HCV vyšetření krve: co to je?

Share Tweet Pin it

Podle koncepcí moderní medicíny patří prevalence prevalence na světě do virů. Lidstvo muselo s nimi bojovat spoustou sil a prostředků. Velmi důležitou roli patří k diagnostice virových jaterních lézí, zejména hepatitidy C. správný dekódování laboratorních parametrů pro detekci onemocnění je obtížné vzhledem k velkému počtu falešně pozitivních výsledků vyšetření krve. Proto je tak důležitá správná volba a interpretace studie.

Metody detekce viru

Virus hepatitidy C (hcv) je malý RNA řetězec uvnitř virové obálky, který pro reprodukci používá genetický materiál jaterních buněk. Jejich přímý kontakt vede k:

  • Nástup zánětlivého procesu v játrech;
  • Zničení jaterních buněk (cytolýza);
  • Zahájení imunitních mechanismů syntézou specifických protilátek;
  • Autoimunitní agrese imunitních komplexů proti zánětlivým hepatocytes.

Virus hepatitidy C, který se dostává do těla, způsobuje velmi pomalou imunitní odpověď, která ji dlouho nezjistí. Toto onemocnění se často vyskytuje pouze ve fázi jaterní cirhózy, i když v krvi cirkulují vírové částice a jejich odpovídající protilátky. To je základ pro všechny známé metody diagnostiky infekce hCV. Patří sem:

  1. Sérologické testy v laboratorních podmínkách;
  2. Diagnostika PCR (polymerázová řetězová reakce);
  3. Expresní testy pro určení nemoci doma.

Video o hepatitidě C:

Možné příznaky studie

Každý, kdo může testovat infekci hcv. Zvláštní svědectví o tom není nutné, s výjimkou touhy osoby podstoupit tento krevní test. Existuje však skupina osob, které musí být vyšetřovány. Patří sem:

  • Dárci krve;
  • Lidé, kteří byli na základě toho podstoupeni transfuzi krve, její složky nebo přípravky;
  • Zvýšení hladiny jaterních transamináz (ALT, ASAT), zejména po předchozích chirurgických zákrocích, pracovní a jiné lékařské manipulaci;
  • Podezření na virovou hepatitidu C nebo potřebu vyloučit tuto diagnózu;
  • Negativní testy na virovou hepatitidu B za přítomnosti příznaků zánětu jater;
  • Kontroluje účinnost terapie infekcí hCV a řeší problémy související s taktikou další léčby.

Charakteristika sérologické diagnostiky a hodnocení výsledků

Laboratorní rozbor krve pro HCV zahrnuje detekci protilátek (imunoglobulinů) třídy M a G antigenní složka Virus hepatitidy C se používá pro tuto reakci spojeném především na imunosorbent (ELISA) a radioimunotestem (RIA). Laboratorní metody pro detekci protilátek jsou považovány za nejspolehlivější, protože umožňují použití několika antigenních komplexů nejběžnějších typů viru hepatitidy C jako činidel.

Pro studium se odebírá asi 20 mililitrů žilní krve z periferní žíly. Je centrifugován a sedimentován, aby se získala plazma (kapalina transparentní část). Forma prvky a sediment jsou odstraněny. Abyste se vyhnuli falešně pozitivním výsledkům, je lepší vzít si ráno před jídlem krve. Před několika dny je žádoucí vyloučit použití léků, zejména ovlivnění stavu imunitního systému.

Výsledky analýz lze prezentovat tímto způsobem:

  1. Hcv - negativní. To znamená, že v těle nebyly detekovány žádné protilátky proti viru hepatitidy C. Neexistují žádné nemoci;
  2. Hcv - pozitivní. To naznačuje přítomnost protilátek proti viru hepatitidy C v testovaných vzorcích krve. Osoba buď měla toto onemocnění nebo je v současné době nemocná nebo má chronickou formu;
  3. Anti-hcv IgG byl detekován. V tomto případě stojí za to přemýšlet o chronické virové hepatitidě C;
  4. Bylo detekováno IgM proti hcv. Jeho izolovaná přítomnost hovoří o akutním procesu a kombinaci s anti-hcv IgG - exacerbací chronické.

Funkce rychlého testování

Každý, kdo může provést krevní test pouze na hCV. Toho bylo dosaženo vytvořením speciálních testovacích systémů pro rychlou diagnózu hepatitidy C. Jejich účinnost je nižší než laboratorní metody sérologické, ale ideální pro přibližné určení možné infekce v krátkém časovém období.

V každé lékárně si můžete zakoupit nebo objednat testovací systém. Obsahuje vše potřebné pro test. Analýza začíná otevřením sterilního kontejneru a přípravou všech složek. Po ošetření speciálním ubrouskem s antiseptickým prstem je jemně propíchnutý skarifikátorem. Pomocí pipety se odebírají 1-2 kapky krve a přenesou se do zářezů na zkušební desce. Do krve přidejte 1-2 kapky činidla z lahvičky, která je součástí testu. Výsledek by měl být hodnocen po 10 minutách. Je nesmírně důležité vyhodnotit výsledek po 20 minutách kvůli možnému falešně pozitivnímu výsledku.

Provedený krevní test lze považovat za:

  1. V okně tabletu se objevil jeden fialový proužek (test je negativní). To znamená, že protilátky proti hCV v testované krvi nejsou detekovány. Osoba je zdravá;
  2. V okně tabletu se objevily dva fialové proužky (test je pozitivní). To naznačuje přítomnost protilátek v vyšetřované krvi a spojení organismu s virovou hepatitidou C. Tito lidé podléhají důkladnějším metodám sérologické diagnostiky,
  3. V okně tabletu se neobjevil ani jediný pruh. Testovací systém je poškozen. Doporučujeme znovu zkontrolovat.

Vlastnosti PCR diagnostiky

Polymerázová řetězová reakce je nejmodernějším způsobem detekce genetického materiálu libovolných buněk. Pokud jde o virovou hepatitidu C, metoda umožňuje detekovat molekuly RNA virových částic. To lze provést kvalitativně a kvantitativně. První metoda nemusí být informativní, pokud počet virových částic v vyšetřované krvi nedosáhne prahové hodnoty. Druhá metoda vám umožňuje přesně určit počet detekovaných řetězců viru RNA a je citlivější.

Analýzu mohou představovat následující výsledky:

  1. Hcv RNA nebyla detekována. To znamená, že v testované krvi nejsou žádné částice viru;
  2. RNA hcv je detekována. To naznačuje infekci hepatitidou C;
  3. Kvantitativní test hcv-PCR se provádí za účelem posouzení stupně infekce krve pacienta a aktivity virem v těle. Je zváženo vysoké virové zatížení krve od 600 do 700 IU / ml. Ukazatele nad tímto číslem se nazývají velmi vysokými, pod ní - nízkým virovým zatížením krve.

Krevní test na hCV v diagnostice virové hepatitidy C je jedinou informační, přístupnou a neškodnou metodou pro ověření diagnózy. Správná interpretace a kombinace různých způsobů, jak to udělat, minimalizuje počet diagnostických chyb.

Nejlepší anti-HCV (sada 2) 12x8

Cat. № 0772

Cena: na vyžádání

Položku do košíku můžete přidat zadáním množství

Typ balení: kartonové krabice

Sada činidel pro detekci imunosorbentů třídy imunoglobulinů G a M na viru hepatitidy C v lidském séru / plazmě a přípravcích v krvi (imunoglobuliny, interferony, kryoprecipitát, albumin). Sada 2 je určena pro 96 stanovení, včetně kontrol - 4 studny na analýzu, stejně jako frakční použití jednoho proužku v každé studii. Je určen pro ruční nastavení v automatických analyzátorech otevřeného typu ELISA. Tato technika je založena na ELISA v pevné fázi za použití rekombinantních antigenů. Je možné vypočítat koeficient pozitivity. Objemová rovnost kontrol a vzorků. Standardizace podmínek pro provádění enzymatické reakce s chromogenem v termostatu při 37 ° C Trvání reakce: 1 hodina a 20 minut

Funkční účel

Doporučuje se vyšetření dárců krve, orgánů, lidských tkání, diferenciální diagnostiky virové hepatitidy

Technické specifikace

Obsah balení:
1. Skládací tableta - 1 ks.
2. Pozitivní a negativní kontroly - 2x1 fl.
3. Konjugát a roztok pro jeho ředění (PK) - 2x1 fl.
4. Roztok zředění séra (PC) - 1 fl.
5. fosfátově pufrovaný fyziologický roztok, koncentrát (PBS) - 2 fl.
6. Roztok pufru substrátu (SBR) - 1 fl.
7. Tetramethylbenzidin, koncentrát (TMB) - 1 fl.
8. Stop reagent - 1 fl.
9. Návod k použití.
10. Fólie pro těsnění.
Zkušební vzorek: sérum nebo krevní plazma s objemem nepřesahujícím 40 μl.
Počet protokolů pro provedení testu ELISA: nejméně 4.
Podmínky skladování: při teplotě +2. 8 ° C po celou dobu skladovatelnosti uvedenou na štítku.
Doba použitelnosti soupravy je 12 měsíců od data výroby.
Registrován u společnosti Roszdravnadzorzor

HCV krevní test

Způsob šíření nemoci lze rozdělit do skupin:

  • Parenterální - což znamená, že infekce probíhá prostřednictvím sdílení lékařských nástrojů, jehel a nesterilního zařízení na manikúru;
  • Sexuální - virus se přenáší z jednoho partnera do druhého během nechráněného sexuálního styku;
  • Vertikální cesta je infekce plodu od nemocné matky.

Analýzu hepatitidy by měli předat lidé, kteří:

  • Připravte se na plánovanou hospitalizaci;
  • Plánují mít dítě;
  • Zvýšení bilirubinu, ALT nebo AST bylo zjištěno v klinické analýze;
  • Mít symptomatický obraz podobný příznakům hepatitidy C;
  • Často mění své sexuální partnery nebo preferují nechráněný sex;
  • Jsou závislí na drogách;
  • Bude to dárce;
  • Pracovníci v lékařských nebo předškolních zařízeních musí absolvovat každoroční komplexní vyšetření včetně tohoto typu analýzy.

Test HCV v krvi je laboratorní způsob diagnózy hepatitidy C, mechanismus účinku je postavena tak, aby identifikovat typ protilátek Ig G a Ig fúzí, které začínají být produkován, když se virus protilátky v krvi. Co to je? Jedná se o patogenní mikroorganismy, které se objevují několik týdnů nebo dokonce měsíců po infekci.

