Kvalitativní analýza hepatitidy C

Share Tweet Pin it

Zanechat odpověď

Kvalitativní analýza polymerázové řetězové reakce - PCR pro hepatitidu C určuje přítomnost nebo nepřítomnost HCV v těle. V laboratoři se studuje struktura RNA, v níž se virus nachází. Pokud je zjištěn virus C, je nutné podstoupit léčbu, protože zanedbávaná jaterní choroba vede k vážným následkům. Kvalitativní PCR se provádí po zotavení za účelem potvrzení nepřítomnosti protilátek. Jmenován a pro preventivní vyšetření. Při nízké koncentraci patogenu v krvi nemůže PCR (kvalitativní) detekovat nic, protože diagnostický systém má své prahy citlivosti. V případě počátečního stadia onemocnění nebo mírné formy je PCR nakonec diagnostikována pomocí ultrazvuku.

Co je RNA virus?

Termín RNA viru hepatitidy C (nebo RNA viru hepatitidy C) se nazývá samotné onemocnění jater. Virus C se váže na zdravou tělesnou buňku a proniká dovnitř. Časem se šíří po celém těle, je to jen dostat se do krve. Výsledkem je, že patogen proniká játry, spojí se s buňkami a tvrdě pracuje. Hepatální buňky (hepatocyty) pracují pod jeho vlivem, podstupují změny a z tohoto zahynou. Čím delší je virus C v játrech, tím více buněk zemře. Postupně se rozvíjejí nebezpečné nemoci, které vedou ke zhoubné degeneraci a smrti.

Infekce jater s tímto typem viru se nemůže projevit jakýmkoliv způsobem externě. Po mnoho let nebo desítek let se nakažená osoba cítí naprosto zdravá a pouze náhodná vyšetření nejčastěji odhaluje patologii. Při darování krve na hepatitidu se zkoumá část řetězce RNA (ribonukleové kyseliny), která je součástí lidského genu (DNA). Výsledky laboratorního výzkumu by neměly být používány pro sebe-léčbu, protože to je pouze indikátor. Lékař určí přesný obraz a další diagnózu.

Po dokončení: svědectví o studii

Pro potvrzení HCV je přiřazena PCR analýza (polymerázová řetězová reakce). Studie PCR pomáhají najít patogenní materiál ve struktuře RNA a předepisovat účinnou terapii. Jsou jmenováni v následujících případech:

  • identifikace příznaků zánětu jater;
  • screeningové studie prevence;
  • vyšetření osob v kontaktu;
  • diagnóza hepatitidy smíšeného původu (definice hlavního patogenu);
  • Stanovení úrovně aktivity reprodukce viru v chronické formě;
  • cirhóza jater;
  • k určení účinnosti předepsané léčby.
Studie PCR jsou určeny lékařem k určení účinnosti průběhu léčby hepatitidy.

Existuje kvalitativní i kvantitativní analýza PCR. Kvantitativní PCR ukazuje procento RNA s nosiči viru v krvi a kvalitativní PCR indikuje přítomnost nebo nepřítomnost viru. Pozitivní ukazatel kvality (přítomnost hepatitidy C RNA) také vyžaduje kvantitativní studium. Vysoká koncentrace patogenu hepatitidy C je spojena s rizikem přenosu, tj. S kontaminací ostatních. Nízké množství je lépe zacházeno. Množství RNA virů v krvi nesouvisí s intenzitou onemocnění. Analýza PCR se provádí také v případě terapie interferonem, aby se předepsal trvání a složitost průběhu léčby.

Vlastnosti kvalitativní analýzy PCR pro hepatitidu C

Kvalitativní analýza s indexem polymerázové řetězové reakce je přiřazena všem pacientům, kteří mají v krvi protilátky proti hepatitidě C. Kdo se zotavil a získal zpět, měl by být opětovně testován. Doporučuje se předat analýzu hepatitidy B, pak v případě pozitivního závěru a na hepatitidě D. Také kvalitativně analyzovaná reakce by měla být provedena ve spojení s jinými krevními testy. Analýzy ukazují kompletní obraz šíření viru.

Z výsledků testů bude vidět pouze pozitivní test na hepatitidu C nebo negativní, tj. Přítomnost nebo nepřítomnost viru. Pokud je závěr "zjištěn", pak je virus aktivně i nadále aktivní. Označení "nebylo nalezeno" označuje nepřítomnost viru nebo jeho malé množství. S tímto indikátorem bychom měli vzít v úvahu skutečnost, že analytická citlivost diagnostických systémů je odlišná a hepatitida C RNA může být stále v krvi, ale v analýze se nezjistila.

Zvláště citlivá metoda PCR s ultra-hepatitidou C se odhaluje i v nepatrných množstvích. Používá se hybridizační fluorescenční studie, která je mnohonásobně vyšší než standardní PCR systémy. Metoda se používá v několika případech:

  • podezření na skryté formy hepatitidy C;
  • Diagnostika PCR nebyla patogenem potvrzena, ale existují protilátky;
  • v případě využití;
  • identifikovat počáteční stadium infekce.
Zpět na obsah

Vysvětlení analýzy

Konečné rozhodnutí v diagnóze je ovlivněno PCR dekódováním HCV, zejména s ultrametodou. Hlavním nedostatkem tohoto výzkumu je přísné dodržování sterilních podmínek pro vzorek a materiály. Malá odchylka někdy ukazuje nepřesné závěry analytika, komplikuje diagnózu a následnou léčbu. Analýza PCR pro stanovení RNA viru hepatitidy ne vždy ukazuje obraz choroby s důvěrou, někdy jsou připuštěny nepřesnosti v obou směrech.

Při diagnostice viru hepatitidy se doporučuje provést komplexní vyšetření.

Norma indikátorů

Absence JgM protilátek proti RNA ve virové hepatitidě C je považována za normu při analýze polymerázové řetězové reakce. Současně zjištění sérologické analýzy naznačují přítomnost protilátek proti viru C a to je také v mezích normy. Kvalitativní definice neukazuje intenzitu onemocnění, pouze odhaluje příčinný účinek hepatitidy C v RNA. Taková analýza se opakuje po ošetření, aby se potvrdilo skutečné uzdravení.

Odchylky

Pokud jsou přítomny protilátky JgM proti HCV RNA, znamená to rozvoj infekce. Nemoc je akutní nebo chronická, projevuje se v různých fázích. Pokud dojde k poklesu počtu protilátek, bude analýza indikovat dosažení výsledků léčby během regenerace. Existují extrémně vzácné případy falešně pozitivních nálezů v diagnostice. Objevují se u žen během těhotenství a u lidí s jinými infekčními nemocemi.

Pomocí diagnostiky PCR

Polymerázová řetězová reakce (PCR) v molekulární biologii se nazývá experimentální metoda detekce virů. Umožňuje významně zvýšit koncentraci určitých fragmentů nukleové kyseliny (DNA) ve vzorcích biologického materiálu, což umožňuje určit (rozpoznat) a počítat je.

