Odrůdy a nezbytnost použití studií PCR

Share Tweet Pin it

Virus hepatitidy C je virus, který obsahuje molekulu RNA. Je schopen se vyhnout imunitní reakci těla kvůli vysokým schopnostem mutace. Existuje šest hlavních genotypů viru a mnoha podtypů. V našem regionu jsou běžné 1, 2 a 3 genotypy.

U 75-80% onemocnění jde do chronické formy, která způsobuje jaterní fibrózu - stav, ve kterém je jaterní tkáň nahrazena pojivovou tkání. Fibróza vede na rakovinu nebo cirhózu. Hlavní cestou přenosu onemocnění je krev. Pokud má osoba indikaci testu hepatitidy C, provedou se dva základní testy. Identifikujte protilátky proti viru a v jejich nepřítomnosti se věří, že nemá hepatitidu. Pokud je v krvi zjištěna přítomnost protilátek proti viru hepatitidy, provádí se PCR analýza.

RNA je tato metoda stanovena v krvi již 10-12 dní po infekci a indikuje, že virus se aktivně množí v těle. Během tohoto období je jednoduše nemožné detekovat virus jiným způsobem, protože ještě nevytváří specifické protilátky a jaterní léze jsou stále neviditelné v biochemických analýzách a biopsii.

Odrůdy výzkumu s použitím metody PCR

Analýza polymerázovou řetězovou reakcí má určité výhody:

  1. S takovouto studií je určen samotný virus, nikoliv produkty jeho životně důležité činnosti. V tomto případě je možné určit typ patogenu.
  2. Tato technika má vysokou specifičnost vzhledem k tomu, že je zkoumána pouze určitá oblast DNA, pravděpodobnost vzniku chybných výsledků se snižuje.
  3. Má velmi vysokou citlivost, i když je detekováno minimální množství viru v krvi.

Existují dvě hlavní metody krevního testování hepatitidy C pomocí PCR: kvalitativní a kvantitativní PCR analýza. Pro stanovení přítomnosti viru se používá kvalitativní metoda. Každému, kdo měl v krvi protilátky proti hepatitidě, je provedena analýza. Výsledek může být pouze dvou typů: "zjištěn" a "nezjištěn", poslední hodnota se považuje za normu.

Výsledek pozitivního testu znamená, že ve vzorku byly nalezeny fragmenty virové RNA, což zase naznačuje, že osoba byla infikována hepatitidou. V případě negativního výsledku jsou možná dvě možnosti: nedošlo k žádné infekci nebo její koncentrace je tak nízká, že tato technika není detekována.

Kvantitativní metoda se v rámci studie zásadně liší podle svých úkolů a indikací. Ne všichni pacienti s hepatitidou podstoupili takovou analýzu. Jako každý jiný má konkrétní cíle. Stanovení virové zátěže nebo kvantitativní analýzy PCR na RNA viru se používá:

  • k určení RNA viru v krvi a diagnostice "virové hepatitidy";
  • předpovědět chronickou hepatitidu a průběh onemocnění;
  • pro sledování antivirové léčby a rozhodování o tom, zda se má prodloužit, snížit nebo změnit taktiku léčby.

Studie se provádí, pokud existují takové náznaky:

  • hepatitida C je detekována v kvalitativním výzkumu a protilátky se nacházejí v krvi;
  • se smíšenou hepatitidou;
  • pokud je plánována antivirová léčba;
  • během a po léčbě hepatitidy C;
  • v přítomnosti chronické a akutní hepatitidy C.

Zkouška se provádí pro odhad počtu jednotek viru v daném objemu vzorku krve 1 cm3 nebo 1 ml. Výsledky jsou uvedeny v obrázcích. Uvedené indexy se používají: IU / ml, což znamená mezinárodní jednotku na mililitr a kopie na ml, počet kopií RNA ve vzorku o objemu 1 ml. Čím vyšší je kvantitativní ukazatel analýzy, tím větší je pravděpodobnost přenosu viru na jinou osobu.

P-DNA je metoda rozvětvené DNA. Jednodušší a levnější metoda. Používá se pro více vzorků, má nízkou citlivost od 500 IU / ml. S takovou citlivostí není možné detekovat virus, i když je přítomen v krvi.

TMA je metoda transkripční amplifikace. Tato technika odhaluje nukleové kyseliny v krvi. Má nízkou cenu a vysokou citlivost od 5 do 10 IU / ml. Relativně nová technika, která umožňuje urychlit a snížit náklady na testování.

Výsledky kvantitativní analýzy stanovení virové RNA předložené laboratoří jsou interpretovány následovně:

Co je analýza PCR a virové zátěže?

Polymerázová řetězová reakce (PCR) je laboratorní metoda pro stanovení DNA a RNA. Poprvé to testovala téměř půl století americká Cary Mullisová. Tento přecitlivělý test je schopen určit nosič genomu z jedné zdrojové molekuly obsažené v krvi, slinách nebo kůži.

Metoda PCR má velké vyhlídky, nachází se nejen v lékařství, ale také v genetickém inženýrství a kriminalistice. S jeho pomocí, klony a vytváření nových typů DNA, určit stupeň příbuznosti. Na epitelu nalezeném na místě činu zřídíte zločince.

Analýza PCR pro hepatitidu - co to je a proč to dělá?

Proč je analýza PCR nezbytná pro podezření na hepatitidu C, co to je?

Virus hepatitidy C - RNA obsahující virus, má 6 genotypů a až 500 podtypů. Ze všech hepatitid má tento virus nejvyšší mutační schopnost a překonává ochrannou bariéru imunitního systému. Z celkového počtu případů hepatitidy virus C způsobil 70% chronických případů a 30% cirhózy a rakoviny jater.

Podstata metody: část vyšetřovaného genu za pomoci speciálních enzymů a podmínek je nucena reprodukovat ve zkumavce. PCR analýza umožňuje určit kmen viru, bez něhož není možné provést účinnou léčbu: každý genotyp je odlišně citlivý na antivirové léky. Existují dva typy PCR:

Antivirová terapie potřebuje konstantní monitorování, aby bylo možné včas napravit léčbu, pro tyto účely se také používá polymerázová řetězová reakce.

Kvalitativní a kvantitativní PCR

PCR kvalitativní na hepatitidě C dává odpověď: Existuje kmen viru C v pacientově krvi a který z nich. Genotypizace je nezbytná k objasnění diagnózy, prognózy onemocnění a určení načasování léčby.

Podle přijatelné klasifikace je gen označen číslem a podtyp je označen malým latinským písmem.

Speciální léčivo založené na přírodních látkách

Cena drogy

Zpětná vazba na léčbu

První výsledky se projeví po týdnu užívání

Více o přípravě

Pouze jednou denně, vždy 3 kapky

Návod k použití

Dekódování tabulky genotypů viru C:

  • Genotyp 1a, 1b, 1c
  • Genotyp 2a, 2b, 2c, 2d
  • Genotyp 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f
  • Genotyp 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4i, 4j
  • Genotyp 5 a
  • Genotyp 6 a

Nejběžnější genotypy jsou 1,2,3. V Rusku jsou 1a, 1b, 2 a 3 kmeny viru C.