Vysvětlení analýzy

Při studiu struktury HCV vědci dospěli k závěru, že toto příčinné činidlo je genom, který se vztahuje jak na zvířata, tak na rostlinné viry. Skládá se z jednoho genu, do kterého lze vložit informace o devíti bílkovinách. Prvním úkolem je proniknout do buňky virem, druhá je odpovědná za tvorbu virové částice, zatímco jiné v tuto chvíli přepínají přirozenou funkci buňky na sebe. Patří do strukturní skupiny bílkovin, zatímco ostatní šest jsou nestrukturální.

HCV genom je jednoduchý RNA řetězec uzavřený v kapsli jeho vlastní (kapsida) tvořená nukleokapsidovým proteinem. To vše je obklopeno skořápkou složenou z bílkovin a lipidů, umožňuje úspěšně vázat virus na zdravou buňku.

Jakmile virus vnikne do krevního oběhu, začne cirkulovat v celém těle krví. Jakmile se v játrech, genom aktivuje jeho funkce a připojí se k jaterním buňkám, postupně je proniká. Hepatocyty (tzv. Tyto buňky) podléhají poruchám během jejich fungování. Jejich hlavním úkolem je "pracovat pro virus", během něhož potřebují syntetizovat virové proteiny a ribonukleovou kyselinu.

HCV rozlišuje několik genotypů, tj. Kmenů. V současné době existuje 6 genotypů, zatímco každý druh má svůj vlastní poddruh. Všechny jsou označeny v závislosti na číslování od 1 do 6. Existují zprávy o lokalizaci tohoto nebo viru v celém světě. Například 1, 2 a 3 genotypu je nalézt na celém světě, zatímco 4 - ve větší míře na Středním východě a v Africe, 5 - v Jižní Africe, a 6 - v jihovýchodní Asii.

Základem pro jmenování léčby by měl být pozitivní výsledek krevní testy na HCV, stejně jako specifický genotyp.

Dekódování analýzy HCV:

  • Anti-HCV Ig M je marker aktivní replikace viru hepatitidy C;
  • Anti-HCV Ig G je pravděpodobná přítomnost viru hepatitidy C;
  • Ag HCV - pozitivní výsledek, což naznačuje přítomnost viru hepatitidy C;
  • HCV RNA - Virus hepatitidy C je přítomen v těle a aktivně pokračuje.

Falešný pozitivní výsledek

Je dokonce méně pravděpodobné, že mluví o falešně negativních výsledcích, které jsou zaznamenány u pacientů užívajících imunosupresiva, nebo jsou ovlivněny charakteristikami jejich imunitního systému. Stejný výsledek se očekává, pokud je hepatitida C v rané fázi vývoje.

V případě nedorozumění můžete použít PCR test hepatitidy C, jestliže to dává pozitivní výsledek, a pak poskytnout další analýzu k určení virového genotypu.

Termín a postup

Analýza hepatitidy C předpokládá vzorek krve od pacienta na prázdný žaludek, protože by měl mít večeři nejpozději 8 hodin před podáním materiálu. Po probuzení můžete vypít jen malou hladkou vodu. Bude lepší, kdybyste v předvečer studie sledovali vaši dietu, což by bylo co nejjednodušší a co nejjednodušší. Smažené a mastné potraviny by měly být zcela vyloučeny, stejně jako alkohol. Těžká fyzická práce a sporty mohou ovlivnit spolehlivost výsledků testů, a proto se jí snažte vyhnout.

Pokud si přejete, aby se krevní test pro detekci hepatitidy C, pak musíte říci, že léky mohou narušit reálnou hodnotu, proto provádět výzkum nebo začít užívat léky, nebo máte pár týdnů po jejich vysazení. Pokud zastavíte léčbu léky, lékařská svědectví je nemožná, pak informujte sestru, která provede analýzu. Měla by si uvědomit název léku a dávku, ve které jste byli předepsáni.

Laboratorní test vyžaduje sérum. Kolik jsou platné materiály? Mohou být skladovány méně než pět dní v teplotním rozmezí 2 až 8 stupňů Celsia a více než pět dní za předpokladu, že skladovací teplota je -20 stupňů Celsia.

HCV krevní test je povinný pro osoby s imunodeficientními stavy, zejména HIV.

Správa portálu kategoricky nedoporučuje samoléčbu a doporučuje konzultovat lékaře u prvních příznaků onemocnění. Na našem portálu najdete nejlepší lékaře specialisty, na které se můžete registrovat online nebo telefonicky. Můžete zvolit správného doktora sami nebo si ho vybereme pro vás absolutně zdarma. Také pouze při nahrávání skrze nás, cena konzultace bude nižší než v samotné klinice. Toto je náš malý dárek pro naše návštěvníky. Buďte zdraví!

Nejlepší anti-vss

Sada činidel pro imunozánětlivou detekci imunoglobulinů třídy M pro virus hepatitidy C.

Nejlepší auto anti-HCV (sada 1)
(U automatických analyzátorů)

Nejlepší anti-HCV auto (sada 2 / Charoite)

Souprava Činidlo pro detekci enzyme-linked immunosorbent tříd imunoglobulinů G a M proti viru hepatitidy C na analyzátorech ELISA.

Nejlepší anti-HCV (sada 1)

Nejlepší anti-HCV (sada 2)

Nejlepší anti-HCV (sada 3)

Nejlepší anti-HCV (sada 4)

Sada činidel pro imunosorbentní detekci imunoglobulinů třídy G a M na virus hepatitidy C.

Sada činidla pro imunoenzymatické identifikaci tříd imunoglobulinů G a M proteiny individuální HCV (jádro, NS3, NS4, NS5).

Nejlepší anti-HCV-potvrzovací test

Soubor činidel pro potvrzení přítomnosti imunoglobulinů třídy G a M na viru hepatitidy C imunologickým enzymem.

HCV AG / AT-IFA-BEST (souprava 1)

HCV AG / AT-IFA-BEST (souprava 2)

Sada činidel pro detekci protilátek proti viru hepatitidy C a jádrového antigenu HCV imunitním enzymem.

Sada činidel pro detekci imunogenních enzymů jaderného antigenu viru hepatitidy C.

Sada reagencií pro potvrzení přítomnosti protilátek proti viru hepatitidy C metodou imunotranspirace.

Sada pro ELISA pro kontrolu kvality v laboratoři "Sérum obsahující protilátky proti viru hepatitidy C".

Anti-HCV sérový ovládací panel

Sada vzorků séra obsahující a neobsahující protilátky proti viru hepatitidy C. Pro intralaboratorní kontrolu kvality (validace) studií na anti-HCV.

Anti-HCV standardní sérový panel

Sada vzorků séra obsahující a neobsahující protilátky proti viru hepatitidy C.

Anti-vgs pozitivní co to znamená

Protilátky proti hepatitidě C a co byste o nich měli vědět

Když do těla vstupují různé cizí částice, stejně jako viry, lidský imunitní systém začne produkovat takové látky, které se nazývají imunoglobuliny. Jedná se o speciální buňky, které tělu pomáhají bojovat proti viru. Jsou nazývány protilátky proti hepatitidě C. Co bych o nich měl vědět?

Jaké jsou protilátky proti hepatitidě C?

Takové protilátky jsou detekovány speciální metodou analýzy ELISA nebo screeningu, která se používá k určení toho, zda osoba má virus viru hepatitidy C. Takové protilátky proti hepatitidě C jsou 2 třídy:

- takže tyto protilátky proti hepatitidě C jsou volány v latině. Současně jsou tyto protilátky souhrnem protilátky proti hepatitidě C.

Co znamená přítomnost protilátek proti hepatitidě C?

Absolutně všichni pacienti jsou testovány na přítomnost těchto markerů pro identifikaci, zda mají hepatitidu C. V případě, že onemocnění je již probíhá v akutní nebo chronické, pak mají protilátky anti-HCV, tyto protilátky proti hepatitidě C, lze nalézt pouze po 4 nebo 6 týdnů nástupu onemocnění.

Existují případy, kdy je přítomnost protilátek anti-HCV celkem lidé obnovit bez pomoci profesionálů, jako jste vy. Tito lidé mají tento trh najdeme iv průběhu 4 až 8 let po jejich oživení. Dokonce i v případě, že je test anti-HCV pozitivní, je to stále nedostatečné pro správnou diagnózu. U chronické hepatitidy jsou takové protilátky proti hepatitidě C přiděleny trvale a po pozitivním výsledku léčby může trvat dlouho v těle, ale jejich titry v tomto případě postupně začínají klesat.

Protilátky proti hepatitidě C a co byste o nich měli vědět?

Nejdůležitější je, abyste věděli, že takové protilátky nemohou ochránit před samotnou infekcí a také nemají imunitu proti reinfekci.

Stále existuje taková věc, jako je Spektrum anti-HCV. Jedná se také o protilátky, navíc specifické, jsou vhodné pro jednotlivé strukturní i nestrukturální proteiny tohoto viru. Jejich definice je důležitá, aby bylo možné posoudit, jak vysoká je virální zátěž, aktivita infekce, riziko chronické infekce, a také rozlišovat akutní nebo chronickou hepatitidu a kolik je játra již postižena.

Protilátky proti hepatitidě c z třídy IgM se týkají antigenů tohoto viru. Mohou být určeny již po 6, av některých případech i 4 týdny bezprostředně po infekci, přičemž jejich koncentrace může dosáhnout maxima. A po dokončení tohoto procesu začne hladina IgM klesat, ale po opětovném aktivaci infekce se hladina znovu zvýší. Proto se předpokládá, že takové protilátky jsou přímým příznakem chronické nebo akutní infekce se znaménkem reaktivace.

HCV - krevní test - co to je?

Jedním z nejsložitějších a nejrozšířenějších onemocnění konce minulého století je infekce virem hepatitidy C. Ve vyspělých zemích je prevalence onemocnění 2%, zatímco celkový počet pacientů na celém světě je 500 milionů lidí. Infekce byla detekována mnohem později než její předchůdci: hepatitida A a B - a nejprve se nazývala "ani infekce A ani B". Spolu s nárůstem závislosti na drogách roste počet infikovaných lidí každý rok. Důvodem všeho je způsob infekce: intravenózní injekcí drogy.

Také je virus přenášen během porodu z matky na dítě, pokud došlo k poškození kůže. Takže je tak důležité vědět, HCV krevní test - co to je? V těhotenství je nutné předávat každému budoucímu maminku. Toto onemocnění je vedoucí mezi důvody, které vyžadují transplantaci pacienta s játry.

Jak se vyvine hepatitida C?

Infekce virem hepatitidy C je následující: lidská krev pacienta by měl dostat do krve zdravého. První průtok krve přenáší částice viru, rozpuštěné v zdravé krvi, do jater a poté začne reprodukce. V tomto případě lidských jater trpí dvojnásobně: na jedné straně, jaterní buňky jsou poškozeny aktivitu viru, na druhé straně - lidské tělo začne bojovat: odešle imunitní odpovědi, a to speciální-lymfocyty jsou buňky, které bude vyzván, aby zničit infikované buňky jater.