Analýza se provádí následovně. Genetický materiál (vzorek krve), který potenciálně může obsahovat požadovaný gen, se zavede do zkumavky. Tam jsou také umístěny primery - chemicky syntetizované malé délky požadovaného genu.

Do nádoby je také přidána DNA nebo RNA polymeráza, která je schopna vytvořit řetězec nukleové kyseliny, který je zcela identický s původním řetězcem. Sada čtyř volných nukleotidů, speciální stavební materiál pro RNA nebo DNA, z nichž jedna obsahuje radioaktivní částice fosforu, se také zavádí do výsledné kompozice.

Výsledná směs se zahřeje na teplotu 95 až 96 ° C, kvůli níž se obě spirály DNA, které se v obvyklém stavu překrývají, rozplývají. Poté se preparát ochladí, v tomto okamžiku se primery připojují k požadované oblasti virového genomu, aniž by RNA (nebo DNA) znovu vytvořila dvojitou šroubovice.

Během chlazení polymeráza vyhledává volný řetězec nukleotidů. Pro fungování tohoto enzymu je nutný jediný řetězec nukleotidů. Vzhledem k tomu, že polymeráza klouže podél řetězce DNA (jako prsten pomocí lana), nemůže pracovat na dvojité šroubovice.

Poté se provádí opakovaný cyklus zahřívání, díky kterému jsou nukleotidové řetězce odděleny. Pro každý z těchto cyklů PCR se množství požadovaného genu hepatitidy ve vzorku zvyšuje v geometrické progresi a zbytek genetického materiálu se produkuje lineárně.

Po čištění roztoku nukleotidových zbytků a oddělení DNA řetězců parametrem molekulové hmotnosti od elektroforézy je snadné určit, zda požadovaný gen existuje ve zkušebním vzorku nebo ne.

Výhody PCR

Laboratorní studie používající metodu PCR umožňuje získat ještě více informací než jednoduše přítomnost RNA viru. Při stanovení parametru úrovně radioaktivního záření je možné určit, jaké množství genetického materiálu bylo původně obsaženo ve studovaném vzorku. V případě hepatitidy určit míru virové zátěže.

Další výhodou této metody je velmi vysoká citlivost CR reakce. Je mnohem vyšší než klasické metody detekce virů. V ideálním případě pro identifikaci požadovaného genu je pro PCR dostatečný pouze jeden virus ve vzorku.

Navíc PCR je zcela specifická. Jeho primery jsou vytvořeny tak, aby plně odpovídaly jedinečným částem požadovaných genů, které nemá žádná jiná sekvence. Obě otisky prstů jsou jedinečné a v každém genu existují jedinečné sekvence nukleotidů.

Kvalitativní analýza PCR

Kvalitativní analýza pouze odhaluje přítomnost viru v krvi. Tento test by měl být proveden u všech pacientů, u kterých bylo zjištěno, že mají v krvi protilátky proti hepatitidě C. Výsledkem může být pouze jedna ze dvou hodnot: "zjištěna" nebo "nebyla zjištěna". U zdravého člověka by norma (referenční hodnota) neměla být "zjištěna".

Existuje také speciální interpretace takových výsledků provedeného kvalitativního výzkumu:

  • Výsledek je "objeven". To znamená, že ve vzorku biologického materiálu, se kterým bylo nalezeno RNA fragmentu, který je specifický pro viru hepatitidy C V důsledku toho je skutečnost, že u pacienta s infekci virem hepatitidy B s C-li výsledek kvalitativní PCR je „objevil“, znamená to, že virus opakování a v tomto okamžiku infikuje nové jaterní buňky v těle.
  • Výsledek je "nezjištěn". Takové rozhodnutí ukazuje, že ve vzorku biologického materiálu získaný fragment RNA není v laboratoři, která je specifická pro HCV RNA buď stejné koncentraci patogenu infekce ve vzorku byla pod hranicí citlivosti testu detekován.

V akutní fázi RNA viru hepatitidy C mohou kvalitativní studie s použitím PCR techniky odhalit po 1-2 týdnech bezprostředně po infekci těla, tj. Dlouho před vznikem protilátek proti samotné hepatitidě.

Nespolehlivé výsledky analýz takového šetření lze získat u:

  • kontaminovaný biomateriál;
  • přítomnost heparinu v krvi pacienta;
  • přítomnost ve vzorku chemických nebo bílkovinných látek (inhibitorů), které ovlivňují různé složky PCR.

Pro kvalitativní analýzu PCR není nutná zvláštní příprava pacienta pro studium. Venózní krev se používá jako materiál.

Hodnocení výsledků

Kvalitativní testy PCR mají určitý stupeň citlivosti a v závislosti na přesnosti výzkumu a úroveň vybavení v laboratoři se může pohybovat mezi 10 a 500 IU / ml.

To znamená, že pokud je virus ve vzorku krve přítomen ve velmi nízké koncentraci (nižší než prahová citlivost daného laboratoře), pacienta pacienta lze určit jako "nezjištěný". Z tohoto důvodu je při provádění kvalitativní analýzy PCR s nízkou úrovní viremie (nízká koncentrace viru) například u pacientů podstupujících antivirovou terapii velmi důležité znát práh citlivosti tohoto diagnostického systému.

Varianty diagnostických systémů

Pro kontrolu virologické odpovědi se doporučuje antivirová léčba používat diagnostické systémy s prahem citlivosti minimálně 50 IU / ml. Tato kritéria jsou splněny, například: analyzátory COBAS Ampicolor HCV test (c přesnost 50 IU / ml) a RealBest HCV RNA (s citlivostí 15 IU / ml).

Podle doporučení WHO pro vytvoření konečné diagnóze hepatitidy C, musí být založeno pouze na základě trojitého detekce RNA viru ve vzorcích séra od pacienta s žádnými jinými druhy hepatitidy markeru.

Kromě metod PCR se pro detekci HCV RNA u pacientů používá také studie TMA (metoda transkripční amplifikace). Má nejlepší citlivost (5 až 10 IU / ml), ale u nás tato metoda testování ještě není příliš častá.

Rozsah zjištěných změn virů

Toto kvalitativní stanovení přítomnosti RNA viru hepatitidy C v séru umožňuje určit několik genotypů tohoto viru. V současné době vede věda více než šest genotypů tohoto viru, stejně jako asi 10 podtypů onemocnění.

Vírusy 1, 2, 3 genotypů jsou běžné v naší zemi. Laboratoře mohou identifikovat následující genotypy: 1a a 1b, 2a, 2b a 2c, a 3, 4, 5a a 6 bez ohledu na podtypy. Pro všechny modifikace viru je specificita detekce 100%.

Kvantitativní analýza PCR

Pomocí kvantitativního testu PCR se určí koncentrace viru hepatitidy ve vzorcích krve (virové zátěž). Tento test viremie (koncentrace viru) umožňuje určit počet jednotek specifického genetického materiálu (nejvíce virové RNA), který je detekován v určité míře. V tomto případě určete jeho koncentraci v 1 ml, což odpovídá 1 cu. viz

Kvantitativní parametry analýzy jsou vyjádřeny na obrázcích pro toto použití jako jednotky měřicích mezinárodních jednotek (IU) na mililitr (ml), označené jako ME / ml. Nyní v některých laboratořích může být množství viru stanoveno v jiných jednotkách: počet kopií na ml je označen jako kopie / ml.