Genotyp viru 1b je obtížněji léčen, než u ostatních, v 90% přechází do chronické formy, z nichž 30% se regeneruje do rakoviny nebo cirhózy jater.

Genotypy 2a a 3a mají stupeň chronizace 33-50%, jsou citlivější na antivirovou terapii.

Při potvrzení přítomnosti viru se kvantifikuje PCR pro hepatitidu C, která počítá počet molekul RNA v laboratorním vzorku pacienta.

Vysvětlení analýzy

Kvalitativní PCR analýza má dvě odpovědi:

PCR negativní znamená, že patogen ve vzorcích krve není detekován.
Pozitivní odpověď naznačuje opak: RNA jednoho nebo jiného genotypu viru S.

Pravděpodobnost spolehlivosti výsledku je 95%. Zbývajících 5% je chyba kvůli chybě osoby. Tato možnost je povolena vzhledem k vysokým požadavkům na provádění výzkumu:

  • pravidla pro skladování činidel;
  • příslušná kvalifikace zdravotnického personálu;
  • čistota biomateriálu.

Souprava PCR samotná má 100% diagnostickou přesnost.

Kvantitativní PCR RNA hepatitidy C vám umožňuje určit virovou zátěž na těle pacienta. Použití:

  • je specifikována fáze onemocnění (akutní, chronická);
  • je stanovena účinnost antivirové léčby;
  • potřeba biopsie jater je vyjasněna.

V některých případech pacient necítí žádné známky onemocnění, zatímco metoda PCR vykazuje infekci HCV. To znamená, že onemocnění je v rané fázi vývoje nebo v chronické formě. K objasnění diagnózy je zapotřebí více výzkumu, jak co nejdříve zahájit antivirovou léčbu.

Virová zátěž u hepatitidy C

Virové zatížení ukazuje aktivitu viru hepatitidy, jak aktivně dochází k jejímu rozmnožování.

Co to je?

Kvantitativní PCR na hepatitidě C se měří v mezinárodních jednotkách na ml nebo IU / ml, což znamená, kolik kopií ribonukleové kyseliny specifického kmene viru C bylo nalezeno v 1 ml testované krve.

Co je považováno za vysoké, jak nízké?

Analýza virové zátěže umožňuje stanovit přítomnost virové RNA v koncentraci 50 IU / ml. Virová zátěž je normální - to je, když není pomocí PCR detekována žádná molekula HCV RNA.

Tabulka virové zátěže:

  • nízká koncentrace od 600 IU / ml 3 x 104 IU / ml;
  • průměrná koncentrace od 3 * 104 IU / ml do 8 * 105Mm;
  • Vysoká - hladina vyšší než 8 * 105 IU / ml.

Nízká virová zátěž - je to signál, že léčba je správně zvolena a prognóza pro léčbu hepatitidy C je příznivá.

Vysoká koncentrace virových buněk že onemocnění je v akutní fázi. Krví pacienta je nebezpečným zdrojem infekce.

Virová zátěž, jejíž indikátory jsou na průměrné úrovni, charakterizuje buď chronickou fázi TUV, nebo může mít dva vývojové trendy: zvýšit nebo snížit.

Na jeho konci - za 6 měsíců se provádí kontrolní PCR.

Náklady na diagnostiku PCR

Následující příznaky by měly vyvolat obavy:

  • obecná slabost;
  • změna barvy kůže, oční sklera, výtok;
  • nevolnost;
  • snížená chuť k jídlu;
  • bolest ve svalech a kloubech;
  • tíha v pravém hypochondriu;
  • zvýšené hladiny AST a ALT v krvi.

Při kontaktu s infikovanými pacienty se v předoperačním období doporučuje také vyšetření hemodialýzou.

Veřejné klinické ordinace provádí krevní test PCR bez poplatku, pokud se k němu přistupuje odborník na infekční onemocnění nebo hepatolog.

Placené služby pro diagnostiku PCR jsou poskytovány ve všech hlavních ruských městech. Náklady závisí na typu testu, dostupném vybavení, načasování a dalších faktorech.

Kvalitativní analýza PCR v Moskvě a Petrohradu bude stát od 600 do 900 rublů. V regionech - od 300 do 800 rublů.

Definice virové zátěže hepatitidy C bude stát 17 000-22 000 rublů. U dalších typů infekcí je cena kvantitativní studie 1200-10000 rub.

Výhody a nevýhody metody PCR

Jaké jsou výhody metody polymerázové řetězové reakce v porovnání s jinými diagnostickými metodami?

  1. Široká nabídka aplikací. Pomocí PCR pomocí standardního vybavení můžete identifikovat jakýkoli virus.
  2. Přesnost detekce patogenů. Při použití různých kombinací enzymů a analytických technik se dosáhne 100% specifikace studie pro indikovanou infekci.
  3. Vysoká citlivost. Tato technika umožňuje detekovat přítomnost jedné molekuly viru v krvi.
  4. Účinnost. Kvalitativní analýza je připravena za několik hodin, kvantitativní - po dvou dnech.
  5. Diagnostika viru v inkubačním období. Při PCR se patogen nezjišťuje přítomností protilátek, jestliže již existuje imunitní reakce těla, ale před zahájením patologického procesu, což usnadňuje léčbu.

Nevýhody PCR jsou důsledkem jejích výhod:

  • Čistota testu vyžaduje nejvyšší stupeň čistoty, včetně vzduchu v laboratoři, aby "cizí" DNA nevstoupila do vzorku;
  • vysoké nároky na zaměstnance, provádění vzorkování a analýzy biomateriálu.

Analýza PCR pro hepatitidu C

Diagnostika hepatitidy zahrnuje celý komplex testů pro stanovení přítomnosti viru v krvi. Jedním ze způsobů zjištění onemocnění je použití metody jako hepatitida C, jako je PCR. Co je to proto, proč je analýza PCR hepatitidy tak důležitá, jak se provádí a dekóduje?

Co to je?

Pro diagnostiku žaludečních vředů, kolitidy, enteritidu se používá polymerázová řetězová reakce nebo PCR. Ale jeho hlavní výhodou je, že pomáhá tělu pro detekci viru sám C hepatitidy, a protilátky proti ní, které mají schopnost nezpůsobí reakci imunitního systému v důsledku jejich schopnosti mutovat.

Studie a její podstatou je vytvořit určité podmínky, za kterých dochází k reakci řetězce hepatitidy RNA. Pokud se ve srovnání s nukleotidovou sekvencí viru hepatitidy C objeví náhoda, znamená to, že v krvi jsou virové částice a rozpad se vyskytuje v játrech. Pokud je množství viru pod určitou úrovní, provede se negativní diagnóza, pokud je vyšší - pozitivní.