Rozpoznává imunitní systém viru obsahem cizího genetického materiálu. Každý, kdo to zažil, stejně jako někteří pacienti, kteří jsou povinní, vědí, co znamená HCV krevní test. To, že jsou to velmi důležité ukazatele jak ve fázi detekce, tak i ve fázi léčby, všichni řeknou, i když jeden den čelí tomuto problému.

Kdy je analýza HCV?

Když má pacient stížnost na játra, lékaři obvykle předepisují krevní test takového pacienta s HBS a HCV. Aby bylo možné zjistit, zda je onemocnění způsobeno přítomností viru hepatitidy C v krvi nebo jiných komorbidních stavů, je třeba provést krevní test HCV. Co je to indikátor?

Analýza odhaluje protilátky v lidské krvi, které mohou patřit do jedné ze dvou tříd:

  • Protilátky proti HCV. Jsou hlavním ukazatelem. Přítomnost infekce v těle je potvrzena při detekci HCV RNA. Tyto protilátky se nacházejí ve fázi zotavení a mohou být i nadále v krvi po dobu dalších 1-4 let. Hlavním indikátorem přítomnosti chronické hepatitidy je rostoucí míra anti-HCV.
  • Úroveň IgA, IgM, IgG v krevním séru. Zvýšení ukazatelů těchto markerů naznačuje poškození jater při vystavení alkoholu, s cirhózou kulečníku a některými dalšími chorobami.

O čem to mluví?

Od okamžiku, kdy se antigeny dostanou do lidského těla, může být detekován krevní test HCV již ve 4-5 týdnu. Že to není virus viru hepatitidy C, který nelze přesně říct. Tyto údaje jsou nezbytné pro to, aby lékař rozhodl o potřebě takového pacienta provést antivirovou terapii. Zejména pokud je v krvi méně než 750 kopií RNA na 1 ml krve, pak to znamená minimální virální záchvat.

Protilátky hepatitidy C vždy odkazují na jednu ze dvou tříd - G nebo M, jejichž údaje musí nutně být zapsány do krevní testu HCV. Vysvětlení vysvětluje tyto parametry jako třídy imunoglobulinů G (IgG) a M (IgM). Pozitivní výsledek na první značce ještě neumožňuje určitou diagnózu. Třída imunoglobulinu G dosáhne maximálních hodnot po dobu 5 až 6 měsíců od doby infekce v těle a zůstává stejná s chronickou hepatitidou.

Třída M imunoglobulinů může být stanovena již 1-1,5 měsíců po infekci a velmi rychle dosáhne maximální koncentrace. Existuje ještě jeden ukazatel - anti-NS3, který s vysokými indikátory je jednoznačným předzvěstí přítomnosti akutního procesu v těle.

Jak darovat krev pro analýzu HCV?

K darování krve v laboratoři k určení přítomnosti HCV protilátek neexistují žádné specifické pokyny. Jediné doporučení lékařů: plot by měl být prováděn na prázdném žaludku. Krev se odebírá z žíly testovaného pacienta pomocí jednorázové injekční stříkačky.

Dekódování indikátorů

Tak údajný pacient provedl HCV krevní test. Jaké jsou tyto pluses a mínusy ve výsledku? Následující tabulka odpovídá na tuto skutečnost.

Typy testů s HCV

Existují kvalitativní a kvantitativní testy, které určují HCV (krevní test). Co to je?

Kvantitativní testy se použijí, pokud spodní hranice dosáhne 500 kopií RNA na ml nebo 200 jednotek na ml. Určete tyto testy pro HCV-RNA. Měření se provádí dvakrát, protože data jsou často odlišná. Díky pozitivním anti-HCV a kvantitativním testům je pozitivní výsledek asi v 75% případů. Kromě toho, takový výsledek může být získán v téměř 95% pacientů s akutní nebo chronickou hepatitidou C. Tyto testy používané v diagnostice akutních infekcí, stejně jako u imunodeficientních pacientů, jejichž protilátky Test měli negativní výsledek však existuje podezření na přítomnost infekce HCV.

Kvalitativní testy jsou citlivější, dolní limit je 100 kopií RNA na 1 ml. Používá se k určení diagnózy akutní HCV infekce provedením krevní testu na HCV. Pozitivní výsledek může být zjištěn již během prvních dvou týdnů po infekci. Kvalitativní test se liší tím, že může také dát falešně pozitivní nebo falešně negativní výsledek.

HCV vyšetření krve: co to znamená a kdy je předepsáno?

Analýza krve pro HCV - jedna z metod diagnostiky viru hepatitidy C Test je přiřazen když symptomy hepatitidy C, zvýšené jaterní enzymy, jakož i vyšetření osob s rizikem infekce virové hepatitidy. Ve druhém případě se společně s krevní testem na HCV provede krevní test na HBs Ag.

HCV (virus hepatitidy C virem hepatitidy C) patří do rodiny flavivirusů. To bylo poprvé objeveno v roce 1988 skupinou výzkumníků z americké biotechnologické společnosti Chiron. HCV genom je reprezentován molekulou RNA, takže rychlost mutace viru je velmi vysoká. Lidé infikovaní virem hepatitidy C mají virové částice, jejichž genomy se liší o 1-2%. Tato vlastnost populace viru jí umožňuje úspěšně se množit i přes ochranné reakce lidské imunity. Rozdíly v genomu viru mohou ovlivnit průběh infekce a výsledky léčby.

Podle Světové zdravotnické organizace doposud virus HCV infikoval asi 150 milionů lidí, každý rok způsobuje virus hepatitidy C úmrtí více než 350 000 pacientů.

Metody přenosu hepatitidy C

Viru hepatitidy C se přenáší z infikovaného krve, jako je příjemce dárce krve nebo orgánů z infikované matky na dítě, pohlavním stykem, s použitím nesterilní stříkačky ve zdravotnických zařízeních a nástroje pro tetování a piercing salony.

Onemocnění se může objevit v akutní formě, trvající několik týdnů a v chronické, což může vést k rakovině nebo cirhóze jater.

HCV analýza krve: co to znamená z hlediska imunologie?

Krevní test HCV je založen na detekci specifických imunoglobulinů IgG a IgM, proto se tento typ studie někdy nazývá krevní test anti-HCV. Imunoglobuliny jsou specifické proteiny imunitního systému, jsou produkovány B-lymfocyty v reakci na detekci cizích proteinů v těle. Když jsou infikovány virem hepatitidy C, produkují se imunoglobuliny pro potahování bílkovin viru, nukleokapsidového jádrového proteinu a nestrukturovaných NS proteinů. Vzhled prvních protilátek proti viru se objevuje nejdříve 1-3 měsíce po infekci. Podle zjištěných protilátek může lékař určit fázi infekce (akutní, latentní nebo reaktivační). Specifické protilátky proti hepatitidě C mohou být detekovány i po 10 letech po onemocnění, ale jejich koncentrace je nízká a nejsou schopné chránit se před reinfekcí viru.

Interpretace výsledků analýzy

  • Pozitivní krevní test HCV. Co to znamená? Tento výsledek označuje onemocnění hepatitidy C v akutní nebo chronické formě nebo dříve přenášené onemocnění.
  • Negativní HCV analýza krve. Co to znamená? V krvi není žádný virus hepatitidy C nebo nedávno došlo k infekci, takže proti němu nejsou žádné protilátky. U některých pacientů se protilátky proti tomuto viru vůbec nevytvářejí. Tento scénář vývoje onemocnění se nazývá seronegativní, objevuje se v 5% případů.
  • PCR na HCV RNA nevykazoval žádný virus, byl dříve získán pozitivní HCV krevní test. Co to znamená? Výsledek krevní testu na HCV byl falešně pozitivní, příčinou mohou být některé infekce, novotvary, autoimunitní onemocnění.

HBV protilátky zjištěné v krvi, co to znamená?

Natalka

Protilátky proti viru hepatitidy C (anti-HCV) - infekce hepatitidou C diagnostickou metodu pro detekci krve přes obě IgG třídy a IgM (celkem specifických protilátek produkovaných k proteinům viru hepatitidy C podle ELISA imunoanalýzou). V normě neexistují žádné protilátky proti viru hepatitidy C v krvi.
Detekce celkových protilátek (anti-HCV) umožňuje diagnostikovat hepatitidu C po 3-6 týdnech a po infekci. Detekce protilátek ELISA je však screeningem a není dostatečná k diagnostice viru hepatitidy C a vyžaduje potvrzení imunoblotovou metodou.

Julie

Na rozdíl od HBV, při diagnóze antigenních a protilátkových markerů, jsou zachyceny pouze HCV pomocí ELISA. HCV antigeny, pokud se dostávají do krve, jsou v množství, která prakticky není zachycena. HCV antigeny mohou být detekovány v biopsii jater pomocí imunohistochemických metod vyšetřování. To významně omezuje schopnost posoudit průběh a aktivitu infekčního procesu.
V poslední době existují náznaky nového přístupu k indikaci HCV antigenů v krvi. Prvním krokem je uvolňování antigenů z buněčných struktur lýzou séra, druhým je zachycování antigenů se specifickými monoklonálními protilátkami. Zavedení této metody do klinické praxe má za cíl podstatně obohatit možnosti diagnostiky a kontroly v průběhu HCV.
Anti-HCV z větší části (s výjimkou protilátky třídy M až coreAg) nenaznačuje probíhající replikace viru, není možné určit jejich aktivitu, mohou odpovídat po infekci. Musíme také vzít v úvahu, že příjemci, kteří byli transfuze infikovanou krví, mohou být detekovány anti-HCV dárce s údajem v jednom není nutně indikátorem potransfuzní infekce HCV. Indikace anti-HCV, je zejména řeší problém etiologické diagnózy, ale ani charakterizovat průběh infekce (akutní, chronické) a neřeší problém předpovídání. U pacientů s chronickou HCV protilátky anti-HCV detekován v krvi a to nejen ve volné formě, ale také ve složení cirkulujících imunokomplexů. Jejich obsah je poměrně větší s vývojem kombinované hepatitidy typu HBV / HCV.
Protilátky se tvoří na každém virovém proteinu lokalizovaném ve strukturní a nestrukturální oblasti HCV. To určuje jejich nerovnou specifičnost a tedy i odlišnou diagnostickou informačnou hodnotu indikace. Pro screening anti-HCV se používá metoda ELISA a jako potvrzující referenční test metoda imunoblot (RIBA). První testovací systém založený na indikaci protilátek proti C-100-3 v ELISA rychle se rozšířil v klinické epidemiologické praxi při výběru dárců. Bylo však umožněno zachytit protilátky v zóně, která charakterizuje pouze 12% virového polyproteinu, a výlučně v nestrukturální oblasti (NS3, NS4). Kromě toho se umělý rekombinantní antigen C-100-3 zcela neshoduje s přirozenými virovými proteiny, což předurčuje jeho slabou imunogenicitu.
Protilátky proti S-proteinu (jádro Ag) přes antigenu C-100-3 obecně nejsou zachyceny. To vše předem stanovenou indikace specificita anti-HCV a velký počet falešně negativních výsledků, a to zejména v chronické fázi HCV. U pacientů s těžkým hypergammaglobulinemia, naopak, test C-100-3 často dává falešně pozitivní výsledky. Když indikační protilátky k C-100-3 zvláštních obtíží vznikají při řešení problému diferenciální diagnostice chronické HCV autoimunitní hepatitida, kryoglobulinemie, kolagenózy.
Testovací systémy druhé generace umožňují zachytit protilátky proti bílkovinám v různých zónách genomu, a to nejen strukturální, ale i strukturní oblasti. Jejich výhodou byla především vysoká specifičnost, stejně jako možnost úplnějšího vyjádření antigenního spektra HCV. Použití testovacích systémů druhé generace umožnilo výrazně zlepšit výběr dárců a snížit riziko vzniku posttransdifuzního HCV.
Současně as použitím testovacích systémů druhé generace jsou falešně negativní výsledky možné zejména u pacientů s HCV genotypy neobvyklými pro tuto oblast. Nejpokročilejší zkušební systémy jsou třetí generace.
Informativnost studií je významně zvýšena, když je komplexně hodnoceno široké spektrum anti-HCV, nutně za podmínek dynamické kontroly. Takový pozorovací systém umožňuje detekovat změny v poměru protilátek k různým antigenům HCV.