  • Na hepatitidě C se taková kvantitativní analýza PCR provádí těsně před zahájením léčby. Pak na 1., 4., 12. a 24. týdnu. Hodnocení v 12. týdnu je orientační, umožňuje určit účinnost terapie.
  • Příprava na analýzu. Pro kvantitativní analýzu PCR není nutná zvláštní příprava pacienta pro studii. Půl hodiny před odběrem byste neměli kouřit. Venózní krev se používá jako laboratorní materiál.

Hodnocení výsledků

U různých laboratorních testovacích systémů existují pro tento ukazatel různé přepočítací koeficienty v IU / ml. V průměru se používá konverzní parametr, ve kterém jsou 4 kopie / ml = 1 IU / ml. To znamená, že pokud laboratoř dává výsledek analýzy PCR 2,4 * 10 6 kopií / ml, pak by měl být tento parametr rozdělen na 4 a dostaneme 6 x 105 5 IU / ml.

Vysoká zátěžová hladina 800 000 IU / ml je považována za vysokou, což je přibližně ekvivalentní indexu 3 000 000 kopií / ml. Nízkou viremii podle některých autorů odpovídají parametry kvantitativní PCR nižší než 400 000 IU / ml.

V důsledku kvantitativního testu nelze konečné výsledky doručit ve formě digitální hodnoty, ale: "pod měřicím rozsahem" nebo "nezjištěným".

  • Hodnocení: "pod měřicí rozsah". To naznačuje, že kvantitativní test nedokázal detekovat virovou RNA viru hepatitidy C, ale samotný virus je přítomen v těle ve velmi malých koncentracích. To je indikováno dodatečným kvalitativním testem, který potvrzuje přítomnost viru.
  • Hodnocení: "nezjištěno". Tento výsledek naznačuje, že kvantitativní test nezjistil virus ve vzorku RNA.

Parametr virové zátěže určuje nejprve stupeň infekčnosti onemocnění, úroveň "infekčnosti" pacienta. Čím vyšší je koncentrace viru pacienta, tím větší je pravděpodobnost jeho přenosu jiným lidem. Například při sexu se špatnou osobou nebo vertikální cestou. Takový kvantitativní indikátor také pomáhá určit účinnost léčby pacienta.

Provádění kvantitativní analýzy PCC je důležité pro antivirovou terapii, vyhodnocení jejího úspěchu a plánování trvání kurzu. Takže s rychlou reakcí těla na léčbu a nízkým stupněm viremie může být trvání terapie sníženo.

Při pomalém snížení kvantitativního parametru PCR by měla být antivirová léčba prodloužena nebo upravena. Pokud je úroveň virové zátěže nízká, pak je to příznivý faktor terapie, je-li vysoká, pak je použitá metoda léčby neúčinná a drogy nebo metody jejich užívání by měly být změněny.

Diagnostika pomocí PCR pro hepatitidu C

Ne každý ví, jak se používá diagnostická metoda PCR pro hepatitidu C. Jednou z nejrozšířenějších skupin onemocnění jsou infekční onemocnění trávicího traktu. Nejčastěji trpí žaludkem (vředy), střevem (kolitida, enteritida) a játry (hepatitida).

Na játrech mezi všemi výše uvedenými orgány je přidělen největší zátěž. V těle je důležitá roli jater:

  1. Téměř všechny metabolické reakce se vyskytují v játrech (tady jsou všechny důležité součásti, které tělu umožňují plně fungovat).
  2. Játra jsou hlavním orgánem, který provádí funkci detoxikace. S jeho pomocí (zejména přes žluč) je odstraněno mnoho substrátů, které mohou způsobit intoxikaci a mít vážné následky.

Bohužel mnoho lidí nedodržuje své zdraví kvůli tomu, co játra začnou trpět. Obvykle se rozvíjí hepatitida různých typů etiologie (virové, toxické).

Definice hepatitidy

Vírová hepatitida zaujímá významné místo mezi onemocněními jater. Závažnost průběhu onemocnění, složitost léčby, z nich činí první mezi patologie jiné povahy tohoto orgánu.

Všechny hepatitidy jsou rozděleny na akutní a chronické. Akutní přenos hepatitidy A a B. Mezi chronické na prvním místě je hepatitida C.

Toto onemocnění je způsobeno virem hepatitidy C. Charakteristickým znakem je, že onemocnění může trvat dlouho bez jakýchkoli klinických projevů.

Přenáší se hlavně krví. S průtokem krve vnikne virus do jater, kde se začne množit v buňkách. V důsledku akumulace virionů dochází k destrukci infikovaného hepatocytů. V odezvě začínají produkovat protilátky, které začínají napadat pozůstatky hepatocytů. Kvůli tomu se v průběhu času vytváří bazén proti jaterním buňkám, což zhoršuje průběh onemocnění.

Vzhledem k tomu, že onemocnění je asymptomatické nebo asymptomatické a klinické příznaky se objevují pouze s významným poškozením buněk, vyžaduje toto onemocnění vytvoření diagnostických metod pro identifikaci jejich přítomnosti a přijetí vhodných opatření.

Diagnostika hepatitidy C: kvalitativní a kvantitativní analýzy

V současnosti se pro diagnostiku hepatitidy C používají takové metody, jako je jaterní biopsie, imunogram.

Umožňují přímo stanovit přítomnost postižených hepatocytů (studie biopsie jater) nebo specifické protilátky proti infikovaným buňkám (imunogram). Existuje však metoda, která může spolehlivě určit přítomnost samotného viru. Tato PCR je polymerázová řetězová reakce.

Podstata této metody spočívá ve skutečnosti, že za určitých podmínek dochází k vývoji řetězců RNA. To je způsobeno tím, že fragmenty virové částice jsou v krvi nebo vzorku biopsie. Když jsou v médiu kombinovány s některými molekulami, dochází k syntéze řetězců komplementárních k virové RNA. Při jejich následné analýze a srovnání se známou nukleotidovou sekvencí viru hepatitidy C je možné určit, zda existuje nějaký virus v těle a zda je přítomno poškození jater.

PCR se provádí po detekci specifických protilátek proti viru hepatitidy v krvi. Po provedení testu je výsledek vykreslen - RNA je "detekována" nebo "není detekována". Občas může říkat "nedostatek materiálu" - v tomto případě opakovaná analýza hepatitidy C.

Pokud je počet virových částic je menší, než je požadovaná minimální množství, pak můžeme hovořit o tom, že proti hepatitidě B není přítomen, a minimální množství genetického materiálu by mohla být „zaměnit“, protože mimikry genetického materiálu, nebo některé sekvence nukleotidů, které šance mohl shodovat s tím viru.

