, vykládaného autorem po dobu několika let, a je uzpůsoben pro biology, zjednodušené a ilustrovány základní myšlenky nelineární vědy (často nazývaná synergie), včetně teorie rozvětvení a. "

„Obecní rozpočtové instituce všeobecného vzdělávání“ Průměrná General Education School №18 „je považován na zasedání“ Souhlasím, „“ Schváleno „SHMO Přírodní vědy zástupce ředitele, ředitel MBOU«School №18»Head TI Antonovich na UVR LA Ishutina V.N. Nikitin protokol №1 z „23“ v květnu 2014 PROGRAM akademickými předměty BIOLOGIE CLASS 9.května (GEF) Abakan Vysvětlivka Tento biologie Program je založen na federálním Státní pedagogické normy. "


Předchozí Článek

Známky onemocnění jater

Následující Článek

Hepatolog v Moskvě

Související Články Hepatitida