Evgeny Stefantsov

U syna je odhalen АТ k HCVAg. A HB s Ag není detekován, může to být chyba. A co je nezbytné předat analýzu pro přesnou diagnózu? Můj syn už 27 let nepoužívá drogu. Krev byla podána dvakrát v Tambově pro HIV a v řece. atd. Inzhavino do lékařské rady v armádě a pak dal takovou diagnózu.

Hepatitida Anti HCV-total (polozhitelny) Poraďte se prosím!

Moje žena a já jsme podstoupili test, testy ukázaly virus hepatitidy. Mám celkem pozitivní anti-HCV. Zbytek je negativní. U manželky. Jak nebezpečné je, kolik času se zachází? Kolik stojí? A co práce, je možné pracovat během léčby? Cítím se skvěle!

R to

Anti-HCV přítomné v akutní (mohou být zjištěny již 4 - 6 týdnů po infekci) a chronické hepatitidy. Celkové množství anti-HCV se vyskytuje také u těch, kteří měli hepatitidu C a získali se samostatně. U takových lidí může být tato značka zjištěna během 4 až 8 let nebo po obnovení. Proto pozitivní test na anti-HCV není dostatečný pro stanovení diagnózy. Na pozadí chronické infekce jsou detekovány celkové protilátky nepřetržitě, a po úspěšné léčbě skladovány po dlouhou dobu (zejména kvůli anti-HCV jádrové IgG, které se o nich níže), a jejich názvy se postupně snižuje.

Ekaterina Gustová

Hepatitida C se přenáší krví a tělními tekutinami parenterálně, sexuální a transplacentární způsoby. rizikovou skupinu tvoří lidé, kteří mají intravenózní drogová závislost, promiskuita, jakož i zdravotníky, pacienty, kteří potřebují hemodialýzu nebo krevní transfuze uzavřena. Průnik do těla, HCV dostává do krve makrofágy a hepatocyty z jater, kde se replikuje. Poškození jater se vyskytuje hlavně v důsledku imunitní lyzačního virus má také přímý cytopatický účinek. Podobnost antigen viru antigeny lidského histokompatibilního systému vyvolává autoimunitní ( „systém“) reakce. Program HCV infekce může nastat projevy systémové autoimunitní tyreoiditidy, Sjogrenův syndrom, idiopatická trombocytopenická purpura, glomerulonefritidy, revmatoidní artritidy a dalších. V porovnání s jinými virová hepatitida, hepatitida C je méně jasný klinický obraz se často stává chronickou. V 20 - 50% případů chronické hepatitidy C výsledků ve vývoji jaterní cirhózy a 1,25 - 2,50% - na vývoje hepatocelulárního karcinomu. Při vysoké frekvenci jsou autoimunitní komplikace.
Chci tě rozčílit! Hepatitida C není léčitelná stejně jako infekce HIV! Můžete s ním žít roky! Ale dříve nebo později se může objevit cirhóza jater. Sledujte, s kým pracujete. Zda vaše diagnóza ovlivní práci není známa. Ale je lepší, aby vaši kolegové tuto diagnózu neřekli

Kostarev konstantin

Stojí za zmínku, že pouze asi 20% lidí, kteří jsou jednou infikováni hepatitidou C, se s infekcí dokáže vypořádat sami. Proto bohužel ve většině případů přítomnost protilátek proti HCV indikuje chronickou virovou hepatitidu C (CVHC).

Olga

K výše uvedeným skutečnostem dodávám, že po detekci protilátek je nutné provést analýzu přítomnosti viru v krvi. Tato analýza se nazývá HCV RNA metodou PCR, je-li pozitivní, pak je nezbytné provést genotypizaci, tj. Odhalit genotyp viru (závisí to na čase a nákladech na léčbu). Pokud jste negativní, možná jste se stali jedním z 15-20% těch šťastlivců, kteří se uzdravili. Ale v takovém případě je třeba situaci sledovat a alespoň jednou za rok musíte provést analýzu PCR.
Pokud je ještě hepatitida, neměli byste se rozčilovat. Je úspěšně léčena. Léčba je obtížná, ale můžete pracovat, pokud práce není mezi nebezpečnými, vyžadující zvláštní koncentraci. Ve vesmíru to nestojí za to létat)))

Sada činidla pro imunoenzymatické identifikaci tříd imunoglobulinů G a M proteinů na jednotlivé HCV (jádro, NS3, NS4, NS5) (nejlepší anti-HCV spektrum)

Podmínky skladování Souprava činidel pro imunoenzymatické identifikaci tříd imunoglobulinů G a M proteinů na jednotlivé HCV (jádro, NS3, NS4, NS5) (nejlepší anti-HCV spektrum)

Uchovávejte mimo dosah dětí.

Objednejte si léky v lékárnách:

Nechte svůj komentář

  • Sada první pomoci
  • Online obchod
  • O nás
  • Kontaktujte nás
  • Kontakty vydavatelství:
  • +7 (495) 258-97-03
  • +7 (495) 258-97-06
  • E-mail: [email protected]
  • Adresa: Rusko, 123007, Moskva, ul. 5. Magistralnaya, 12.

Jsme v sociálních sítích:

© 2000-2018. REGISTRUM LÉČIV RUŠÍN ® RLS ®

Všechna práva vyhrazena.

Komerční využití materiálů není povoleno

Informace jsou pro zdravotníky

Laboratorní diagnostika hepatitidy C

MI Mikhailov, Ústav epidemiologie a mikrobiologie. NF Gamalei RAMS, Moskva

Při stanovení diagnózy "hepatitidy C" je třeba zvážit následující nejdůležitější faktory:

  • ukazatele aktivity "jaterních" enzymů;
  • přítomnost nebo nepřítomnost markerů infekce virem hepatitidy C (HCV) a jinými hepatotropními viry;
  • epidemiologická historie;
  • výsledky klinického vyšetření pacienta. Pouze komplexní popis těchto faktorů umožňuje diagnostikovat tuto chorobu s vysokou spolehlivostí. Laboratorní pracovník musí poskytnout objektivní informace o stanovení rozsahu virových antigenů a protilátek, stejně jako HCV RNA, a lékaři, zaměstnanec transfúze krve služeb a epidemiology rozhodnout problémů, kterým čelí. Nejčastěji je to:
  • Identifikace osob s HCV ke snížení posttransfuzní hepatitidy C;
  • diagnostiku a diferenciaci akutní a chronické hepatitidy C;
  • prognóza onemocnění;
  • jmenování, hodnocení a prognózy účinnosti terapie;
  • studovat míru HCV v populaci a různých populačních skupinách.
    Současně jsou hlavními oblastmi práce laboratoře:
  • vývoj a výběr nejvíce informativních metod detekce markerů HCV infekce;
  • definice kritérií pro objektivní hodnocení získaných výsledků;
  • vývoj optimálních algoritmů pro provádění laboratorních studií;
  • zavedení systému pro zlepšení detekce markerů infekce HCV.

    Základem laboratorní diagnostiky hepatitidy C HCV sloužit poznatky o jeho replikaci, informace o dynamice vznik a zánik markery infekce, stejně jako moderní imunochemických a molekulárně biologických metod pro detekci antigenů, protilátky a nukleové kyseliny.

    VIRUS HEPATITIS C. HCV byl poprvé identifikován v roce 1988, kdy skupina výzkumných pracovníků, vedená M. Houghtonem a Choo Q.L, pomocí nových molekulárně biologických metod vyšetřování, klonovala a sekvenovala genomový virus [1]. Část viru hepatitidy C má sférický tvar se středním průměrem asi 50 nm [2,3]. Pokusy o vizuálně detekovat a studovat strukturu viru hepatitidy C vykonané od objevení viru, ale dosud nejsou k dispozici žádné dobře zdokumentované Výsledky těchto studií, možná kvůli potížím akumulace virových částic v požadovaných množstvích.

    VGSedinstvenny člen rodu hepacivirus v rodině Flaviviridae, která zahrnuje viry, jako je virus býků průjmu a moru prasat (rod Pestivirus) a virus žluté zimnice, virus Dang a GB-virus: GBV-A, GBV-B a GBV-C / HGV (rod Flavivi-rus). Struktura viru hepatitidy C může být znázorněna následujícím způsobem (schéma č. 1). Nukleokapsidový zahrnuje RNA viru hepatitidy C nukleokapsidového vrchní povrchovou vrstvou s lipidovou obálkou zapuštěné něm obalové proteiny kódované HCV RNA. Virus genom obsahuje lineární jednořetězcovou RNA molekulu kladné polarity, délku asi 9600 nukleotidů. Organizace HCV genomu je podobná s jinými flavivirymi. Rozlišuje dvě zóny, které kódují strukturní a nekonstrukční (funkční) proteiny. Geny kódující strukturní proteiny se nacházejí v 5 'oblasti genomu viru a nestrukturální v 3' oblasti. Gen HCV má jediný otevřený čtecí rámec (ORF), což je jediný polypeptid (přibližně 3000 aminokyselin), která působením buněčnými a virovými proteázami řezané do strukturálních a nestrukturálních proteinů.