  1. PCR negativní výsledky mohou být, ale ve skutečnosti jsou virové částice v krvi, ale jsou tak malé (infekce v poslední době došlo nebo analýza předcházelo dlouhé a intenzivní antivirové terapie), že testovací systém jednoduše nebyl schopen správně stanovit jejich koncentraci. RNA - "nezjištěno".
  2. Pokud má PCR pozitivní výsledek, je v krvi tolik virových částic, že ​​jejich počet překračuje nižší prahovou hodnotu citlivosti testovacího systému. V tomto případě je riziko vzniku infekčního procesu vysoká (nebo je již přítomna v poměrně opomíjené fázi). Obvykle je vysoké množství viru již indikací pro léčbu a následnou transplantaci jater.

Někdy se test může stát falešně pozitivní nebo falešně negativní.

Falešně negativní výsledek hepatitidy PCR se pozoruje, když v reakčním médiu existují některé složky, které inhibují tvorbu kopií virové částice. Z tohoto důvodu není možné získat skutečný obraz o stavu krve, který přispívá k průchodu viru a k progresi onemocnění. Reakce může být ovlivněna přítomností heparinu v krvi (kvůli poklesu relativní viskozity krve). Nesprávná interpretace analýzy je možná také tehdy, pokud nebyly splněny podmínky pro přepravu a skladování zkušebního materiálu.

Falešně pozitivní výsledky, pokud je diagnostikována hepatitida C, se nejčastěji vyskytuje v případě, že je zkumavka nebo pracovní médium kontaminovány. Kromě toho mohou být pozorovány pozitivní výsledky za přítomnosti a virů hepatitidy jiných skupin (kvůli zkřížené reakci).

Kvalitativní analýza PCR pro detekci hepatitidy C

Přítomnost velkého množství kryoglobulinů v krvi přímo ovlivňuje i provádění PCR. Z tohoto důvodu před analýzou hepatitidy C je nezbytné stanovit koncentraci v krvi, aby bylo možné předem odhalit zkreslení výsledku a předejít tomu.

Po provedení specifikovaných testů je zřejmé, zda jsou přítomny částice viru v krvi. Pokud jsou definovány, doporučuje se ihned zahájit antivirovou terapii, aby se zpomalil postup procesu. Na rozdíl od hepatitidy B neexistuje úplná léčba hepatitidy C; tato choroba přechází do latentního stavu a začne proudit pomaleji. Porážka jater je nevyhnutelná. V poslední fázi procesu, kdy játra již nesplňují svou funkci, může být nutné transplantovat.

Léčba se provádí především dvěma léky - interferonem a ribavirinem.

Jejich účinnost při zpomalování procesu léze hepatocytů je prokázána. Mezitím je nutné podávat infúzní terapii, aby se usnadnila práce na játrech.

Všichni pacienti, kteří zaznamenali nárůst počtu virových částic v krvi, jsou nezbytně na účtu hepatologa. Několikrát ročně se doporučuje, aby podstoupili preventivní vyšetření k určení postupu a včasné detekci indikací pro transplantaci. Kromě toho můžete použít i hepatoprotektory, i když názory lékařů se poněkud liší. Někteří věří, že tyto léky mohou zastavit proces a chránit nezhojené hepatocyty; Jiní jsou přesvědčeni, že nemá smysl užívat je a že by měla být prováděna intenzivní antivirová terapie.

Hepatitida C tedy patří do kategorie onemocnění, jejichž odhalení představuje určité potíže. Zlepšení diagnostických metod, stejně jako včasná preventivní vyšetření sníží výskyt této choroby. Je také důležité zabránit této nemoci. Měli byste se pečlivě vyhýbat kontaktu s krví, odmítat užívat drogy, teprve poté bude tato nemoc odstraněna. Hlavním důvodem prevence a léčby je vědomý postoj pacienta k jeho zdraví.

Ptsr nebyl detekován hepatitidou

Analýza PCR pro hepatitidu C je intravenózní odběr vzorků krve za účelem stanovení viru hepatitidy RNA na genetické úrovni v něm. Její název byl odvozen z výzkumné metody.

PCR je polymerázová řetězová reakce, pomocí níž je stanovena přítomnost hepatitidy C v krevním séru. Výsledek může být pozitivní a negativní.

Výhody metody PCR

Tato diagnostická metoda má následující výhody:

  1. Metoda PCR umožňuje určit následující výsledky:
    • přítomnost RNA viru;
    • stupeň radioaktivního záření;
    • počáteční genetická informace;
    • jedinečnost a jedinečnost genetických dat.
  2. Může být použit jakýkoli potřebný klinický materiál:
    • krve;
    • plazma;
    • moč;
    • biologické tekutiny a sekrece;
    • flegma a další.
  3. Umožňuje stanovit v krvi více než jeden mikroorganismus současně, na rozdíl od jiných vzorků.
  4. Získat výsledek do 24 hodin.
  5. Zjednodušené metody skladování a transportu analýz, patogenů jsou určeny i v mrtvém prostředí.
  6. Jedinečnost PCR umožňuje detekci určitých mikroorganismů, které nepodléhají žádnému jinému vzorku.
  7. Vysoký stupeň citlivosti činidel, test je nejpřesnější ve svém druhu.

Vlastnosti kvalitativní analýzy PCR

Kvalitativní test se provádí za účelem zjištění přítomnosti viru v krvi a získání negativního nebo pozitivního výsledku.

Indikace pro tento typ diagnózy je detekce protilátek proti hepatitidě C v těle pacienta.

Možné výstupy:

  • zjištěno (pozitivní);
  • nezjištěno (negativní).

Kvalitativní test není vhodný pro pacienty s velmi nízkým obsahem viru v krvi, takže má určitou citlivost.

Detekce viru hepatitidy C je možná několik týdnů po infekci těla, a to i za nepřítomnosti protilátek proti tomuto patogenu. Tento výsledek naznačuje přítomnost fragmentu RNA charakteristické pro hepatitidu C v těle a vzorku krve.

Pacient je považován za infikovaný daným virem a je vystaven dalšímu šíření patogenních buněk v těle.

Výsledek je "nebyl nalezen"

Tato varianta ukazuje, že ve vzorku biologického materiálu nejsou fragmenty RNA specifické pro hepatitidu C. To je negativní výsledek.

Citlivost testu neumožňuje odhalit nízký obsah fragmentů RNA, takže výsledek "není detekován" není vždy pravděpodobné.

Vlastnosti interpretace výsledků

Hlavním rysem interpretace výsledků je prah citlivosti metody PCR.

Závisí to na následujících ukazatelích:

  • přesnost studie;
  • typ a jakost použitého zařízení.

Je třeba poznamenat, že citlivost se může pohybovat v rozmezí 10-500 IU / ml. Z toho vyplývá, že pokud je v těle studovaného pacienta přítomen virus v koncentraci nižší než 10 IU / ml, výsledky testu ukazují, že výsledek "nebyl zjištěn". To však neznamená, že patogen zcela chybí.