Existují dva typy krevních testů metodou PCR pro hepatitidu: kvantitativní analýzu a kvalitativní analýzu.

Kvantitativní PCR, jak bylo uvedeno výše, určuje koncentraci RNA viru hepatitidy. Kromě toho je schopen poskytnout informace o intenzitě, s jakou se patologie vyvíjí, ao účinnosti předepsané léčby. Kvantitativní analýza hepatitidy C je mimořádně důležitá, protože určuje odolnost vůči působení antivirových léků a umožňuje úpravu terapie.

Po ukončení léčby pacientem pomáhá PCR stanovit další pořadí léků. V některých případech jsou potřeba další průzkumy. Například pokud je hladina ALP zvýšena (ale ne více než 2krát za půl roku) a analýza indikuje virovou zátěž nad 105 IU / ml, je pacientovi přidělena biopsie. Pokud kvantitativní analýza PCR odhalí silný zánět a fibrózu, je pacientovi předepsána léčba antivirovými léky.

V situacích, kdy je velký počet virových částic kombinován s vysokým ALT, musí být pacient okamžitě léčen bez dalších diagnostických opatření.

Proveďte tento test a zjistěte, zda máte jaterní potíže.

Kvalitativní interpretaci ukazatelů pro kvantitativní analýzu krve pro hepatitidu mohou pouze kvalifikovaní a zkušení odborníci a moderní technologie to pomáhá při nízkých koncentracích viru v krvi.

Kvalitativní analýza PCR je určena k určení a potvrzení skutečné přítomnosti viru v těle. Provádí se detekcí protilátek proti hepatitidě v krvi. Jedná se o kvalitativní test na hepatitidu zaručit přesnost výsledku o 100% a umožňuje diagnostikovat v časných stádiích onemocnění, což umožňuje bojovat proti hepatitidě B během prvních týdnů po infekci a zvyšuje šance na úplné vyléčení (v případě onemocnění typu B).

Výhody PCR

Při zkoumání metody PCR a rozluštění krevního testu na hepatitidu je také možné určit genotyp příčinného původu onemocnění. Existuje 6 genotypů viru a velké množství podtypů, ale v našem regionu rozdělení 1, 2 a 3 genotypů.

Dalšími výhodami tohoto typu diagnózy jsou:

  • Vysoká přesnost přijatých indikátorů a nízká pravděpodobnost chyb v nich;
  • vysoká citlivost k virovým částicím v krvi;
  • možnost detekce několika patogenů;
  • diagnostika patogenních intracelulárních mikroorganismů, které mají vysokou antigenní variabilitu;
  • práce s dekódováním analýzy hepatitidy umožňuje zjistit latentní infekce.

Kdo jmenuje

Analýza PCR pro hepatitidu nutně zahrnuje následující kategorie lidí:

  • těhotné ženy;
  • zaměstnanci zdravotnických zařízení;
  • potenciální dárci krve a orgánů;
  • osoby, které mají charakteristické známky nemoci;
  • Osoby infikované HIV;
  • drogově závislí;
  • osoby vedoucí promiskuitního sexuálního života.

Jak se provádí analýza a vyžaduje se výcvik?

Vzorkování krve pro PCR se provádí z žíly. Obvykle se to děje ráno před tím, než člověk jedl, protože po jídle musí projít minimálně 8 hodin. V extrémních případech může být krev odebrána k vyšetření denním nebo večerním, ale časová prodleva mezi analýzou a příjmem potravy by měla být nejméně 5 hodin.

Lidský faktor lze kvantitativně odrážet ve výsledcích: jejich přesnost se v některých případech snižuje ze 100% na 95%, proto je třeba předem připravit dodávku krve. Kvalita biomateriálu pro analýzu bude vhodná, pokud pacient dodržuje následující pravidla:

  • Než dáte krev, můžete vypít pouze čistou vodu;
  • dva dny před zahájením studie by měl být odmítnut příjem smažených a mastných potravin, stejně jako alkoholických nápojů;
  • den před návratem do laboratoře by měl přestat užívat léky. V případě, že to není možné, je absolutně nezbytné upozornit ošetřujícího lékaře a ošetřujícího lékaře;
  • v předvečer stresových situací a fyzické námahy;
  • Nepřehlédněte ultrazvuk, radiologie a instrumentální studie krátce před odběrem krve;
  • hodina před analýzou by se měla zdržet kouření;
  • 20 minut před podáním krve je třeba rozptýlit, uklidnit a dokonce dýchat.

Pokud test provádí dítě mladší 5 let, měli by rodiče zajistit, aby pili vařenou vodu každých 10 minut půl hodiny před odběrem biomateriálu.

Vysvětlení přijatých dat

Analýzu lze prezentovat slovem (v případě kvalitativního výzkumu), například "nenalezeno" nebo "pod rozsah změn". V prvním případě to znamená, že infekce nebyla zjištěna. Ve druhé - že virus je přítomen, ale v malém množství. Tato situace vyžaduje přezkoumání.

Virová zátěž je určena množstvím infekční RNA a je označena jako ME / ml nebo kopie / ml.

Normální ukazatel (norma) kvantitativní analýzy hepatitidy C je rozsah od 1,8x102 do 2,4x107 IU / ml.

Koncentrace viru v krvi může být:

  • nízké: od 600 IU / ml do 3x104 / ml;
  • průměr: od 3x10 4 IU / ml do 8x10 5 IU / ml;
  • vysoká: více než 8x10 5 IU / ml.

Kvantitativní a kvalitativní analýza PCR pro hepatitidu umožňuje určit přítomnost viru v těle a úroveň jeho koncentrace. Polirazmernaya řetězová reakce schopen diagnostikovat nemoc v raném stádiu, ale je nutné, aby pacientům co nejdříve léčit ve zdravotnických zařízeních pro pomoc a přísně dodržovat doporučení ošetřujícího lékaře.

Kvantitativní analýza PCR pro hepatitidu C

Existuje mnoho podtypů HCV, a proto není vždy možné vybrat efektivní antivirové léky a dosáhnout požadovaných výsledků léčby. Rozmanitost patogenů je způsobena jejich schopností změnit svou strukturu, tj. Mutovat. Výsledkem je, že imunita nemá čas na to, aby vytvořila silnou reakci proti patogennímu agens a léky jsou neúčinné.

Často je hepatitida diagnostikována ve fázi cirhózy, která předurčuje pozdější detekci onemocnění kvůli nedostatku klinických příznaků. Pouze laboratorním vyšetřením lze detekovat HCV v inkubačním období.

Kvantitativní analýza hepatitidy C umožňuje nejen zjištění přítomnosti patogenu v krvi, ale také výpočet koncentrace.