    Obr. 1. Strukturální prvky HCV

    Strukturní proteiny zahrnují proteiny kódované Core, El a E2 s HCV RNA zónami. Ukázalo se tři formy C-proteinů HCV: plné délky (21) o molekulové hmotnosti 21 kD - zkrácené (P19) a forma (p16) byla zjištěna v jadérky infikovaných hepatocytů. Na jejím povrchu je C-protein nese různé vysoce konzervovaný epitop B-buněk, jehož existence je velmi důležité pro detekci protilátek proti HCV v laboratorní diagnostiky hepatitidy C.

    HCV RNA zóna - E1 a E2 kódují proteiny s molekulovou hmotností 31 a 70 kDa. Tyto proteiny mají několik N-glykosylačních míst; E1 protein definován tak, že 6 takových míst, a v E2 - 11. V uzavřené části E2 informace o malých proteinů v - P7, které se nevyskytují v konstrukci viru.

    Označení oblastí blíže k 3'-konci HCV RNA - jako zón s informacemi o nestrukturálních proteinech viru - naznačuje, že tyto proteiny nejsou strukturálními složkami virové částice. V nestrukturální zóně jsou HCV RNA přiděleny místa označená jako: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A a NS5B. Většina proteinů kódovaných nestrukturními zónami HCV RNA je nezbytná pro replikaci viru.

    Srovnávací analýza nukleotidových sekvencí RNA izolátů HCV získaných v různých oblastech světa a dokonce i během onemocnění od stejného pacienta odhalila hlavní rys tohoto viru - vysokou heterogenitu RNA. Ustanovení o významné genetické variabilitě HCV RNA je základem teorií vysvětlujících: dlouhodobý (někdy celoživotní) transport viru, častý vývoj chronické nemoci, obtíže v terapii a tvorba účinných očkovacích přípravků. Nejvýznamnější rozdíly v sekvencích HCV RNA jsou koncentrovány v N-terminální části oblasti E2, která je označována jako "hypervariabilní oblast" (HVR) [4].

    V současné době existuje 6 hlavních genotypů a více než 100 podtypů HCV. Genotypy 1a, 1b, 2a, 2b, 2c a přes účet pro více než 90% HCV izolátů získaných v Severní a Jižní Americe, Evropě, Rusku, Číně, Japonsku a Austrálii / Novém Zélandu [5]. Genotypy 4, 5a a 6 jsou zaznamenány ve střední a jižní Africe, v jihovýchodní Asii. V zemích Ruska a SNS byla zaznamenána prevalence genotypu 16 (ne méně než 68,9%) [6,7]. Předpokládá se, že pacienti infikovaní genotypem 1 (zejména 1c) reagují horšími na léčbu ve srovnání s pacienty infikovanými jinými genotypy viru.

    HCV pacienta cirkuluje jako populace virových částic, jejichž genom se od sebe liší o 1-2% (kvazispetsifichnosti) v důsledku mutací, které se hromadí v průběhu infekce a / nebo z do pacienta v průběhu infekce. Tyto mutantní formy mohou poskytnout silnější nebo replikace může pomoci virus vyhnout se imunitní reakce a potenciálně ovlivnit výsledek akutní infekci, rozdíly v průběhu onemocnění a odpověď na IFN [8].

    STANOVENÍ ANTI-HCV. Po objevení viru HCV a určit jeho roli v rozvoji post-transfúzní hepatitidou - „ani ani B“ výzkumníci byli vyzváni, aby vyvinout metody schopné detekovat ty s HCV a jsou vhodné pro diagnózu akutní a chronické hepatitidy C. Bylo zjištěno, že HCV antigeny cirkulují v extrémně nízké koncentrace, a je jasné, že metodický úroveň na konci 80-tých let XX století, který se používá k detekci virové antigeny je zjevně nedostatečné.

    V roce 1989, skupina vědců firmy „Chiron Corporation“ pod vedením Q-L.Choo provádět klonování HCV RNA a byl imunoreaktivní oligopeptidy, které reagují s protilátkami cirkulující v krvi u pacientů s chronickou hepatitidou „ani A ani B“. Tyto oligopeptidy se staly základem diagnostických léků pro detekci protilátek proti HCV. To vedlo k rychlému pokroku ve vývoji a výrobě diagnostických produktů. Hlavní metodou pro detekci anti-HCV byl enzyme-linked immunosorbent test, jak je způsobem, který splňuje požadavky praktické zdravotní -te Vysoká citlivost, specifičnost a snadné chování.

    Vzhledem k tomu, že HCV přetrvává v krvi u pacientů s akutní a chronickou hepatitidou C, ve spojení s anti-HCV diagnostické produkty se zaměřují vývojáři soustředěných na vytváření testovacích systémů pro detekci protilátek, poskytuje co možná identifikaci nosičů viru, a již je to možné diagnózu akutní infekce. Rozmanitost antigenů a antigenních determinant kódovaných strukturní a nestrukturní HCV RNA oblasti, je směr stanoven v designu diagnostické přípravky pro toto uspořádání a oligopeptidy používané k jejich vytvoření. Od doby zjištění HCV byly vytvořeny diagnostické systémy tří generací (tabulka 1).

    Tabulka 1
    Diagnostické léky pro detekci anti-HCV [9]

    Použité peptidy,
    zóny HCV RNA, ve kterých je
    jsou kódovány

    % detekce nosičů
    HCV

    Čas první
    identifikovat
    anti-HCV z
    časná žloutenka

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 a NS4
    NS3p NS3
    C 100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 a NS4
    NS3p NS3
    Peptid NS5

    Zavedení dalších peptidů, zejména s22-3 (jádro), v diagnostických přípravků 2. a 3. generace povolené vyřešit hlavní problém, to znamená, že ke zvýšení citlivosti, specifičnosti, a co je nejdůležitější, detekci anti-HCV. Díky diagnostickým křivkám třetí generace je možné zjistit až 97% nosičů HCV. Současně byla diskutována určitá diskuse zavedením peptidu kódovaného HCV RNA NS5 oblastí do diagnostického systému. Podle některých výzkumníků nemá přítomnost tohoto peptidu zásadní význam pro zlepšení kvality diagnostického léčiva. [10,11]. Avšak protilátky proti NS5 mohou být detekovány v časnější době infekce, což zlepšuje kvalitu laboratorní diagnostiky akutní hepatitidy C. [12].

    V současné době se diagnostické přípravky třetí generace používají po celém světě, včetně Ruska. Peptidy použité v diagnostických přípravků, získaných rekombinantní technologií (např diagnostické společnosti: „Diagnostické prostředky“, Nižnij Novgorod; „vektor“, Novosibirsk; „Roche“; „Abbott“ a kol.), Nebo syntetické ( 000 MC "Avicenna", Petrohrad, "Organon" atd.). Diagnostika, při které byly oba typy peptidů používány současně, byly označeny jako přípravky 4. generace. Podle jejich vlastností tyto léky nemají významné rozdíly. Srovnávací testy, které pravidelně provádí Ministerstvo zdravotnictví Ruska, prokázaly srovnatelnou citlivost diagnostických příprav domácích i zahraničních výrobců.

    Bylo zjištěno, že použití diagnostických léků třetí generace pro detekci anti-HCV u imunokompetentních populací (například dárců krve) se odhaduje na 98,8-100%. Současně je u osob s poruchou imunitního systému, například u pacientů po transplantaci ledvin, kostní dřeně nebo osoby infikované HIV, tato hodnota významně nižší - 50 až 95% [12]. S.George a kol. [13] ukázalo, že 8,4% pacientů s infekcí HIV má falešně negativní výsledky detekce anti-HCV. A u takových pacientů může být v průběhu sledování zaznamenáno séroreverzní účinek; registrace pozitivního výsledku po séro-negativním období proti HCV [14].

    Jedním z nejdůležitějších problémů při provádění studií na přítomnost anti-HCV jsou falešně pozitivní výsledky. Jejich vzhled může být způsoben nespecifickou interakcí reakčních složek, možnými křížovými reakcemi s jinými virovými antigeny a mnoha dalšími faktory. Úroveň falešně pozitivních výsledků detekce anti-HCV s různými diagnostickými léky může dosáhnout 10-20% [15,16]. Zvýšená úroveň těchto výsledků byla zaznamenána u pacientů s onkologickými a autoimunitními chorobami, u osob s imunodeficiencí a u pacientů se syfilisem [16,17]. Existence falešných pozitivních výsledků vede k tomu, že laboratorní pracovník má za úkol rozlišovat je od skutečné detekce anti-HCV. K vyřešení tohoto problému se sérum detekuje v krevním séru HCV RNA. Avšak negativní výsledek detekce HCV RNA neumožňuje mluvit o přítomnosti falešně pozitivní detekce anti-HCV. Je třeba mít na paměti, že anti-HCV jsou izolovány a cirkuluje v krvi pacienta, který se získává z akutní hepatitidy C (10 až 15%), nebo jejichž eliminace HCV RNA došlo v důsledku léčby.

    POTVRZENÍ (SUPPLEMENTÁLNÍ) ZKOUŠKY. K rozlišení falešně pozitivních vzorků a vzorků, které skutečně obsahují protilátky proti HCV, byly vyvinuty další (doplňkové) testy. Nejčastěji se používají v těchto testech imunoblot princip [např. - RIBA test ( "Ortho-Clinical Diagnostics"); „LiaTek HCV“ (Organon Teknika)], při adsorbuje na nitrocelulózovou membránu ve formě jednotlivých proužků antigeny kódované různými zónami HCV RNA. Anti-HCV interagují s adsorbovanými antigeny za použití enzymem značenou protilátku proti lidskému Ig G, s jejich následným detekce s použitím komplexu substrátu. Kromě imunoblotem, jakož i dodatečné testy použít diagnostické prostředky pro detekci anti-HCV proti specifickým antigenům, kódovaných různými zónami HCV RNA [ „Spectrum 4“ ( „ImBio“ Nizhni Novgorod; RecombiBest anti-HCV-spectrum „- OOO“ vektor Nejlepší "Novosibirsk, IFA- anti-NSO-Spektr, NPO" Diagnostické systémy“, Nižnij Novgorod].

    Návrh a realizace těchto testů je rovnoběžná se zavedením screeningových testů pro protilátky anti-HCV, opakování princip rozšíření spektra peptidů použitých v každé následující generaci diagnostických činidel. Diagnostická RIBA-III se tedy odlišuje od předchozí generace přidáním peptidu kódovaného zóny NS5. Zásady, které potvrzují pozitivní výsledek detekce anti-HCV patří především: možnost (v některých případech), přesnější výsledky enzymatické reakce reakcí s jednotlivé peptidy, stejně jako použití v několika DIAGNOSTICUM peptidů s rozprostřeným spektrem, které se nepoužívají ve screeningových testech. Pouze zavedení nových peptidů umožňuje zvýšit diagnostickou hodnotu potvrzovacích testů.