Varianty diagnostických systémů

V současnosti jsou rozlišeny následující verze diagnostických systémů:

  1. Pokud je od pacienta odebrán vzorek krve na antivirovou léčbu, měly by být diagnostické systémy používány s citlivostí nejméně 50 IU / ml. Pro tento účel se používají následující analyzátory:
    • Test Cobas Ampicolor HCV;
    • RealBest RNA HCV.
  2. Pro konečnou diagnózu "hepatitidy C" je nutné detekovat virus RNA ve třech různých plotů biologického materiálu. Tato doporučení jsou vypracována Světovou zdravotnickou organizací. Je-li součet trojnásobně negativní, diagnóza není potvrzena.
  3. V současné době existuje kromě metody PCR i přesnější test nazvaný TMA (metoda transkripční amplifikace). Jeho prah citlivosti je mnohem vyšší než u jiných diagnostických technik.

Rozsah zjištěných změn virů

V této fázi vývoje genetiky je známo několik typů a variant modifikace virů.

Laboratorní diagnostika v naší zemi se 100% přesností určuje následující genotypy:

Vlastnosti kvantitativní analýzy PCR

Kvantitativní analýza je definice viru hepatitidy C v lidském těle. Během studie se RNA a virové zátěž ve výchozím materiálu stanoví pomocí PCR. Jinak lze říci, že test nám umožňuje zjistit, kolik virových buněk je v biologické tekutině. Pro tento typ studie se používá pouze žilní krve. Neexistuje žádná konkrétní příprava na test.

Kvantitativní analýza umožňuje sledovat léčbu, která již byla zahájena, a zhodnotit její účinnost. Pro vyhodnocení si vezměte testovací data před a během léčby. S pomocí získaných výsledků lze předpovědět průběh onemocnění.

Pokud je zvolená metoda léčby úspěšná po 3 měsících, množství RNA by se mělo snížit několikanásobně. Podle doporučení se kvantitativní analýza provádí jednou, pak o tři a šest měsíců později. Poslední výsledek s úspěšnou léčbou by měl být negativní.

Hodnocení výsledků kvantitativního PCR testu

V naší zemi existují 2 možné možnosti hodnocení výsledků kvantitativního PCR testu:

  • počet kopií biologické tekutiny na mililitr;
  • počet mezinárodních jednotek na mililitr.

Pro získání mezinárodních jednotek je počet kopií rozdělen na 4.

Existují dvě úrovně stresu nebo viremie:

  • vysoká s PCR nad 800 000 IU / ml;
  • nízká s PCR nižší než 400 000 IU / ml.

Výsledkem kvantitativního testu jsou 2 možnosti:

  • "Pod měřicí rozsah";
  • "Nezjištěno" (negativní).

Skóre: "pod měřicím rozsahem"

Tento závěr vzniká, když kvantitativní test RNA nezjistil buňky příčinného faktoru hepatitidy C ve výchozím materiálu, ale virus je stále přítomen v krvi. Spolehlivost testu je potvrzena kvalitativní metodou, neboť prahová citlivost kvantitativního testu nemůže detekovat malé hodnoty a koncentraci patogenu.

Hodnocení: "nebyl nalezen"

Tento závěr by se měl učinit, pokud nebyly v diagnostice detekovány v počátečním materiálu HCV RNA viry, což je negativní výsledek.

Interpretace výsledků kvantitativního testu PCR

Pomocí indikátoru virové zátěže určete:

  • stupeň zanedbání této nemoci;
  • jak je infekce pacienta;
  • účinnosti antivirové léčby.

Čím vyšší jsou indexy viru hepatitidy C v těle, tím nebezpečnější je pacient pro okolní lidi a čím je progresivnější jeho nemoc.

PCR pro hepatitidu C je důležitou metodou diagnostiky, zejména v terapeutickém procesu. Kvůli přijatým negativním nebo pozitivním výsledkům je možné zhodnotit jejich účinnost, úplně vyléčit pacienta nebo zkrátit dobu léčby.

Autor: Petrunina Svetlana Sergeevna,
zdravotní sestra intenzivní péče,
specializace - akutní otravu, resuscitaci,
zejména pro moizhivot.ru

Užitečné video o polymerázové řetězové reakci

Gastroenterologové ve vašem městě

Vyberte město:

Kvalitativní analýza polymerázové řetězové reakce - PCR pro hepatitidu C určuje přítomnost nebo nepřítomnost HCV v těle. V laboratoři se studuje struktura RNA, v níž se virus nachází. Pokud je zjištěn virus C, je nutné podstoupit léčbu, protože zanedbávaná jaterní choroba vede k vážným následkům. Kvalitativní PCR se provádí po zotavení za účelem potvrzení nepřítomnosti protilátek. Jmenován a pro preventivní vyšetření. Při nízké koncentraci patogenu v krvi nemůže PCR (kvalitativní) detekovat nic, protože diagnostický systém má své prahy citlivosti. V případě počátečního stadia onemocnění nebo mírné formy je PCR nakonec diagnostikována pomocí ultrazvuku.

Co je RNA virus?

Termín RNA viru hepatitidy C (nebo RNA viru hepatitidy C) se nazývá samotné onemocnění jater. Virus C se váže na zdravou tělesnou buňku a proniká dovnitř. Časem se šíří po celém těle, je to jen dostat se do krve. Výsledkem je, že patogen proniká játry, spojí se s buňkami a tvrdě pracuje. Hepatální buňky (hepatocyty) pracují pod jeho vlivem, podstupují změny a z tohoto zahynou. Čím delší je virus C v játrech, tím více buněk zemře. Postupně se rozvíjejí nebezpečné nemoci, které vedou ke zhoubné degeneraci a smrti.

Infekce jater s tímto typem viru se nemůže projevit jakýmkoliv způsobem externě. Po mnoho let nebo desítek let se nakažená osoba cítí naprosto zdravá a pouze náhodná vyšetření nejčastěji odhaluje patologii. Při darování krve na hepatitidu se zkoumá část řetězce RNA (ribonukleové kyseliny), která je součástí lidského genu (DNA). Výsledky laboratorního výzkumu by neměly být používány pro sebe-léčbu, protože to je pouze indikátor. Lékař určí přesný obraz a další diagnózu.

Po dokončení: svědectví o studii

Pro potvrzení HCV je přiřazena PCR analýza (polymerázová řetězová reakce). Studie PCR pomáhají najít patogenní materiál ve struktuře RNA a předepisovat účinnou terapii. Jsou jmenováni v následujících případech:

  • identifikace příznaků zánětu jater;
  • screeningové studie prevence;
  • vyšetření osob v kontaktu;
  • diagnóza hepatitidy smíšeného původu (definice hlavního patogenu);
  • Stanovení úrovně aktivity reprodukce viru v chronické formě;
  • cirhóza jater;
  • k určení účinnosti předepsané léčby.

Studie PCR jsou určeny lékařem k určení účinnosti průběhu léčby hepatitidy.

Existuje kvalitativní i kvantitativní analýza PCR. Kvantitativní PCR ukazuje procento RNA s nosiči viru v krvi a kvalitativní PCR indikuje přítomnost nebo nepřítomnost viru. Pozitivní ukazatel kvality (přítomnost hepatitidy C RNA) také vyžaduje kvantitativní studium. Vysoká koncentrace patogenu hepatitidy C je spojena s rizikem přenosu, tj. S kontaminací ostatních. Nízké množství je lépe zacházeno. Množství RNA virů v krvi nesouvisí s intenzitou onemocnění. Analýza PCR se provádí také v případě terapie interferonem, aby se předepsal trvání a složitost průběhu léčby.