Doporučení pro přípravu analýzy

Specifická příprava pro laboratorní diagnostiku není nutná. Stačí, abyste dodrželi následující doporučení:

  1. kvantitativní analýza se provádí na prázdném žaludku s posledním jídlem - 8 hodin před vzorkem krve;
  2. po dva dny by měl být opuštěný alkohol a "těžké" pokrmy;
  3. Léčivé přípravky, které pacient užívá, mají zvláštní význam. Mohou ovlivnit výsledek studie, takže by o nich lékař měl vědět.

Také těžké fyzické námahy a fyzioterapeutické postupy v předvečer odběru vzorků krve nejsou žádoucí. Chcete-li dešifrovat kvantitativní analýzu hepatitidy C, se ukázalo jako spolehlivé, nezapomínejte na výše uvedené doporučení.

Často pacient obdrží výsledek analýzy za den. Cena testu pro stanovení koncentrace patogenu v krvi závisí na laboratoři a kvalitě činidel a může dosáhnout 4 000 rublů.

Laboratorní diagnostika hepatitidy C

Mezi primární diagnostické metody patří metoda ELISA nebo jiný enzymatický imunosorbentní test. Je určen k detekci specifických protilátek proti HCV. Jeho účinnost dosahuje 95%. Pokud přepis studie přinese pozitivní výsledek, je vhodné domnívat se, že přítomnost činidla v krvi.

Je třeba poznamenat, že polovina testovaných osob s "+" testem v průběhu další diagnostiky nezjistí virovou látku v krvi. ELISA v tomto případě indikuje předchozí kontakt s HCV v minulosti, což potvrzují cirkulující protilátky.

Přesnější studií je polymerázová řetězová reakce nebo PCR. Umožňuje stanovit koncentraci RNA patogenu v krvi. Po objevení genetické sady viru v biologickém materiálu doktor potvrzuje hepatitidu C.

PCR je určena pacientovi k ověření diagnózy. Umožňuje identifikovat RNA ve stadiu, kdy protilátky ještě nejsou k dispozici. Existuje několik typů genetických studií:

  1. kvantitativní analýza PCR pro hepatitidu C, která nejen potvrzuje přítomnost patogenu v krvi, ale také poskytuje informace o jeho koncentraci;
  2. kvalita - potvrzuje infekci;
  3. genotypizace - umožňuje určit genotyp patogenního činidla a vybrat nejúčinnější léky proti němu.

Polymerázová řetězová reakce

Jak již bylo řečeno, existuje několik typů laboratorního výzkumu:

  • kvalitativní analýza - indikuje přítomnost patogenního činidla v krvi. Tento typ diagnózy má určitou "úroveň odpovědi", takže není vždy spolehlivá. Aby bylo možné správně dešifrovat výsledky a získat skutečné ukazatele, doporučuje se pro studii použít testovací systém s citlivostí nejméně 50 IU / ml. Norma analýzy je "negativní odpověď" nebo "virus není detekován." To naznačuje nedostatek genetické sady patogenů v testovaném materiálu. Pokud byl výsledek pozitivní, je nutné provést další vyšetření pacienta;
  • kvantitativní analýza PCR pro hepatitidu C určuje virovou zátěž, tj. koncentraci patogenní látky v krvi. Výsledek studie ukazuje počet jednotek RNA ve fixním objemu biologické tekutiny;

Vírusová zátěž je počet infekční RNA v jednom mililitru krve výzkumníka. Jednotky měření jsou ME / ml, ale některé laboratoře určují "kopie / ml", přičemž uvádějí políčko standardní analýzy pro porovnání a vyhodnocení výsledků.

  • genotypizace. Vzhledem ke schopnosti patogenu měnit výběr účinných antivirových léků na terapii by měl být založen na jeho genotypu. Závisí to nejen na výsledku, ale také na délce trvání léčby. Takže HCV 1 hepatitida vyžaduje léky po dobu jednoho roku, ale pouze 60% případů vykazuje pozitivní dynamiku. Co se týče druhého a třetího genotypu, jsou méně odolné vůči působení antivirových činidel, a proto účinnost terapie přesahuje 85%. Při získání takového výsledku výzkumu - "virus není napsán", je vhodné domnívat se, že přítomnost činidla, která není rozpoznána standardními testovacími systémy.

Indikace pro analýzu

Výklad kvantitativní analýzy hepatitidy C je nezbytný pro:

  1. další vyšetření pacienta, kdy byly pomocí ELISA detekovány protilátky proti HCV;
  2. potvrzení diagnózy;
  3. stanovení virové zátěže v případě smíšené infekce, pokud je osoba infikována několika druhy patogenů;
  4. stanovení léčebné taktiky (výběr antivirových léků, jejich nahrazení nebo dokončení terapie);
  5. posoudit dynamiku progrese onemocnění, stejně jako účinnost léků;
  6. stanovení stupně patologie (akutní, chronická).

PCR má následující výhody:

  1. dobrá citlivost, díky čemuž je možné počítat i malé množství viru;
  2. stanovení samotného patogenu (RNA), ne antigeny;
  3. specifičnost metody - vytvoření specifického druhu patogenního činidla;
  4. rychlost získávání výsledků, protože pro analýzu nevyžaduje kultivaci plodin na živném médiu. Odpověď je připravena za 5 hodin;
  5. univerzálnost - umožňuje identifikaci genetické sady různých patogenů, jak RNA, tak DNA (hepatitida B);
  6. detekce latentní infekce.

Laboratorní test pomáhá potvrdit diagnózu a je nedílnou součástí komplexního vyšetření (analýza klinických příznaků, výsledků ELISA a biochemie).

Navíc PCR je široce používán v alergologii, genetice, stejně jako při zjišťování otcovství.

Dekódování kvantitativní analýzy viru hepatitidy C

Hodnocení výsledků laboratorní diagnostiky provádí lékař porovnáním získaných údajů s normou.

Pomocí diagnostiky PCR

Polymerázová řetězová reakce (PCR) v molekulární biologii se nazývá experimentální metoda detekce virů. Umožňuje významně zvýšit koncentraci určitých fragmentů nukleové kyseliny (DNA) ve vzorcích biologického materiálu, což umožňuje určit (rozpoznat) a počítat je.

Analýza se provádí následovně. Genetický materiál (vzorek krve), který potenciálně může obsahovat požadovaný gen, se zavede do zkumavky. Tam jsou také umístěny primery - chemicky syntetizované malé délky požadovaného genu.

Do nádoby je také přidána DNA nebo RNA polymeráza, která je schopna vytvořit řetězec nukleové kyseliny, který je zcela identický s původním řetězcem. Sada čtyř volných nukleotidů, speciální stavební materiál pro RNA nebo DNA, z nichž jedna obsahuje radioaktivní částice fosforu, se také zavádí do výsledné kompozice.

Výsledná směs se zahřeje na teplotu 95 až 96 ° C, kvůli níž se obě spirály DNA, které se v obvyklém stavu překrývají, rozplývají. Poté se preparát ochladí, v tomto okamžiku se primery připojují k požadované oblasti virového genomu, aniž by RNA (nebo DNA) znovu vytvořila dvojitou šroubovice.