    Interpretace výsledků získaných například v takovém testu jako RIBA-III zahrnuje tři možné odpovědi: pozitivní, negativní a neurčitý výsledek. Poslední z nich je uveden v nepřítomnosti jasně uvedeno (podle pokynů dodávaných se diagnostická souprava), což umožňuje, kdo něco o přítomnosti nebo nepřítomnosti anti-HCV v testovaném vzorku. Korelace spektra zaznamenaných odpovědí během potvrzovacích testů se liší v závislosti na charakteristikách skupin pacientů, u nichž jsou primárně detekovány anti-HCV [18]. Podle J.M. Pawlotsky a kol. [19], v polovině případů výsledků, interpretovaných jako "nejasné", může být detekována HCV RNA. Podle našeho názoru legitimita odpověď - „nedefinovaná detekce výsledkem anti-HCV“, vydané pro zaměstnance klinik laboratorní evidentní, a to nejen v potvrzující zkoušce, a rutinní vyšetření na přítomnost anti-HCV. Nutnost takové interpretace získaných výsledků je odrazem současného stavu laboratorní diagnostiky hepatitidy C.

    STANOVENÍ ANTI-HCV IgM. V současné době byly vytvořeny a vyráběny diagnostické soupravy pro detekci IgM anti-HCV od firem: "Vector Best"; "Diagnostické systémy"; "Imbio", "Abbott" atd. Ve fázi návrhu diagnostických souprav byly vyvinuty kity ELISA založené na peptidech kódovaných různými oblastmi HCV RNA [20]. Volba byla zastavena na peptidu kódovaném jádrovou oblastí HCV RNA a detekcí IgM protilátek proti němu. Stejně jako u testů na detekci anti-HCV (IgG) mohou být ve studii IgM anti-HCV zaznamenány falešně pozitivní výsledky. Podle Stevensona D.L. s et al. [21], až 70% pacientů s chronickou hepatitidou C s přítomností IgM anti-HCV současně mělo zvýšenou hladinu revmatoidního faktoru, což přispívá k vzniku falešně pozitivních výsledků. Současně, podle Pawlotsky J.M., přítomnost revmatoidního faktoru neovlivňuje kvalitu detekce IgM anti-HCV [22].

    STANOVENÍ ANTIGEN HCV. Možnost určení antigenů HCV přitahovala pozornost výzkumníků ihned po objevení viru. Teoretická možnost jejich testování byla prokázána Krawczynski K. et al [23] zjistili, že imunohistochemické v jaterní tkáni HCV antigeny, což demonstruje specifitu imunofluorescenční záře. Použití polynenasycené a monoklonálních protilátek na různé HCV antigeny stanovila přítomnost HCV jádrového Ag, antigeny kódované NS3 a NS4 oblasti HCV RNA v jádru a cytoplazmě hepatocytů, v 60-90% pacientů s chronickou HS [24].Nicméně, další studie ukázaly, že antigeny HCV mohou být detekovány v méně než 5% hepatálních buněk.

    První zkušební systémy pro diagnostiku ( „Ortho protilátek na antigen jádra (myší monoklonální) EL1SA testovací systém“ a „Imucheck F-HCV Ag jádro Kokusai“) pro detekci HCV antigenu se na trhu objevily imunologických přípravků v roce 1999. Pro účely detekce byl vybrán jaderný HCV antigen, který byl stanoven pomocí ELISA varianty na pevné fázi navržené na základě monoklonálních protilátek. První studie o použití těchto testů určila jejich vysokou citlivost, specifičnost a slib použití, především v transfuzní službě [25,26]. Instalováno:

  • možnost stanovení jádra Ag HCV v séru nebo plazmě;
  • specifičnost detekce jádra Ag HCV;
  • přítomnost osob s cirkulujícím antigenem v krvi séronegativních pro anti-HCV;
  • častá (90,3%) detekce jádra Ag Ag HCV v krevním séru za přítomnosti anti-HCV a HCV RNA [25];
  • přímá korelace mezi koncentrací HCV RNA a detekcí jádra HCV Ag [25];
  • snížení fáze "okna" - od okamžiku infekce až po první pozitivní výsledek detekce anti-HCV. Bylo zjištěno, že HCV jádro Ag může být detekováno v 83% případů (n = 24) v den po první detekci HCV RNA [26] a dlouhé (v průměru 26 dní) před vznikem anti-HCV [27].

    METODY DETEKCE RNA HCV. Moderní stupeň laboratorní diagnostiky hepatitidy C lze charakterizovat jako stupeň počátku široké aplikace molekulárně biologických metod detekce HCV RNA. Převážná většina metod detekce nukleových kyselin byla testována na detekci HCV RNA. Principy konstrukce diagnostických přípravků a jejich použití k detekci virové DNA nebo RNA jsou věnovány značnému počtu literárních recenzí publikovaných jak v domácích, tak v zahraničních publikacích [29]. Všechny tyto metody mohou být rozděleny do dvou skupin, které jsou založeny na aplikaci principů hybridizace bez amplifikace vybrané oblasti nukleové kyseliny nebo jejich amplifikace, což významně zvyšuje rozlišovací schopnost metody.

    Metoda hybridizace založené na kombinaci značených hybridizačních sond (geneticky modifikované nebo syntetické molekulární struktury obsahující nukleotidové sekvence komplementární k vybraným místům RNA). Výsledky jsou vzaty v úvahu intenzitou signálu přicházejícího z značky v kompozici vytvořeného komplexu.

    U hepatitidy C tento způsob detekce HCV RNA primárně nalézal aplikaci pro jeho identifikaci přímo v hepatocytech, v testech určených jako in situ hybridizace [30]. Možnost přímého odhalení HCV RNA v tkáních umožnila jeho detekci v mononukleárních krvinkách, buňkách slinných žláz a dalších tkáních pacienta s hepatitidou C [31, 32].

    Hybridizační metoda používaná k detekci HCV RNA umožňuje demonstrovat přítomnost negativních (replikačních) řetězců HCV RNA, což naznačuje aktivní replikaci viru [33].

    Metoda polymerázové řetězové reakce - v současnosti nejpoužívanější metodickou metodou, která je základem téměř všech molekulárně biologických metod detekce HCV RNA. Stanovení HCV RNA je navíc možné jak v kvalitativní tak kvantitativní verzi, což je zvláště důležité pro jmenování, sledování a hodnocení účinnosti použité terapie.

    Hlavní varianty metody lze identifikovat následovně:

  • polymerázová řetězová reakce (PCR);
  • ligázová řetězová reakce;
  • NASBA;
  • TMA (transkripčně amplifikovaná amplifikační reakce, amplifikace zprostředkovaná transkripcí).

    Polymerázová řetězová reakce - široce používaný jak v Rusku, tak i v zahraničí metodou detekce HCV RNA. Je založen na více cyklickém procesu, který připomíná přirozenou replikaci nukleové kyseliny, přičemž každý cyklus se skládá z postupných fází.

    Ze studovaného materiálu (sérum nebo plazma krve, jaterní biopsie) se uvolňuje HCV RNA. Vzhledem k tomu, že nukleová kyselina HCV je reprezentována RNA, a pro amplifikaci je požadována molekula cDNA, pomocí enzymové reverzní transkriptázy se tvoří jednovláknové molekuly cDNA HCV. V dalším kroku se do specifické části každého z řetězců HCV cDNA přidá takzvaná "cDNA". Primery - krátké oligonukleotidy, komplementární se známými nukleotidovými sekvencemi. Srovnání primární struktury 5'UTR oblasti genomu různých izolátů HCV odhalilo jejich nevýznamnou variabilitu (mezi genotypy, nukleotidovou homologií - 92-98% a v genotypu 98-99%). To dalo přednost výběru primerů z této zóny HCV RNA a jejich použití v diagnostických testovacích systémech produkovaných v naší zemi iv zahraničí.

    Dále se syntetizují nové DNA sekce pomocí enzymu DNA polymerázy závislého na DNA. V současné době je zdroj tohoto enzymu se nejčastěji používá thermophilus bakterie termus (TTh-polymerázy) nebo Thermophilus aquaticus (Taq-polymeráza). S tepelnou stabilitu v přítomnosti manganu a hořečnatých iontů, enzym se může současně použít pro syntézu komplementárních jednovláknových molekul HCV cDNA a amplifikace vybraných úseků cDNA. V závěrečné fázi jediného reakčního cyklu syntéza DNA syntetizuje nové řetězce komplementárních HCV cDNA. Několik opakování reakčního cyklu, což vede k hromadění HCV cDNA fragmentů, které mohou být registrována pomocí elektroforézou na polyakrylamidovém gelu s následnou vizuálně rozpoznat, nebo pomocí hybridizace s oligonukleotidovými sondami, což zvyšuje senzitivitu a specificitu diagnostických produktů používaných. Použití primerů značených enzymy umožňuje zaznamenat výsledky PCR za použití enzýmové imunoanalýzy.

    Stálým cílem výzkumníků, kteří navrhují diagnostické systémy pro detekci HCV RNA, je zvýšení citlivosti a specifičnosti. Tento účel slouží variantě PCR označené jako "nested PCR" [34]. Charakteristickým znakem této metody z "klasického" je současné použití dvou párů primerů, z nichž jeden je komplementárně spojen s vnitřní oblastí amplikonu získanou po prvním kole amplifikace. Současně se předpokládá, že tato varianta PCR má vyšší riziko kontaminace vzorků, což může vést k falešně pozitivním výsledkům [35].

    Akutní potřeba stanovení HCV RNA a složitosti spojené s rozsáhlou produkcí vysoce citlivých a specifických diagnostických sad pro diagnostiku PCR určují široké využití léčivých přípravků ve vědeckých laboratořích. Srovnání těchto testovacích systémů, tzv. "In-house" testů, ukázalo jejich vysokou variabilitu citlivosti a specifičnosti, stejně jako nedostatek reprodukovatelnosti výsledků mezi laboratořemi a řadou diagnostických léků. Například v prvním evropském kole hodnocení "externí" kontroly kvality detekce HCV RNA (1996) bylo ze 136 laboratoří schopno správně určit přítomnost nebo nepřítomnost virové RNA v poskytnutých kontrolních vzorcích pouze 22 (16%) [36]. Podobný výsledek byl zaznamenán v naší zemi během podobné práce v rámci federálního systému externí kontroly kvality (2001), kdy jen 3 ze 14 zúčastněných laboratoří (21,4%) dokázaly správně vyřešit tento úkol [37].