Vlastnosti kvalitativní analýzy PCR pro hepatitidu C

Kvalitativní analýza s indexem polymerázové řetězové reakce je přiřazena všem pacientům, kteří mají v krvi protilátky proti hepatitidě C. Kdo se zotavil a získal zpět, měl by být opětovně testován. Doporučuje se předat analýzu hepatitidy B, pak v případě pozitivního závěru a na hepatitidě D. Také kvalitativně analyzovaná reakce by měla být provedena ve spojení s jinými krevními testy. Analýzy ukazují kompletní obraz šíření viru.

Z výsledků testů bude vidět pouze pozitivní test na hepatitidu C nebo negativní, tj. Přítomnost nebo nepřítomnost viru. Pokud je závěr "zjištěn", pak je virus aktivně i nadále aktivní. Označení "nebylo nalezeno" označuje nepřítomnost viru nebo jeho malé množství. S tímto indikátorem bychom měli vzít v úvahu skutečnost, že analytická citlivost diagnostických systémů je odlišná a hepatitida C RNA může být stále v krvi, ale v analýze se nezjistila.

Zvláště citlivá metoda PCR s ultra-hepatitidou C se odhaluje i v nepatrných množstvích. Používá se hybridizační fluorescenční studie, která je mnohonásobně vyšší než standardní PCR systémy. Metoda se používá v několika případech:

  • podezření na skryté formy hepatitidy C;
  • Diagnostika PCR nebyla patogenem potvrzena, ale existují protilátky;
  • v případě využití;
  • identifikovat počáteční stadium infekce.

Vysvětlení analýzy

Stanovení RNA viru hepatitidy C polymerázovou řetězovou reakcí.

Konečné rozhodnutí v diagnóze je ovlivněno PCR dekódováním HCV, zejména s ultrametodou. Hlavním nedostatkem tohoto výzkumu je přísné dodržování sterilních podmínek pro vzorek a materiály. Malá odchylka někdy ukazuje nepřesné závěry analytika, komplikuje diagnózu a následnou léčbu. Analýza PCR pro stanovení RNA viru hepatitidy ne vždy ukazuje obraz choroby s důvěrou, někdy jsou připuštěny nepřesnosti v obou směrech.

Při diagnostice viru hepatitidy se doporučuje provést komplexní vyšetření.

Norma indikátorů

Absence JgM protilátek proti RNA ve virové hepatitidě C je považována za normu při analýze polymerázové řetězové reakce. Současně zjištění sérologické analýzy naznačují přítomnost protilátek proti viru C a to je také v mezích normy. Kvalitativní definice neukazuje intenzitu onemocnění, pouze odhaluje příčinný účinek hepatitidy C v RNA. Taková analýza se opakuje po ošetření, aby se potvrdilo skutečné uzdravení.

Odchylky

Pokud jsou přítomny protilátky JgM proti HCV RNA, znamená to rozvoj infekce. Nemoc je akutní nebo chronická, projevuje se v různých fázích. Pokud dojde k poklesu počtu protilátek, bude analýza indikovat dosažení výsledků léčby během regenerace. Existují extrémně vzácné případy falešně pozitivních nálezů v diagnostice. Objevují se u žen během těhotenství a u lidí s jinými infekčními nemocemi.

Studie PCR pro hepatitidu C: typy, indikace, přepis

Virová hepatitida C je vážné onemocnění, které se objevuje při poškození jater. U osmdesáti procent pacientů přechází do chronické formy. Vírus se množí v jaterních buňkách - hepatocytech - a způsobuje jejich smrt. Mrtvé tkáně jsou nahrazeny ložisky pojivové tkáně, fibróza se vyvíjí.

S rozvojem fibrózy jater, je schopen plnit svou funkci, začíná cirhóza, což je nebezpečné pro jeho komplikací: zvyšující se tlak v portální žíle, gastrointestinální krvácení, poruchy srážlivosti krve, mentální změny kvůli poškození mozku jádra toxických produktů.

Příčinou onemocnění je infekce virem z rodiny Flaviviridae, což je typ viru RNA. To znamená, že genetický materiál, kterým jsou syntetizovány proteiny patogenu, je kódován molekulou ribonukleové kyseliny. Infekce nastává skrze krev, sexuálně a od těhotné ženy až po plod. Bohužel mezi infekcí a počátkem produkce protilátek může proběhnout poměrně velká doba - od dvou týdnů do šesti měsíců. To neumožňuje stanovení infekce metodou enzymového imunoanalýzy a zahájením léčby v časných stádiích.

Co je analýza PCR?

PCR je metoda molekulární analýzy, která umožňuje detekci genetického materiálu patogenu již v prvním týdnu po infekci za použití polymerázové řetězové reakce. Studie má vysokou specificitu, přesnost a umožňuje nejen stanovit přítomnost nebo nepřítomnost viru, ale i jeho koncentraci a genotyp.

Pro studii si vezměte pacientovu krev, v níž se může potenciálně nalézt RNA viru. Krev se přidá primerů - uměle syntetizované krátké délce části požadovaného genu a RNA polymerázu - speciální enzym, který násobí množství genetického materiálu patogenu. Pomocí speciálního přístroje se provádí několik cyklů vytápění a chlazení. Materiál je pak analyzován a porovnán se známými virovými geny, na základě kterých se dospěje k závěru o přítomnosti nebo nepřítomnosti infekce.

Typy PCR analýzy pro hepatitidu C

Existují tři typy analýzy PCR:

  1. Kvalitativní analýza PCR. První fáze studie. Umožňuje vám identifikovat genetický materiál viru v krvi.

  • Kvantitativní analýza PCR. Umožňuje určení virové zátěže - koncentrace genetického materiálu patogenu v jednom mililitru krve. Tato studie se provádí před zahájením léčby a poté v první, čtvrté, dvanácté a (pokud je kurz dlouhý) ve dvacátém čtvrtém týdnu léčby, aby se vyhodnotila jeho účinnost.

  • Genotypizace. Příčinný faktor hepatitidy C se často a rychle mění. Na planetě bylo nalezeno sedm variant genotypu tohoto viru. V Rusku jsou společné první, druhé a třetí typy. Každý z genotypů má jinou rezistenci k terapii, například účinnost léčby prvního typu je šedesát procent a pro druhý a třetí dosahuje osmdesát pět. Proto, aby bylo možné vybrat vhodná léčiva a předepsat dostatečnou dobu trvání léčby, je nutné přesně určit, jaký typ viru je pacient infikován.
  • Indikace pro analýzu PCR pro hepatitidu C

    Studie PCR je předepsána v následujících případech:

    • kontakt s nemocnou, která by mohla vést k infekci;
    • pozitivní imunoanalýza spojená s enzymem;
    • příznaky jaterní cirhózy: změny velikosti jater, zvětšení sleziny, výskyt podkožního žilního plexu na břiše;
    • výskyt příznaků poškození jater: bolesti na pravé straně břicha, zožnění kůže;
    • zvýšená aktivita ALT a AST v biochemické analýze krve;
    • před zahájením léčby k určení virové zátěže;
    • sledovat účinnost antivirové léčby;
    • po dokončení léčby k monitorování relapsu;
    • v přítomnosti diagnostikované hepatitidy B, aby se vyloučilo smíšené poškození jater.