Během chlazení polymeráza vyhledává volný řetězec nukleotidů. Pro fungování tohoto enzymu je nutný jediný řetězec nukleotidů. Vzhledem k tomu, že polymeráza klouže podél řetězce DNA (jako prsten pomocí lana), nemůže pracovat na dvojité šroubovice.

Poté se provádí opakovaný cyklus zahřívání, díky kterému jsou nukleotidové řetězce odděleny. Pro každý z těchto cyklů PCR se množství požadovaného genu hepatitidy ve vzorku zvyšuje v geometrické progresi a zbytek genetického materiálu se produkuje lineárně.

Po čištění roztoku nukleotidových zbytků a oddělení DNA řetězců parametrem molekulové hmotnosti od elektroforézy je snadné určit, zda požadovaný gen existuje ve zkušebním vzorku nebo ne.

Výhody PCR

Laboratorní studie používající metodu PCR umožňuje získat ještě více informací než jednoduše přítomnost RNA viru. Při stanovení parametru úrovně radioaktivního záření je možné určit, jaké množství genetického materiálu bylo původně obsaženo ve studovaném vzorku. V případě hepatitidy určit míru virové zátěže.

Další výhodou této metody je velmi vysoká citlivost CR reakce. Je mnohem vyšší než klasické metody detekce virů. V ideálním případě pro identifikaci požadovaného genu je pro PCR dostatečný pouze jeden virus ve vzorku.

Navíc PCR je zcela specifická. Jeho primery jsou vytvořeny tak, aby plně odpovídaly jedinečným částem požadovaných genů, které nemá žádná jiná sekvence. Obě otisky prstů jsou jedinečné a v každém genu existují jedinečné sekvence nukleotidů.

Kvalitativní analýza PCR

Kvalitativní analýza pouze odhaluje přítomnost viru v krvi. Tento test by měl být proveden u všech pacientů, u kterých bylo zjištěno, že mají v krvi protilátky proti hepatitidě C. Výsledkem může být pouze jedna ze dvou hodnot: "zjištěna" nebo "nebyla zjištěna". U zdravého člověka by norma (referenční hodnota) neměla být "zjištěna".

Existuje také speciální interpretace takových výsledků provedeného kvalitativního výzkumu:

  • Výsledek je "objeven". To znamená, že ve vzorku biologického materiálu, se kterým bylo nalezeno RNA fragmentu, který je specifický pro viru hepatitidy C V důsledku toho je skutečnost, že u pacienta s infekci virem hepatitidy B s C-li výsledek kvalitativní PCR je „objevil“, znamená to, že virus opakování a v tomto okamžiku infikuje nové jaterní buňky v těle.
  • Výsledek je "nezjištěn". Takové rozhodnutí ukazuje, že ve vzorku biologického materiálu získaný fragment RNA není v laboratoři, která je specifická pro HCV RNA buď stejné koncentraci patogenu infekce ve vzorku byla pod hranicí citlivosti testu detekován.

V akutní fázi RNA viru hepatitidy C mohou kvalitativní studie s použitím PCR techniky odhalit po 1-2 týdnech bezprostředně po infekci těla, tj. Dlouho před vznikem protilátek proti samotné hepatitidě.

Nespolehlivé výsledky analýz takového šetření lze získat u:

  • kontaminovaný biomateriál;
  • přítomnost heparinu v krvi pacienta;
  • přítomnost ve vzorku chemických nebo bílkovinných látek (inhibitorů), které ovlivňují různé složky PCR.

Pro kvalitativní analýzu PCR není nutná zvláštní příprava pacienta pro studium. Venózní krev se používá jako materiál.

Hodnocení výsledků

Kvalitativní testy PCR mají určitý stupeň citlivosti a v závislosti na přesnosti výzkumu a úroveň vybavení v laboratoři se může pohybovat mezi 10 a 500 IU / ml.

To znamená, že pokud je virus ve vzorku krve přítomen ve velmi nízké koncentraci (nižší než prahová citlivost daného laboratoře), pacienta pacienta lze určit jako "nezjištěný". Z tohoto důvodu je při provádění kvalitativní analýzy PCR s nízkou úrovní viremie (nízká koncentrace viru) například u pacientů podstupujících antivirovou terapii velmi důležité znát práh citlivosti tohoto diagnostického systému.

Varianty diagnostických systémů

Pro kontrolu virologické odpovědi se doporučuje antivirová léčba používat diagnostické systémy s prahem citlivosti minimálně 50 IU / ml. Tato kritéria jsou splněny, například: analyzátory COBAS Ampicolor HCV test (c přesnost 50 IU / ml) a RealBest HCV RNA (s citlivostí 15 IU / ml).

Podle doporučení WHO pro vytvoření konečné diagnóze hepatitidy C, musí být založeno pouze na základě trojitého detekce RNA viru ve vzorcích séra od pacienta s žádnými jinými druhy hepatitidy markeru.

Kromě metod PCR se pro detekci HCV RNA u pacientů používá také studie TMA (metoda transkripční amplifikace). Má nejlepší citlivost (5 až 10 IU / ml), ale u nás tato metoda testování ještě není příliš častá.

Rozsah zjištěných změn virů

Toto kvalitativní stanovení přítomnosti RNA viru hepatitidy C v séru umožňuje určit několik genotypů tohoto viru. V současné době vede věda více než šest genotypů tohoto viru, stejně jako asi 10 podtypů onemocnění.

Vírusy 1, 2, 3 genotypů jsou běžné v naší zemi. Laboratoře mohou identifikovat následující genotypy: 1a a 1b, 2a, 2b a 2c, a 3, 4, 5a a 6 bez ohledu na podtypy. Pro všechny modifikace viru je specificita detekce 100%.

Kvantitativní analýza PCR

Pomocí kvantitativního testu PCR se určí koncentrace viru hepatitidy ve vzorcích krve (virové zátěž). Tento test viremie (koncentrace viru) umožňuje určit počet jednotek specifického genetického materiálu (nejvíce virové RNA), který je detekován v určité míře. V tomto případě určete jeho koncentraci v 1 ml, což odpovídá 1 cu. viz

Kvantitativní parametry analýzy jsou vyjádřeny na obrázcích pro toto použití jako jednotky měřicích mezinárodních jednotek (IU) na mililitr (ml), označené jako ME / ml. Nyní v některých laboratořích může být množství viru stanoveno v jiných jednotkách: počet kopií na ml je označen jako kopie / ml.

  • Na hepatitidě C se taková kvantitativní analýza PCR provádí těsně před zahájením léčby. Pak na 1., 4., 12. a 24. týdnu. Hodnocení v 12. týdnu je orientační, umožňuje určit účinnost terapie.
  • Příprava na analýzu. Pro kvantitativní analýzu PCR není nutná zvláštní příprava pacienta pro studii. Půl hodiny před odběrem byste neměli kouřit. Venózní krev se používá jako laboratorní materiál.