    Příčiny falešně negativních a falešně pozitivních výsledků detekce HCV RNA jsou různé. S falešně negativními výsledky:
    - ztráty nebo zničení HCV RNA při přípravě na odpověď klinického materiálu;
    - přítomnost ve vzorku inhibitorů, které ovlivňují různé složky PCR. Tyto inhibitory představují různé chemické nebo proteinové látky. Například: přítomnost inhibitorů reverzní transkriptázy v tekutině spermií neumožnila detekci HCV RNA a mluvení o možnosti provedení sexuální cesty přenosu hepatitidy C [38]; přítomnost hepaprinu [39]; vysoká hladina kryoglobulinů v krevním séru [40];
    - nedodržení termického režimu skladování a přepravy klinického materiálu. S falešně pozitivními výsledky:
    - kontaminace mezi vzorkami (při zpracování vzorků a / nebo při zpracování reakční směsi) včetně kontaminace pozitivním kontrolním vzorkem;
    - kontaminace přípravky před amplifikací (amplicony), které mohou kontaminovat testované vzorky a roztoky aerosoly nebo laboratorním zařízením.

    Hromadné zavedení diagnostiky PCR podle definice RNA HCV umístilo těla praktické zdravotní péče na úlohu přechodu na novou úroveň provádění laboratorních studií. Izolace izolovaných zón pro hlavní fáze PCR (pro přípravu vzorků, zesílení, aby se zohlednily výsledky); Samostatná sestava pro každý stupeň reakce laboratorního oděvu, automatických pipet; existence standardních diagnostických sestav a především dostupnost vysoce kvalifikovaných laborantů umožňuje snížit úroveň falešných výsledků.

    První prvek pro stanovení HCV RNA ("Amplicor ™ HCV", "Roche Diagnostic Systems") byl vyroben v roce 1993. V průběhu let se vyvíjely soupravy pro detekci HCV RNA, jejichž hlavním cílem bylo zvýšit jejich citlivost a specifičnost. Při návrhu „Amplicor TM HCV“ používá několik původních metodických postupů umožňující detekci nebo vyšší než 100 kopií HCV RNA na ml., Jakož i pro řešení možných případů kontaminace vzorků a řešení používané v sadě. Použití enzymu - amperazy a deziksiuridintrifosfata (dUTP) umožňuje zničit v prvním cyklu amplifikace předcházejících aplikony, které by mohly nastat kontaminace. Zničení amperázy na konci prvního amplifikačního cyklu (při + 55 ° C) neumožňuje enzymu zničit zvolené amplicony jako cíle. Důležitou inovací byla zavedení vnitřní kontroly. Význam této inovace spočívá v zavedení vzorku v každé sekvenci takového amplifikovaného HCV RNA části, která následně detekována s použitím vhodných primerů v amplifikační reakci ve stejném režimu. Absence pozitivní reakce při detekci vnitřní kontroly naznačuje falešně negativní reakci na přítomnost HCV RNA ve vzorku. Diagnostika další generace byla léčivo označené jako "HCV Amplicor 2.0" s použitím limitní citlivosti 50 molekul HCV RNA.

    Systém pro detekci HCV RNA pomocí sad Roche nelze vzít v úvahu odděleně od jejich přístrojů, což určuje vysokou kvalitu testování. Vývojáři metody se snažili plně automatizovat všechny fáze reakce. Ztělesněním této myšlenky byl systém „COBASAmpliPrepTM“, který umožňuje plně automatizovat proces extrakce HCV RNA, amplifikaci a detekci, čímž se snižuje riziko falešně pozitivní a falešně negativní, při zachování vysoké citlivosti a specificity [41].

    Ligasová řetězová reakce detekce RNA BGC (LCR). Metoda je založena na schopnosti enzymu "DNA-dependentní DNA ligázy" zesítovat (ligovat) fosfodiesterové vazby v DNA v přítomnosti iontů ATP a Mg2 +. Stejně jako u "klasické" PCR pro detekci HCV RNA, první stupeň LCR je reverzní transkripce za účelem získání HCV cDNA. Dále DNA ligáza váže dva páry primerů (komplementární k 5 'nekódující HCV RNA oblasti), které jsou dále amplifikovány. Detekce produktů amplifikace LCR se provádí s ohledem na reakci antigen-protilátka. Každý ze dvou primerů je označen různými hapteny. První z nich je zachycena protilátkami adsorbovanými na mikročásticích. Po promývání pomocí druhého páru protilátek značených fluorescenční značkou je jejich selektivní interakce s haptenem v amplifikačního produktu, s následnou reakcí substrátu a na účtu fluorimetru.

    Citlivost této metody je asi 200 kopií HCV RNA v ml, což umožňuje její použití k řešení různých klinických a diagnostických problémů [42]. V současné době vyrábí společnost Abbott diagnostické soupravy pro detekci HCV RNA založené na LCR.

    Nucleic Acids Seaquencence Amplification - NASBA -Způsob detekce RNA HCV je založen na současném působení tří enzymů: reverzní transkriptázy viru mieloblastomy ptáky, RNase H a T7 RNA polymerázy [43]. Na rozdíl od RT PCR není v první fázi provedena reverzní transkripce HCV RNA. S pomocí použitých enzymů lze během 90 minut získat více než 10 (9) kopií HCV cDNA [44]. Schopnost provést reakci při nízkých teplotách (+41 ° C) velmi zjednodušuje provoz a umožňuje opuštění zařízení, které poskytuje cyklické změny při vysokých teplotách. Výsledky reakce jsou vzaty v úvahu elektrochemiluminiscencí. Přes skutečnost, že citlivost NASBA je blízká RT PCR, metoda není široce používána k detekci HCV RNA. V současnosti je vyvíjena varianta metody kombinující principy NASBA a "Real-time RT PCR".

    Způsob transkripčně zprostředkované amplifikace (TMA) se liší od PCR a LCR primárně tím, že fragmenty HCV RNA jsou přímo amplifikovány spíše než HCV cDNA. V počátečním stádiu reakce je na HCV RNA připojen primer (č. 1) a pomocí enzymu (reverzní transkriptázy) se syntetizuje kopie cílové molekuly cDNA. Reverzní transkriptáza, která má také aktivitu RNázu-H, ničí virovou RNA v hybridu RNA-cDNA. Dále je k molekule cDNA připojen druhý primer, po kterém následuje dokončení dvouřetězcové DNA reverzní transkriptázou. Při použití jiného enzymu dochází k RNA polymerázě, k transkripci RNA s cDNA, což vede k vytvoření 100 až 1000 kopií amplikonu HCV RNA v jediném reakčním cyklu. Primér č. 2 je připojen k těmto RNA-aplikacím s další syntézou kopií cDNA a destrukcí molekuly RNA. Přidání primeru č. 1 k cDNA, po kterém následuje dokončení dvojvláknové DNA, vyvolá další amplifikační cyklus. Výsledky reakce jsou vzaty v úvahu na lumenometru, protože vytvořené RNA amplikony specificky interagují s DNA sondami značenými chemiluminafory.

    Jako výhody metody TMA při detekci HCV RNA je třeba poznamenat:

  • reakce při nižších teplotách v porovnání s PCR;
  • vznik většího počtu amplikonů v jednom reakčním cyklu, což snižuje dobu potřebnou pro získání konečného výsledku (30-40 minut), a zvyšuje citlivost reakce (50 kopií / ml). [45].
  • což snižuje riziko kontaminace, protože RNA je méně stabilní než DNA.

    Srovnávací studie detekce HCV RNA pomocí TMA a jiných metod prokázaly vysokou míru shody výsledků [45].

    Kombinace principů hybridizace a amplifikace je základem metody detekce HCV RNA označené jako "Hybridizační metoda používající rozvětvené sondy nebo rozvětvený DNA test (bDNA) [46]. Na rozdíl od PCR v tomto testu, amplifikace nezahrnuje molekuly HCV cDNA, ale signál. Reakce byla provedena na destičkách s 96 jamkami, na kterých byly adsorbovány fragmenty HCV RNA z 5 'netranslatované zóny a jádrový gen HCV RNA. Vzhledem k následné spojení s molekulou DNA, syntetickou rozvětvený a hybridizace se sondou značenou alkalickou fosfatázou zesilovačem a následné enzymatické reakce se provede za prudkým nárůstem v přijatém signálu. V současné době diagnosticums třetí generaci trhu diagnostiky (Bayer 3,0 Hepati-tis C Virus RNA kvantifikací Brna), které mají citlivost k identifikaci 520 lU / ml (2500 kopií HCV RNA).

    KVANTITATIVNÍ DETEKCE HCV RNA. Pro stanovení koncentrace HCV RNA se používá kvantitativní varianta PCR. Zpočátku byla koncentrace HCV RNA se pokusil charakterizovat řadové hodnoty, jako je například „+“, „++“, atd., Opticky reflexní intenzita pásů získaných elektroforézou amplifikačních produktů, nebo limitujícím ředěním, tedy přítomnost pozitivního výsledku ve finále titrační bod. Obtíže standardizovat všechny kroky PCR neumožňují objektivně zhodnotit koncentrace HCV RNA, což vede k významným chybám interpretaci výsledků.

    V současné době, výsledky výzkumu vyjádří kvantitativně: počet kopií HCV RNA obsažené v 1 ml, v absolutních hodnotách nebo logarifmeticheskom (log 10).. s tím, že koncentrace HCV RNA detekována odráží počet virových částic na bázi, tato hodnota se označuje jako „virus ekvivalent (eq)“, s přidáním předpony k (kilo tis) nebo M (ppm). Dalším způsobem vyjádření počtu virových částic jsou jejich hmotnostní ekvivalenty. Například v gramech nebo pikogramech (1 pg odpovídá přibližně 1 milionu ekvivalentů). Rozmanitost použitých veličin ztěžuje interpretaci výsledků získaných v různých laboratořích. Proto Expertní komise WHO o biologické normalizaci učinil „mezinárodní referenční materiál“, který obsahuje HCV RNA (liofilnovysushennaya krevní sérum obsahující HCV RNA genotypu 1), jehož koncentrace se vyjadřuje v mezinárodních jednotkách (IU / ml) [47]. Zvláštní faktory nám umožňují přepočítat získané hodnoty koncentrace do mezinárodních jednotek.

    Pro stanovení koncentrace HCV RNA se používají téměř všechny varianty PCR. Současně se s diagnostickými léky předkládá řada specifických požadavků, z nichž nejdůležitější je striktní linearita výsledků, tj. zvýšení signálu zjištěné reakce se zvýšením koncentrace HCV RNA v testovaném vzorku. Použití vnitřních standardů s odlišným obsahem HCV RNA zabraňuje mnoha metodologickým chybám, které mohou ovlivnit konečný výsledek reakce [28]. Citlivost použita diagnostika (Amplicor HCV Monitor v2.0; LCx HCV RNA kvantitativní test) může detekovat HCV RNA začíná na 50 kopií na ml [48,49], což je zvláště důležité pro stanovení účinnosti antivirové terapie zvolené.