    Dekódování studie PCR pro hepatitidu C

    Dekódování analýzy PCR a enzymového imunoanalýzy pro hepatitidu C by mělo být řešeno specialistou na hepatologii nebo na infekční nemoci. Analýza výsledků PCR je nezbytná v kombinaci s biochemickým vyšetřením krve, biopsií a ultrazvukem. Pouze kvalifikovaný lékař bude schopen analyzovat výsledky studií a na základě nich předepsat správnou léčbu.

    Dekódování kvalitativní analýzy.

    Genetický materiál patogenu byl nalezen v analyzovaném biologickém materiálu. Infekce je potvrzena.

    Neexistuje žádná infekce nebo množství RNA patogenu je pod hranicí citlivosti.

    Dekódování kvantitativní analýzy.

    Normální postava pro zdravé lidi. To znamená, že v testovaném materiálu není přítomna žádná RNA hepatitidy C nebo její koncentrace je pod prahem citlivosti studie.

    Koncentrace RNA je nižší než rozsah kvantifikace. Takové výsledky jsou interpretovány velmi opatrně, korelují je s údaji jiných studií, často provádějí druhou studii.

    Úroveň virové zátěže v dané koncentraci je považována za nízkou. Obvykle snížení množství viru znamená, že terapie je úspěšná.

    Více než 8 * 10 ^ 5 IU / ml

    Úroveň virové zátěže v dané koncentraci je považována za vysokou.

    Více než 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

    Množství RNA je nad horní hranicí rozsahu kvantifikace. Závěry o stupni virové zátěže s tímto výsledkem nejsou možné. Obvykle se v takových případech opakuje test s ředěním vzorku krve.

    Dekódování genotypizace.

    Byla detekována RNA specifického genotypu

    V biomateriálu je detekován virus hepatitidy C specifického genotypu a podtypu. Výsledek je kódován římskými číslicemi a latinkou, například - 1a, 2b. Existuje sedm genotypů a šedesát sedm podtypů, ale v Rusku existují pouze tři první typy.

    RNA virové hepatitidy C byla detekována

    V krvi se RNA nachází v Rusku vzácným genotypem, který nelze přičíst prvnímu, druhému nebo třetímu typu. Je zapotřebí více výzkumu.

    Tento výsledek naznačuje, že pacient je zdravý, nebo že úroveň RNA patogenu je příliš malá.

    Situace je možná, pokud je analýza PCR pro hepatitidu C negativní a enzymový imunotest detekuje protilátky proti viru. To znamená, že pacient měl v akutní formě hepatitidu C a uzdravil se. Přibližně dvacet případů infekce vede k spontánnímu vyléčení, pokud tělo pacienta vykazuje dostatečnou odolnost proti infekci.

    Navzdory skutečnosti, že PCR je velmi přesná analýza, její výsledky mohou být zkresleny v následujících situacích:

    • krev byla transportována do laboratoře za nevhodných podmínek, teplotní režim byl porušen;
    • byl vzorek biomateriálu kontaminován;
    • v krvi byly zbytky stop heparinu a dalších antikoagulancií;
    • Ve zkoumané látce byly inhibitory - látky, které zpomalují nebo zastavují polymerázovou řetězovou reakci.

    Výhody PCR v porovnání s jinými metodami

    1. Diagnóza v počátečních fázích. PCR detekuje genetický materiál vyvolávajícího onemocnění. Pomocí analýzy imunofluorescence lze stanovit pouze imunoglobuliny - látky, které organismus produkuje v reakci na infekci. V případě infekce způsobené hepatitidou C může být interval mezi infekcí a nástupem imunitní odpovědi několik týdnů a měsíců, kdy bude ELISA neúčinná. PCR poskytne odpověď už v prvním týdnu po infekci.

  • Nízká pravděpodobnost chyby. Ve studovaném materiálu se určuje genetický materiál, který je charakteristický pouze pro jeden typ patogenů. To vám umožňuje vyloučit falešné výsledky. Při ELISA jsou možné chyby, protože stejný druh protilátek lze uvolnit proti různým virům - takové protilátky se nazývají zkřížené reakce.

  • Vysoká citlivost. PCR může detekovat RNA patogenu i v minimálních množstvích. To umožňuje identifikovat skryté infekce.
  • Jak se připravit na dodávku krve pro výzkum PCR

    Pro analýzu PCR se pro hepatitidu C sbírá venózní krev. Obvykle se z pacientovy žíly najednou odeberou dvě části krve: první se odešle pro PCR a druhá pro ELISA. To se provádí, aby bylo možné přesněji posoudit, jak špatně je pacient infikován tímto virem a jak proti němu bojuje imunita.

    Obvykle jsou pro pacienta vyžadována následující pravidla:

    • vyšetření krve se odebere ráno;
    • přestávka mezi posledním jídlem a dodávkou krve by měla být osm až deset hodin;
    • dva nebo tři dny před analýzou se musíte vzdát smažených a mastných potravin a alkoholu;
    • po dobu čtyřiadvaceti hodin před analýzou by se pacient měl vyhnout fyzické námaze: nemají váhy, nechodí do tělocvičny nebo do bazénu.

    Ptsr nebyl detekován hepatitidou

    "Detekce genů viru hepatitidy C (HVC) v krvi pacienta je druhým stupněm laboratorní diagnostiky této infekční patologie. Pro detekci činidla, které nemá buněčnou membránu a tedy povrchové antigeny, se používá metoda polymerázové řetězové reakce. S pomocí této metody je přímo molekulou, ve které jsou všechny jeho genetické informace kódovány - RNA.

    RNA - Ribonukleová kyselina spolu s DNA je součástí buněk všech živých organismů. Virus hepatitidy C obsahuje molekulu RNA a má schopnost mutovat ji.

    Studie na přítomnost genomu HVC se obvykle provádí po provedení obecného biochemického krevního testu a získání pozitivní protilátkové odpovědi (anti-HVC).

    Co to znamená?

    Výzkum na protilátky proti HVC je promítání, to znamená, že může být použita pro zkoumat velké množství lidí (lékaři, těhotné ženy, nemocničních pacientů, dárců, injekční uživatelé drog, HIV-pozitivní). Negativní výsledek laboratorní analýzy anti-HVC naznačuje, že nedošlo k žádné imunitní odpovědi na virus v krvi subjektu. V takových případech lze získat negativní výsledek:

    Pokud osoba nikdy nebyla infikována hepatitidou C.

    Pokud je citlivost laboratorního testovacího systému nižší než koncentrace anti-HVC.

    Pokud se infekce vyskytla méně než před 2 měsíci a anti-HVC v krvi stále není dost k určení. S falešně negativní odpovědí kvůli lidskému faktoru.