Hodnocení výsledků

U různých laboratorních testovacích systémů existují pro tento ukazatel různé přepočítací koeficienty v IU / ml. V průměru se používá konverzní parametr, ve kterém jsou 4 kopie / ml = 1 IU / ml. To znamená, že pokud laboratoř dává výsledek analýzy PCR 2,4 * 10 6 kopií / ml, pak by měl být tento parametr rozdělen na 4 a dostaneme 6 x 105 5 IU / ml.

Vysoká zátěžová hladina 800 000 IU / ml je považována za vysokou, což je přibližně ekvivalentní indexu 3 000 000 kopií / ml. Nízkou viremii podle některých autorů odpovídají parametry kvantitativní PCR nižší než 400 000 IU / ml.

V důsledku kvantitativního testu nelze konečné výsledky doručit ve formě digitální hodnoty, ale: "pod měřicím rozsahem" nebo "nezjištěným".

  • Hodnocení: "pod měřicí rozsah". To naznačuje, že kvantitativní test nedokázal detekovat virovou RNA viru hepatitidy C, ale samotný virus je přítomen v těle ve velmi malých koncentracích. To je indikováno dodatečným kvalitativním testem, který potvrzuje přítomnost viru.
  • Hodnocení: "nezjištěno". Tento výsledek naznačuje, že kvantitativní test nezjistil virus ve vzorku RNA.

Parametr virové zátěže určuje nejprve stupeň infekčnosti onemocnění, úroveň "infekčnosti" pacienta. Čím vyšší je koncentrace viru pacienta, tím větší je pravděpodobnost jeho přenosu jiným lidem. Například při sexu se špatnou osobou nebo vertikální cestou. Takový kvantitativní indikátor také pomáhá určit účinnost léčby pacienta.

Provádění kvantitativní analýzy PCC je důležité pro antivirovou terapii, vyhodnocení jejího úspěchu a plánování trvání kurzu. Takže s rychlou reakcí těla na léčbu a nízkým stupněm viremie může být trvání terapie sníženo.

Při pomalém snížení kvantitativního parametru PCR by měla být antivirová léčba prodloužena nebo upravena. Pokud je úroveň virové zátěže nízká, pak je to příznivý faktor terapie, je-li vysoká, pak je použitá metoda léčby neúčinná a drogy nebo metody jejich užívání by měly být změněny.

Kvalitativní a kvantitativní analýza PCR pro hepatitidu C: negativní, pozitivní, dekódování

Hepatitida C - virová onemocnění jater způsobené HCV Flavivirus, v němž struktura obsahuje molekulu ribonukleové kyseliny (RNA) (z viru hepatitidy anglicky C.). RNA nese genetický kód viru. Jeho přítomnost umožňuje analýzu PCR pro hepatitidu C.

HCV je nebezpečí pro člověka a to tzv sérologická okno (doba mezi infekcí a vzhledu reakce imunitního systému), může být dostatečně dlouhý - od několika týdnů do šesti měsíců.

To nezjistí infekci a začne léčbu včas.

V závislosti na individuálních vlastnostech hostitelského těla se HCV může projevit v akutní formě a může se také vyvinout jako chronické onemocnění, které bude vyžadovat dlouhodobou a nákladnou léčbu. Při detekci protilátek proti HCV se provádí řada laboratorních testů, včetně PCR pro hepatitidu C. Tento test se provádí u všech lidí, v jejichž krvi byly nalezeny protilátky proti HCV.

Co je analýza PCR?

Laboratorní analýza PCR pro hepatitidu C - studie biologického materiálu k identifikaci přítomnosti flavaviru.

Polymerázová řetězová reakce (jak je zkratka dešifrována) ukazuje kvantitativní hodnotu virového poškození organismu, jeho kvalitativní charakteristiky a také genotyp viru obsahujícího RNA.

Na základě jejich základů a na základě dalších analýz je určen způsob a doba trvání léčby, stejně jako epidemiologický faktor (riziko přenosu na jiný nosič).

Co je analýza RNA pro hepatitidu C?

PCR s hepatitidou C se také nazývá analýza RNA (HCV RNA), protože není známa. Flavavirus obsahuje částice RNA s velikostí virionu 30-60 nm. Jednou z charakteristik tohoto mikroorganismu je vysoká tendence k mutacím.

Každý z poddruhů (genotypů) viru má odlišný odpor, který způsobuje různé metody léčby a povahu další prognózy pro pacienta.

Biologický materiál (žilní krve) je řešeno půst a obvykle testovány PCR v reálném čase (vysoce citlivé v reálném čase, diagnostika ke stanovení dolní meze 15 IU / ml za použití automatického režimu uzavřený systém).

Existují další testy, například COBAS AMPLICOR s citlivostí 50-100 IU / ml. U každé laboratorní studie je důležitá prahová citlivost, tj. schopnost činidla detekovat minimální koncentraci viru v biologickém materiálu.

Druhy analýzy hepatitidy C pomocí metody PCR

PCR pro hepatitidu C zahrnuje tři důležité složky:

  • kvalitativní analýza;
  • kvantitativní analýza;
  • genotypizace.

Tyto testy mohou určit povahu viremie, stejně jako genetické znaky patogenu. V závislosti na citlivosti diagnostického systému se test provádí jednou a někdy se provede druhý test s citlivějším činidlem pro potvrzení nebo vylepšení výsledků.

Vysoce kvalitní PCR na hepatitidě C

Analýza PCR pro kvalitu hepatitidy C je dalším běžným názvem pro test polymerázové řetězové reakce. Standardní citlivost testu, která umožňuje detekci přítomnosti virové léze, je v rozmezí 10-500 IU / ml.

Negativní analýza PCR pro hepatitidu C ukazuje, že koncentrace viru v krvi pacienta je pod prahem vnímavosti diagnostického systému.

Pokud kvalitativní PCR poskytla odpověď "nezjištěnou", je pro následnou léčbu důležité znát práh citlivosti činidla.

Bílkovinné frakce na flavavirus se objevují mnohem později.

Kvantitativní PCR s hepatitidou C

PCR kvantitativní hepatitida C je indikátorem virové zátěže, která odráží hladinu koncentrace RNA z FLA v těle. Jedná se o ukazatel, který ukazuje, kolik fragmentů virové RNA je obsaženo na jeden kubický centimetr krve. PCR hepatitidy výsledků Kvantitativní zkouška C RNA v konvenčním systému jsou uvedeny v mezinárodních jednotkách na ml (IU / ml), a mohou být zaznamenány v různými způsoby, například - 1,7 ppm nebo 1,700,000 IU / ml.