    PCR v reálném čase (RT-PCR v reálném čase)jeden z nejslibnějších možností kvantitativní metody detekce HCV RNA. Metoda a její hardware jsou společně vyvinuty specialisty z Roche a Percin Elmer. Principem tohoto způsobu je schopnost hydrolyzovat sekvence cDNA ve směru 5 '- 3'. Při reakci se používá speciální sonda, označená dvěma fluorescenčními barvivy s těsnou absorpcí a fluorescenčními maximami. V přítomnosti amplifikačních produktů Tag-polymerázy štěpí sondu, což vede k zabránění barvivo přenosu energie z jedné molekuly na druhou, a tím brání foton. Zvláštní pomůcka zohledňuje reakci a matematické modelování kinetiky fluorescence v každém stadiu reakce, což umožňuje získat informace o počáteční koncentraci HCV RNA.

    Charakteristickým rysem "PCR v reálném čase" je schopnost získat informace o přítomnosti HCV RNA přímo v reakčním procesu, což umožňuje zkrátit dobu analýzy v kombinaci s vysokou citlivostí a linearitou získaných výsledků [50]. Podle Tatiany Yashiny a spoluautorů umožňuje tato metoda detekovat z 200 kopií HCV RNA v ml. [51].

    METODY GENOTYPOVÁNÍ RNA VHC. Stanovení přidružení HCV k určitému genotypu a podtypu našlo jeho žádost o řešení nejen čistě vědeckých, ale i praktických otázek. Například: hledání zdroje infekce během vypuknutí hepatitidy C nebo předpovídání účinnosti použité terapie.

    „Zlatý standard“ genotypu HCV - přímé určení primární struktury HCV RNA a její následné fylogenetické analýzy [52], který umožňuje jednoznačně charakterizují izolátu viru. Tyto informace můžete získat pomocí následujících možností sekvence:

  • přímý;
  • založené na standardním klonování;
  • sekvenování produktů PCR reakce (Limited-sequencing).
    Přes přesnost výsledku se metoda přímého sekvenování nepoužívá v praktické zdravotní péči kvůli technickým obtížím spojeným s prováděním výzkumu a vysokým nákladům na práci. Současně je dostupnost informací o primární struktuře HCV RNA referenční metodou genotypizace a dostupnost automatických sekvenačních zařízení zjednodušuje výsledky.

    V současné době se ve většině případů používají metody založené na použití PCR s typově specifickými primery pro genotypizaci HCV RNA. První genotypizace HCV RNA byla provedena N. Okamoto a kol., V roce 1992 s RT-PCR [53], který zahrnuje dva kroky amplifikace. První z nich byla provedena s univerzálními primery pro všechny genotypy HCV, druhá se směsí typově specifických primerů pro získání specifických amplifikačních produktů různých délek. Přítomnost určitého genotypu byla posouzena velikostí amplifikovaného produktu. Jako primery se používají typově specifické sondy, informace o kterých se nachází v oblastech 5'UTR, Core nebo NS5 RNKVS [54].

    Hybridizaci amplifikované produkty s sond specifických pro geny adsorbovaných (od 5 ‚nepřekládané oblasti HCV RNA), adsorbovaných na nitrocelulózovou membránu, leží na základě testu - označený‚INNO-LiPA HCV, INNO-genetiky‘[55]. Zpočátku s pomocí tohoto testu bylo možné typizovat genotypy: la; lb; 2a; 2b; 3a; 3b; 4 a 5a. Následně se zkušební systém 2. generace „INNO-LiPA HCV II, INNOGENETICS“ umožňují rozlišit všechny genotypy 6 a další 2c; 2d; 2i; 3c; 4a-h; 6a a 10a. [56]

    Metodický arzenál HCV genotypizace není omezen na výše uvedené metody a zahrnuje celou řadu metod:

  • genotypizace na základě analýzy restrikčních profilů amplifikovaných produktů (RFLP). Amplifikační produkty fragmentů HCV RNA (5'UTR-oblast nebo NS5 HCV RNA oblast) jsou štěpeny restrikčními enzymy. Vytvářené fragmenty se mění v délce, v závislosti na restrikčních místech, ve kterých jsou štěpeny. Výsledky elektroforézy a jejich srovnání umožňují identifikovat HCV genotyp v testovaném vzorku [57]. Srovnání výsledků genotypizace pomocí metody PCR-RFLP se sekvenačními daty ukázalo vysokou míru shody výsledků - 95% [58].
  • genotypizace založená na metodě SSCP (posuzování konformačního polymorfismu jednovláknových fragmentů DNA). 5'-netranslatovaná oblast HCV RNA, která má minimální množinu nukleotidových variací odlišujících genotypy od sebe, byla vybrána jako předmět studie. Tato skutečnost určuje možnost použití společných primerů pro genotypizaci [59].

    SEROTYPING Anti-HCV Výzkum byl umožněna díky P.Simmonds et al, stanovit přítomnost protilátek na epitopy, které genotipspetsifichnym zakódována informace NS4 HCV RNA zóna [60]. S diagnosticum pro ELISA konstruována na bázi syntetických peptidů, který je schopen rozlišit případy hepatitidy C, způsobené viry 1, 2 a 3 genotyp (89% shody s výsledky stanovení genotypu). Vývoj testsistem použití syntetických a rekombinantních antigenů kódovaných NS4 a jádro zóny HCV RNA zvyšuje seznamu typeable varianty viru a přítomnost rozhodčí podtypů (1a, lb, 2a, 2b, nad, a 4a) [61,62]. V současné době je komerční verze diagnostické přípravky pro sérotypizaci v provedení bodové ELISA - „NA Mureh 1-6 Sérotypizace testu se Murex Diagnostics“, a v provedení „imunoblot“ - RIBA HCV sérotypizace testu, Chiron Diagnostics. Srovnatelné údaje o sérotypizaci a genotypizaci HCV RNA prokázaly vysokou míru koincidence výsledků a dosáhly 95% [62].

    Sérotypizace anti-HCV ve srovnání s genotypizací HCV RNA má takové výhody, jako je jednoduchost reakce a nižší náklady. Současně tato metoda v žádném případě nemůže nahradit genotypizaci. Výsledky sérotypizace anti-HCV svědčí o typu anti-HCV u současné nebo předtím přenášené infekce. V některých případech (nejčastěji hemofilici) zaznamenán simultánní detekci různých anti-HCV podtypů, které mohou být indikativní pro infekci s více různých HCV genotypů a subtypů [63]. Navíc u pacientů s hepatitidou C na pozadí výrazného stavu imunitní nedostatečnosti může být RNA jediným markerem, což znemožňuje provedení sérotypů.

    ZJIŠTĚNÍ A TRACÍ VÝSLEDKŮ ZKOUŠENÍ SEROLOGICKÝCH ZNAČEK INFEKCIE NA VRC. Široká škála sérologických markerů současné nebo předchozí infekcí HCV, stejně jako moderní metodický rámec může vyřešit mnoho problémů na diagnostiku a prevenci hepatitidy C. Tabulka 2 ukazuje počet sérologických markerů HCV infekce a nejdůležitější oblasti jejich testování.

    Tabulka 2
    Diagnostický význam markerů současné nebo předchozí HCV infekce

    Screening
    ve službě
    krve

    Potvrzení
    PROHLÁŠENÍ
    výsledek
    + anti-HCV

    Jednou z hlavních úkolů laboratorní diagnostiky hepatitidy C je diagnostiku a oddělení akutní od chronické hepatitidy C identifikací sérologických markerů infekce. Stejně jako u ostatních akutních virových hepatitid se sérologické markery infekce HCV konzistentně objevují a mizí v průběhu infekce a v procesu obnovy (obr. 2).

    HCV RNA může být detekována 7. - 21. den po infekci HCV a anti-HCV ve dnech 20 až 150 (v průměru 50. den) [64]. Spektrum anti-HCV se může lišit v závislosti na období akutní hepatitidy. Předpokládá se, že první detekuje protilátky kódované jádrem a NS5 oblastí HCV RNA. Anti-HCV na proteiny kódované zónou NS4 není přítomen v akutní fázi hepatitidy C [65]. Srovnávací studie koncentrace anti-HCV, spektra anti-HCV a HCV RNA u pacientů s akutní a chronickou hepatitidou ukázala některé rozdíly [66]. Podle našeho názoru mohou být tyto rozdíly spjaty s individuálními charakteristikami infekčního procesu, což snižuje jejich diagnostickou hodnotu.

    Obr. 2. Akutní hepatitida C

    Analogicky s laboratorní diagnostiky hepatitidě A a B se očekává, že na přítomnost protilátek proti HCV třídy IgM bude stejně velký jako diagnostické hodnoty IgM anti-HAV a IgM anti-HBc. Nicméně, tyto testy sér od pacientů s akutní a chronickou hepatitidou C, v přítomnosti IgM anti-HCV ukázat jejich časté identifikaci u těchto pacientů - 50-93% a 50-70%, v daném pořadí [67,68], tyto výsledky ukazují, že detekce IgM Anti -HCV nelze použít jako marker akutní HCV infekce.

    Neprítomnost markeru, který tvrdí, že je "zlatým" standardem akutní hepatitidy C, určuje potřebu komplexního vyhodnocení výsledků získaných na základě dynamického pozorování pacienta.

    Stejně důležitá oblast použití vysoce citlivých metod pro testování HCV RNA - snížení rizika posttransfuze hepatitidy C. Potřeba takových prací je určena přítomností fáze "oken", tj. doba mezi prvním zjištění HCV RNA a vzhled anti-HCV, stejně jako existence dárců krve (pacienti s chronickou hepatitidou typu C), které mají HCV RNA v nepřítomnosti anti-HCV. Současný systém sledování dárcovství krve pro HCV zahrnuje pouze testování anti-HCV, riziko přetrvávání hepatitidy C přetrvává. Vycházíme z toho, že je legitimní otázka testování krevních vzorků na přítomnost HCV RNA moderními metodami (Metody NAT jsou "test amplifikace nukleové kyseliny"). Faktorem omezujícím tuto práci je vysoká cena výzkumu. Aby se snížily náklady, doporučuje se testovat sběrné sady krevních sér (od 8 do 96 vzorků) s následným vyhledáním pozitivního vzorku v případě detekce HCV RNA ve skupině sér. Při zohlednění faktoru zředění požadované HCV RNA, když jsou krevní séra nafouknuty, je otázka použití nejcitlivějších detekčních metod hlavním významem. Předpokládá se, že použití diagnostických kitu pro NAT - s citlivostí 50-100 IU / ml může významně snížit riziko posttransfuze hepatitidy C.

    Nepochybně, seznam otázek, které lze vyřešit při testování celého spektra markerů infekce HCV, není omezen na tyto dvě oblasti. Dostupnost moderních testovacích metod v kombinaci se znalostmi o jejich schopnostech otevírá široké možnosti vývoje vědeckého a aplikovaného výzkumu hepatitidy C.


  • Související Články Hepatitida