    Pokud se získá výsledek, že protilátky proti HVC u pacienta detekována, to znamená, že se virus hepatitidy C je v těle subjektu v době průzkumu nebo měl krev před časem. Pokud pozitivní výsledek pro anti-HVC existuje potřeba dalších laboratorními testy, které detekují genetický materiál patogenu, se stanoví koncentrace svých genů (virová zátěž, virémie) a stanovit genotyp.

    Analýza RNA viru hepatitidy C

    Genom HVC v laboratoři lze zjistit pomocí několika studií:

    rozvětvená DNA (p-DNA);

    transkripční amplifikace (TMA);

    polymerázová řetězová reakce (PCR).

    Metoda p-DNA je nenákladná a jednoduchá metoda pro detekci virového genomu u velkého počtu dotazovaných lidí. Jeho hlavní nevýhodou je nízká citlivost: detekuje HVC pouze při koncentraci nad 500 IU / ml.

    Metoda transkripční amplifikace detekuje nukleové kyseliny viru v krevním séru. Analýza má vysokou citlivost (5-10 IU / ml), ale dosud nebyla dostatečně zavedena do všudypřítomné laboratorní praxe.

    Metoda PCR v Rusku je nejběžnější a cenově dostupné laboratorní vyšetření s vysokou citlivostí (od 50 do 60 IU / ml).

    Test PCR se provádí v libovolné klinické laboratoři, která má příslušnou akreditaci. Velmi důležitá nuance této diagnostické metody, která ovlivňuje výsledek analýzy, je citlivost zkušebního systému používaného v laboratoři. Například citlivost diagnostiky 60 IU / ml, jako v laboratořích Invitro, umožňuje detekovat virovou RNA 3 měsíce po infekci. Při nízké citlivosti testovacího systému nemohou být geny patogenu detekovány ani po 4 měsících po infekci.

    RNA viru hepatitidy C: metoda PCR

    Metoda PCR má mnoho výhod oproti jiným laboratorním testům pro detekci genů HVC:

    vysoká citlivost. Metoda umožňuje stanovit genetický materiál patogenu i při jeho minimální koncentraci ve vzorku;

    větší specifičnost. Identifikuje geny viru specifického genotypu mezi různými DNA a RNA jiných patogenů, což umožňuje genotypizaci patogenu;

    provádění rychlosti. Absence dlouhého procesu kultivace patogenu snižuje dobu získání výsledku až na několik hodin; univerzálnost analýzy.

    Univerzální postup pro studii umožňuje současné použití jednoho vzorku lidské krve k detekci genetického materiálu různých patogenů. Tyto výhody umožňují považovat PCR za "zlatý standard" laboratorní diagnostiky virové hepatitidy C společně s enzýmovým imunoanalýzou anti-HVC.

    PCR je studie používaná k určení genů HVC v krvi vyšetřované osoby. Studie se skládá z několika etap:

    Odběr vzorků biomateriálu.

    Vynásobte zvýšení koncentrace kopií RNA ve vybraném vzorku.

    Detekce genetického materiálu pomocí speciálních testovacích systémů.

    Po odběru žilní krve pacient podstoupí umělé zahájení procesu opakované replikace (zesílení, kopírování) genů HVC.

    Pro tento účel se teplota uvnitř zkumavky s biologickým materiálem několikrát mění určitým způsobem. Když počet kopií RNA v trubici dosáhne požadované hodnoty, patogen se detekuje pomocí speciálních diagnostických testů.

    kvalita (detekuje přítomnost viru),

    kvantitativní (určuje koncentraci virových genů na jednotku objemu)

    genotypický (stanoví genotyp patogenu).

    RNA hepatitidy C: kvalitativní analýza

    Úkolem kvalitativní PCR je stanovit přítomnost HVC v prezentovaném biomateriálu. Tato studie se obvykle provádí pro screening diagnózy onemocnění nebo identifikaci nosiče. Přiřaďte ho poté, co je detekován anti-HVC metodou ELISA.

    Pro diagnostiku hepatitidy C stačí dostatečně detekovat HCV genetický materiál kvalitativně, to znamená bez počítání jeho koncentrace v objemu krve. Výsledkem kvalitativní PCR může být: "detekována RNA" nebo "nebyla detekována RNA".

    Přesnost metody odpovídá 95%. Současně dosahuje přesnost testovacích diagnostik 100% a 5% je lidský faktor, který je vždy přítomen v laboratorních studiích. Aby se zabránilo falešně negativní analýze, zejména u lidí s nízkou viremií, je nezbytná vysoká citlivost diagnostického systému použitého ve studii. Citlivost zkušebního systému by neměla být nižší než 60 IU / ml.

    RNA hepatitidy C: kvantitativní analýza

    Kvantitativní analýza je předepsána, když je nutné znát úroveň viremie v lidském těle. Indikace pro tuto studii jsou:

    pozitivní výsledek kvalitativní PCR za předpokladu, že jsou detekovány protilátky proti viru;

    stanovení stupně patologie;

    definice virové zátěže v hepatitidě;

    výběr kombinace antivirotik;

    Monitorování virové odezvy na probíhající antivirovou terapii;

    zhodnocení pravděpodobnosti přechodu akutní hepatitidy C na chronickou.

    Výsledek analýzy je vyjádřen v IU / ml (mezinárodní jednotky v 1 ml séra) nebo v kopiích / ml (počet kopií virových genů v 1 ml séra). Kvantitativní PCR nemá žádnou normu: normální gen HVC v lidské krvi by neměl být detekován. Výsledky průzkumu se porovnávají s referenčními hodnotami stanovenými pro daný stupeň virové zátěže.

    Ukazatele (v IU / ml):

    nižší než 4 × 10 * 5 jsou považovány za nízkou viremii;

    od 4 × 10 * 5 do 8 × 10 * 5 - střední;

    více než 8 × 10 * 5 - vysoké.

    Čím více kopií virové RNA v krvi, tím agresivnější je onemocnění a tím větší riziko přenosu viru na jiné. Avšak úroveň virové zátěže není jediným ukazatelem, který ovlivňuje závažnost průběhu patologie a další prognózu pro pacienta: genotyp patogenu je také důležitý.

    Stanovení genotypu je nezbytné pro stanovení správného léčebného režimu. Určuje také prognózu zdraví a života pacienta. Například virus 3 genotypu často vede k fibróze nebo cirhóze jater, ve srovnání s pacienty nesoucími 1 genotyp.

    Hepatitida C: analýza a interpretace

    RNA diagnostika hepatitidy C nemohou být umístěny pouze na základě výsledků pouze kvalitativní a / nebo kvantitativní analýza PCR: HVC a stanovení virové zátěže, nestačí k přiřadit odpovídající antivirové terapie. Potenciální pacient musí být podrobně vyšetřen (klinicky, laboratorně, instrumentálně), aby měl objektivní obraz patologie. Správně přiřadit komplexní vyšetření pro diagnostiku hepatitidy C, a pak se inteligentně dešifrovat výsledky mohou být pouze lékař.


    Následující Článek

    Jaká je nejhorší hepatitida?

    Související Články Hepatitida