Kvantitativní PCR diagnostika hepatitidy C se podává pacientům před zahájením antivirové terapie a ve 12. týdnu léčby k vyhodnocení výsledků vybraného způsobu boje proti HCV. Virové zatížení umožňuje identifikovat tři důležité ukazatele onemocnění:

  • infekčnost, tj. stupeň rizika přenosu viru z jednoho nosiče na jiný (čím vyšší je koncentrace RNA z FLA, tím vyšší je pravděpodobnost infekce jiné osoby, například během sexuálního kontaktu);
  • metoda a účinnost léčby;
  • trvání a prognóze antivirové terapie (čím vyšší je virální zátěž, tím trvá léčba delší).

Kvantitativní PCR diagnostika hepatitidy C závisí na typu laboratorního testu a prahu jeho citlivosti. Dolní hranice normy je obvykle považována za až 600 000 IU / ml, průměrná hodnota je v rozmezí 600 000-700 000 IU / ml. Výsledky z 800 000 IU / ml a výše jsou považovány za vysoké hladiny viru obsahujícího RNA.

Genotypizace

S ohledem na vysokou mutační aktivitu HCV v přírodě je důležité stanovit ve fázi testování, který genotyp viru je v krvi pacienta. Celkově je na planetě zaznamenáno 11 genotypů viru hepatitidy C, které zahrnují mnoho poddruhů. Na území Ruské federace jsou 1, 2 a 3 běžné.

PCR RNA hepatitidy C spolu s genotypizací je velmi důležitou složkou analýzy, protože umožňuje lékaři určit rezistenci (rezistenci) viru, vybrat vhodné léky a předepsat průběh léčby.

Genotypování také umožňuje nepřímo určit stav jater. Například genotyp 3 HCV je často doprovázen steatózou, v níž se tuk akumuluje v buňkách těla.

Krevní test PCR pro hepatitidu C by měl poskytnout číslo, které určuje genotyp. V laboratorních odpovědích může být napsáno "ne psáno" - a to znamená, že v lidské krvi je virus, který není určen testovacím systémem. To může znamenat, že genotyp není pro danou zeměpisnou oblast netypický. V tomto případě je nutné znovu provést analýzu s vyšší citlivostí diagnostického systému.

Dekódování analýzy PCR pro hepatitidu C

Test PCR pro hepatitidu C lze kvantifikovat na základě výše uvedených údajů. Při obdržení výsledků laboratorních testů jsou obvykle uvedeny následující údaje:

  • "Nalezeno" / "nebylo nalezeno" (vysoce kvalitní PCR pro hepatitidu C);
  • množství frakcí obsahujících RNA, například 831,680 IU / ml (kvantitativní PCR test);
  • číslo, které určuje HCV genotyp, například - 1, 2, 3, 4;
  • název testu je nejčastěji v reálném čase.

Nejdůležitější v rozluštění analýzy PCR pro hepatitidu C je druhá položka, která ukazuje virovou zátěž určující prognózu, způsob a trvání léčby.

Pokud je analýza PCR pro hepatitidu C negativní a pozitivní ELISA - co to znamená?

Pro dešifrování laboratorních testů je důležité kontaktovat odborníka na hepatologii nebo infekční onemocnění, který vysvětlí informace získané v souladu s typem diagnostického systému a prahem jeho citlivosti. V lékařské praxi je mnoho údajů o krevních testech, které mohou vést člověka bez lékařského vzdělání ke zmatku.

Například, v případě, že test na HCV PCR negativní a pozitivní ELISA, může to znamenat, že v tomto okamžiku v krvi pacienta není HCV, ale před tím, než trpěl akutní formy hepatitidy C. Předpokládá se, že pozitivní-linked immunosorbent assay (ELISA), ukazuje, že v krvi se objevují protilátky po vpádu viru v minulosti. Ale v moderní lékařské praxi ELISA analýza není dostatečně spolehlivé a často dává neobvyklé výsledky, takže lékaři použít jako primární screening. Při diagnostice onemocnění se specialisté řídí právě pomocí PCR testů.

Užitečné video

V následujícím videu je velmi podrobné a zajímavé říci, co je základem metody PCR, jak se provádí analýza:

Závěr

Venózní krev se obvykle užívá k analýze PCR s hepatitidou C. Nejčastěji dochází k dvojímu odběru vzorků biologického materiálu - ELISA a přímo k testu PCR. Pro správné výsledky zkoušek je nutné dodržovat hlavní pravidla laboratorního odběru vzorků biologického materiálu:

  • krev pro analýzu se podává ráno na prázdném žaludku;
  • mezi jídlem a krví by měla trvat nejméně 8 hodin;
  • Před provedením testu byste měli také vyloučit alkohol a smažené potraviny;
  • Během dne, než předáte krev, musíte se vyvarovat vysoké fyzické námahy.

Výsledky vyšetření krve jsou obvykle připraveny následující den.

Studie PCR pro hepatitidu C: typy, indikace, přepis

Virová hepatitida C je vážné onemocnění, které se objevuje při poškození jater. U osmdesáti procent pacientů přechází do chronické formy. Vírus se množí v jaterních buňkách - hepatocytech - a způsobuje jejich smrt. Mrtvé tkáně jsou nahrazeny ložisky pojivové tkáně, fibróza se vyvíjí.

S rozvojem fibrózy jater, je schopen plnit svou funkci, začíná cirhóza, což je nebezpečné pro jeho komplikací: zvyšující se tlak v portální žíle, gastrointestinální krvácení, poruchy srážlivosti krve, mentální změny kvůli poškození mozku jádra toxických produktů.

Příčinou onemocnění je infekce virem z rodiny Flaviviridae, což je typ viru RNA. To znamená, že genetický materiál, kterým jsou syntetizovány proteiny patogenu, je kódován molekulou ribonukleové kyseliny. Infekce nastává skrze krev, sexuálně a od těhotné ženy až po plod. Bohužel mezi infekcí a počátkem produkce protilátek může proběhnout poměrně velká doba - od dvou týdnů do šesti měsíců. To neumožňuje stanovení infekce metodou enzymového imunoanalýzy a zahájením léčby v časných stádiích.

Co je analýza PCR?

PCR je metoda molekulární analýzy, která umožňuje detekci genetického materiálu patogenu již v prvním týdnu po infekci za použití polymerázové řetězové reakce. Studie má vysokou specificitu, přesnost a umožňuje nejen stanovit přítomnost nebo nepřítomnost viru, ale i jeho koncentraci a genotyp.

Pro studii si vezměte pacientovu krev, v níž se může potenciálně nalézt RNA viru. Krev se přidá primerů - uměle syntetizované krátké délce části požadovaného genu a RNA polymerázu - speciální enzym, který násobí množství genetického materiálu patogenu. Pomocí speciálního přístroje se provádí několik cyklů vytápění a chlazení. Materiál je pak analyzován a porovnán se známými virovými geny, na základě kterých se dospěje k závěru o přítomnosti nebo nepřítomnosti infekce.

Typy PCR analýzy pro hepatitidu C

Existují tři typy analýzy PCR:

  1. Kvalitativní analýza PCR. První fáze studie. Umožňuje vám identifikovat genetický materiál viru v krvi.

  • Kvantitativní analýza PCR. Umožňuje určení virové zátěže - koncentrace genetického materiálu patogenu v jednom mililitru krve. Tato studie se provádí před zahájením léčby a poté v první, čtvrté, dvanácté a (pokud je kurz dlouhý) ve dvacátém čtvrtém týdnu léčby, aby se vyhodnotila jeho účinnost.

  • Genotypizace. Příčinný faktor hepatitidy C se často a rychle mění. Na planetě bylo nalezeno sedm variant genotypu tohoto viru. V Rusku jsou společné první, druhé a třetí typy. Každý z genotypů má jinou rezistenci k terapii, například účinnost léčby prvního typu je šedesát procent a pro druhý a třetí dosahuje osmdesát pět. Proto, aby bylo možné vybrat vhodná léčiva a předepsat dostatečnou dobu trvání léčby, je nutné přesně určit, jaký typ viru je pacient infikován.
  • Indikace pro analýzu PCR pro hepatitidu C

    Studie PCR je předepsána v následujících případech:

    • kontakt s nemocnou, která by mohla vést k infekci;
    • pozitivní imunoanalýza spojená s enzymem;
    • příznaky jaterní cirhózy: změny velikosti jater, zvětšení sleziny, výskyt podkožního žilního plexu na břiše;
    • výskyt příznaků poškození jater: bolesti na pravé straně břicha, zožnění kůže;
    • zvýšená aktivita ALT a AST v biochemické analýze krve;
    • před zahájením léčby k určení virové zátěže;
    • sledovat účinnost antivirové léčby;
    • po dokončení léčby k monitorování relapsu;
    • v přítomnosti diagnostikované hepatitidy B, aby se vyloučilo smíšené poškození jater.

    Dekódování studie PCR pro hepatitidu C

    Dekódování analýzy PCR a enzymového imunoanalýzy pro hepatitidu C by mělo být řešeno specialistou na hepatologii nebo na infekční nemoci. Analýza výsledků PCR je nezbytná v kombinaci s biochemickým vyšetřením krve, biopsií a ultrazvukem. Pouze kvalifikovaný lékař bude schopen analyzovat výsledky studií a na základě nich předepsat správnou léčbu.

    Dekódování kvalitativní analýzy.

    Genetický materiál patogenu byl nalezen v analyzovaném biologickém materiálu. Infekce je potvrzena.

    Neexistuje žádná infekce nebo množství RNA patogenu je pod hranicí citlivosti.

    Dekódování kvantitativní analýzy.

    Normální postava pro zdravé lidi. To znamená, že v testovaném materiálu není přítomna žádná RNA hepatitidy C nebo její koncentrace je pod prahem citlivosti studie.

    Koncentrace RNA je nižší než rozsah kvantifikace. Takové výsledky jsou interpretovány velmi opatrně, korelují je s údaji jiných studií, často provádějí druhou studii.

    Úroveň virové zátěže v dané koncentraci je považována za nízkou. Obvykle snížení množství viru znamená, že terapie je úspěšná.

    Více než 8 * 10 ^ 5 IU / ml

    Úroveň virové zátěže v dané koncentraci je považována za vysokou.

    Více než 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

    Množství RNA je nad horní hranicí rozsahu kvantifikace. Závěry o stupni virové zátěže s tímto výsledkem nejsou možné. Obvykle se v takových případech opakuje test s ředěním vzorku krve.

    Dekódování genotypizace.

    Byla detekována RNA specifického genotypu

    V biomateriálu je detekován virus hepatitidy C specifického genotypu a podtypu. Výsledek je kódován římskými číslicemi a latinkou, například - 1a, 2b. Existuje sedm genotypů a šedesát sedm podtypů, ale v Rusku existují pouze tři první typy.

    RNA virové hepatitidy C byla detekována

    V krvi se RNA nachází v Rusku vzácným genotypem, který nelze přičíst prvnímu, druhému nebo třetímu typu. Je zapotřebí více výzkumu.

    Tento výsledek naznačuje, že pacient je zdravý, nebo že úroveň RNA patogenu je příliš malá.

    Situace je možná, pokud je analýza PCR pro hepatitidu C negativní a enzymový imunotest detekuje protilátky proti viru. To znamená, že pacient měl v akutní formě hepatitidu C a uzdravil se. Přibližně dvacet případů infekce vede k spontánnímu vyléčení, pokud tělo pacienta vykazuje dostatečnou odolnost proti infekci.

    Navzdory skutečnosti, že PCR je velmi přesná analýza, její výsledky mohou být zkresleny v následujících situacích:

    • krev byla transportována do laboratoře za nevhodných podmínek, teplotní režim byl porušen;
    • byl vzorek biomateriálu kontaminován;
    • v krvi byly zbytky stop heparinu a dalších antikoagulancií;
    • Ve zkoumané látce byly inhibitory - látky, které zpomalují nebo zastavují polymerázovou řetězovou reakci.

    Výhody PCR v porovnání s jinými metodami

    1. Diagnóza v počátečních fázích. PCR detekuje genetický materiál vyvolávajícího onemocnění. Pomocí analýzy imunofluorescence lze stanovit pouze imunoglobuliny - látky, které organismus produkuje v reakci na infekci. V případě infekce způsobené hepatitidou C může být interval mezi infekcí a nástupem imunitní odpovědi několik týdnů a měsíců, kdy bude ELISA neúčinná. PCR poskytne odpověď už v prvním týdnu po infekci.

  • Nízká pravděpodobnost chyby. Ve studovaném materiálu se určuje genetický materiál, který je charakteristický pouze pro jeden typ patogenů. To vám umožňuje vyloučit falešné výsledky. Při ELISA jsou možné chyby, protože stejný druh protilátek lze uvolnit proti různým virům - takové protilátky se nazývají zkřížené reakce.

  • Vysoká citlivost. PCR může detekovat RNA patogenu i v minimálních množstvích. To umožňuje identifikovat skryté infekce.
  • Jak se připravit na dodávku krve pro výzkum PCR

    Pro analýzu PCR se pro hepatitidu C sbírá venózní krev. Obvykle se z pacientovy žíly najednou odeberou dvě části krve: první se odešle pro PCR a druhá pro ELISA. To se provádí, aby bylo možné přesněji posoudit, jak špatně je pacient infikován tímto virem a jak proti němu bojuje imunita.

    Obvykle jsou pro pacienta vyžadována následující pravidla:

    • vyšetření krve se odebere ráno;
    • přestávka mezi posledním jídlem a dodávkou krve by měla být osm až deset hodin;
    • dva nebo tři dny před analýzou se musíte vzdát smažených a mastných potravin a alkoholu;
    • po dobu čtyřiadvaceti hodin před analýzou by se pacient měl vyhnout fyzické námaze: nemají váhy, nechodí do tělocvičny nebo do bazénu.

    Související Články Hepatitida